Un procedimiento integral para evaluar el rendimiento In Vitro de la neovascularización de Hemangioblastoma putativo con el esferoide brotación ensayo

Summary

Este trabajo presenta un procedimiento general para evaluar en vitro si angiogénesis tumoral clásico existe en los hemangioblastomas (HBs) y su papel en HBs. Los resultados destacan la complejidad de la neovascularización de la HB y sugieren que esta forma común de angiogénesis es solamente un mecanismo complementario en la neovascularización de la HB.

Abstract

La inactivación del gen de supresor de tumor von Hippel-Lindau (VHL) desempeña un papel crucial en el desarrollo de hemangioblastomas (HBs) en el sistema de nervioso central (SNC) humano. Sin embargo, el origen citológico y el proceso evolutivo de HBs (incluyendo el neovascularization) siguen siendo polémicas, y anti-angiogénesis para la BVS-HBs, basados en el clásico HB angiogénesis, han producido resultados decepcionantes en ensayos clínicos. Un obstáculo importante para la traducción clínica exitosa de tratamiento vascular es la falta de un conocimiento profundo del neovascularization en este tumor vascular. En este artículo, presentamos un procedimiento general para evaluar en vitro si angiogénesis tumoral clásico existe en HBs, así como su papel en HBs. Con este procedimiento, los investigadores pueden comprender la complejidad de la neovascularización de la HB con precisión e identificar la función de esta forma común de la angiogénesis en HBs. Estos protocolos pueden utilizarse para evaluar la terapia vascular más prometedor para los tumores, que tiene alto potencial traslacional para tratamiento de tumores o para ayudar en la optimización del tratamiento anti-angiogénico para HBs en el futuro las traducciones. Los resultados destacan la complejidad de la neovascularización de la HB y sugieren que esta angiogénesis forma común es solamente un mecanismo complementario en la neovascularización de la HB.

Introduction

(HBs) los hemangioblastomas son tumores vasculares benignos que se encuentran exclusivamente en el sistema de nervioso central (SNC) humano. Se desarrollan en pacientes con enfermedad de von Hippel-Lindau (VHL) o lesiones esporádicas. BVS-HBs son difíciles de curar a través de tratamiento quirúrgico debido a la frecuente repetición y lesiones múltiples que resultan de esta genética desorden¹. Aunque la inactivación del gen supresor VHL tumor se ha considerado la causa principal de la tumorigénesis de BVS-HBs, el origen citológico (incluyendo el neovascularization) y el proceso evolutivo de HBs siendo polémico en gran parte²

Protocol

Este método fue realizado según las directrices aprobadas y regulaciones de la investigación ética Comité de Huashan Hospital, Universidad de Fudan. Correspondientes medidas de seguridad estándar se siguieron en cada paso. Una presentación esquemática, por favor consulte la figura 1.

1. cultura y construcción del plásmido de la célula

1. Habitualmente, mantener las células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC) en Dulbecco de modificado medio del águila (DMEM) suplementado con 10% suero bovino fetal (FBS), 100 unidades/mL de penicilina y 100 μg/mL de estreptomicina en un 5% humidificado incubadora de CO_2<....

Results

Imágenes originales son tomados por microscopio de luz invertida. Las imágenes típicas del grupo control y el grupo de la BVS se muestran en la figura 2-A1 y figura 2-A2. La longitud de brote del grupo de control es más corta que el del grupo VHL.

Después de subir las imágenes, la plataforma online ofrece análisis de resultados directam.......

Discussion

Recientemente, varios campos de investigación de la biología vascular fueron estimulados por el estudio del endotelio angiogénicos¹⁵. En este artículo, hemos desarrollado un esferoide endotelial brotación técnica como un modelo experimental para estudiar la formación de vasos que origina la pérdida del gen VHL de función en las células endoteliales manipuladas para identificar moléculas de nuevo candidato de la cascada angiogénica. A lo mejor de nuestro conocimiento, éste es el primer informe para.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
célula endotelial de la vena umbilical humana	Fudan IBS Cell Center	FDCC-HXN180
dulbecco' Es un águila modificada' s medio	Gibco	11995040
suero fetal bovino	Gibco
PLKO.1-puro vector	Addgene	#8453
empaquetamiento plásmido psPAX2	Addgene	#12260
plásmido de envoltura pMD2.G	Addgene	#12259
3D de fondo redondo placas de 96 pocillos	S-Bio	MS-9096M
matrigel	BD Biosciences	354234
medio Opti-MEM	Gibco	31985-070	medio de suero reducido
Placa de 15 pocillos	Ibidi	81501	Las burbujas de aire en el gel se pueden reducir equilibrando el μ – Desliza la angiogénesis antes de usarla dentro de la incubadora durante la noche
suplementos para el crecimiento de células endoteliales	Sciencell	#1052
Placa de cultivo de 10 cm	Corning	Scipu000813
Puromicina	Gibco	A1113802
typsin-EDTA	Gibco	25200056
Sistema Automatizado de Contador de Células	BioTech
	Winmasis		http://mywim.wimasis.com