着色食品と定量的食物摂取の試金を提供、高スループット意味摂食意欲を評価します。Thermogenetic と食料消費分析を組み合わせて光の画面は大人で食欲の神経回路を調査するための強力なアプローチとキイロショウジョウバエ。
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方法論記事
定量的食物摂取の試金を組み合わせると強制的にショウジョウバエの食欲を勉強するニューロンを活性化
* These authors contributed equally
この記事について
サマリー
要約
食糧消費は、生理学的状態、嗜好、食品、および開始または給餌を停止するコマンドを発行の栄養の内容を統合する脳の厳格な管理下です。タイムリーかつ適度な送り制御に関連する生理学的な心理的な障害の理解に運ぶ主要な含意を餌の意思決定の基礎となるプロセスを解読します。単純な定量的、かつ堅牢な方法特定のターゲットのニューロンの活動を強制的に増やすなどの実験操作の後動物の食物摂取を測定する必要があります。大人のショウジョウバエの送り制御の遺伝研究を促進する色素ラベルに基づく摂食アッセイを紹介しました。利用可能な供給アッセイを確認して、thermogenetic を組み合わせて分析し、色素ラベル食品摂取量試金の摂食刺激を制御する神経細胞の光遺伝学的操作のセットアップから順を追って手法を述べる。利点と読者適切な試金を選択するために、他の餌アッセイと比較して, 本手法の限界についても述べる。
概要
食品摂取量の定量化は餌 (飢餓状態) などで必要な内部および外部要因 (食品の品質および食味) など1,への応答では、脳によるコントロールのさまざまな側面を評価するために重要です2,3,4,5,6,7,8,9. 近年、ショウジョウバエの送り制御の神経基盤を解読の努力は直接摂取食品の量を定量化したりモチベーションを餌の指標として複数のアッセイの開発につながる10,11,12,13,14,....
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プロトコル
1. 供給区域を準備し
注:染料ラベル供給の試金のため餌の商工会議所は、2 部構成: (カバー) と外のコンテナーと内側 (食物) としてコンテナー。
- (31.8 mm の内部の直径) と 80 mm の高さを持つショウジョウバエを培養するためガラスの瓶から外のコンテナーを変更 (図 1 a, 1 C)。餌のセットアップを正しく保つために 1% の agarose (5 mL) の層で容器の底加湿歩く (図 1 b) 時にハエの柔らかい基質として機能でカバー。コンテナーはそれにより最小限のストレスやハエに外乱を運ぶ制御するが、自然主義的な設定を提供します。
- 外の容器を準備します。頻繁に撹拌、熱、二重蒸留水を 50 mL の agarose の 0.5 g を中断し、沸騰熱板取付けマグネチックスターラーで完全に溶解します。
- とき約 60 ° C に 1% のアガロース冷却 5 mL の 1% の agarose を空のコンテナー (図 1 b) の外部に転送し、コンテナーは、アガロース パッドを生成するための部屋の温度に冷却するまで開いたまま。 <....
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結果
Thermogenetic 画面。
食欲異常増加が高い食物摂取、生理的欲求に関係なく発生します。高スループットを設計するこの方式を利用神経細胞の遺伝的ハンドルを取得行動画面飢餓に関連、飽食状態 (図 1)。画面には、餮 Gal424が得られました。餮 Gal4ニューロンが 30 ° C で強制的にアクティブ化されたとき、餮 > TrpA1 (図 2、図 3) コントロールよりも食品の摂取のより多くの数量を飛ぶ。
食品消費量を視覚的に得点。
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ディスカッション
このレポートは、thermogenetic のコンテキストにおける食料消費の染料ラベル供給の試金の技術的なプロセスに焦点を当てと神経細胞を操作する光遺伝学的活性化制御を供給します。このシンプルで信頼性の高いプロトコルは、候補送り制御、ハエ、嗜好を測定し、供給ベース遺伝的画面24を介して給電制御回路の新規プレーヤーを識別するニューロンの働きを解明するのに役立ちます。
戦略を標識色素は、短期的な摂食行動を調査不可能です。染料、erioglaucine ナトリウムに溶解し、食物と一緒に摂取は、食生活の重要な指標です。デシュパンデらを示した青い色素自体がカフェ アッセイと分類の食品摂取量の試金17放射性同位体の両方で測定したときの供給に及ぼす影響を示さなかった。同様に、ハエが色素標識または色素フリーの食品に対する彼らの反応に大きな違いを起こしません (色素標識または色素フリーの 100 mM ショ糖液とハエの脚を刺激) あたり結果が示されます。ただし、染料がショウジョウバエの味.......
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開示事項
著者は競合する金銭的な利益を宣言しません。
謝辞
この仕事は基本的な研究プログラムの中国国家 (2012CB825504)、国家自然科学基金、中国の (91232720 および 9163210042)、中国アカデミー科学 (CAS) の (GJHZ201302 および QYZDY SSW SMC015) 部分で支えられましたビルとメリンダ ・ ゲイツY. 朱の ca 財団 (OPP1119434)、および 100 の才能プログラム。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| UAS-CsChrimson | Bloomintoon | 55135 | |
| UAS-dTrpA1 | Bloomintoon | 26263 | |
| TDC1-GAL4 | ブルーミントゥーン | 9312 | |
| TDC2-GAL4 | ブルーミントゥーン | 9313 | |
| sNPF-GAL4 | Z. Zhao 提供 | ||
| Y. Rao 提供 | TH-GAL4 | ||
| Y. Rao 提供 | |||
| 5-HT-GAL4 | Y. Rao 提供 | ||
| AKH-GAL4 | Y. Rao 提供 | ||
| dip2-GAL4 | Y. Rao | ||
| Taotie-GAL4 | J. Carlson | ||
| Agarose | Biowest | G-10 | |
| スクロース | Sigma | S7903 | |
| エリオグラウシン二ナトリウム塩 | Sigma | 861146 | |
| all-trans-retinal | シグマ | 暗闇に保存された | R2500 |
| トリトンX-100 | アムレスコ | 9002-93-01 | |
| フライフード | 1L食品に含まれるもの:77.7 gコーンミール、32.19 g酵母、5 g寒天、0.726 g CaCl2、31.62 gスクロース、63.2 gグルコース、2 gソルビン酸カリウム、pH | ||
| 1x PBSバッファ | 1 L 1X PBSに含まれるもの:Nacl 8 g、Kcl 0.2 g、Na2HPO4、0.24 g KH2PO4、pH 7.4 | ||
| PBST バッファー | 1X PBS、1% Triton X-100 | ||
| 粉砕機 | Shang Hai Jing Xin | Tissuelyser-24 | |
| インキュベーター | Ning Bo Jiang Nan | HWS-80 | |
| ヒートプレート付きマグネチックスターラー | Chang Zhou Bo Yuan | CJJ 78-1 | |
| 分光計 | Thorlabs | CCS200/M | |
| マイクロプレート分光光度計 | Thermo Scientific | Multiskan GO Type: 1510, REF 51119200 | |
| 蛍光実体顕微鏡 | ライカ | M205FA | |
| 実体顕微鏡 | ライカ | S6E | |
| 直径 | 31.8 mm、高さ80 mmのJiang Su Hai Menガラスバイアル(内寸) | ||
| コンテナ内 | 13.6 mm、高さ7.5 mm(内寸) | 北京李蘭機械工場 | |
| 1.5 mL EppendorfチューブHai | Men Ning Mong | ||
| 96ウェルプレート | コーニングインコーポレイテッド | Costar 3599 | |
| LED | Xin Xing Yuan Guangdian | 607 nm, 3W | https://item.taobao.com/item.htm?id=20158878058 |
参考文献
- Gao, Q., Horvath, T. L. Neurobiology of feeding and energy expenditure. Annu Rev Neurosci. 30, 367-398 (2007).
- Bjordal, M., Arquier, N., Kniazeff, J., Pin, J. P., Leopold, P. Sensing of amino acids in a dopaminergic circuitry promotes rejection of an incomplete diet in....
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再版と許可
