في المختبر استخدام تينوسيتيس التنكسية ضروري عند التحقيق في فعالية العلاج الرواية في تيندينوباثي. ومع ذلك، استخدام معظم البحوث والدراسات فقط نموذج الحيوان أو تينوسيتي صحية. ونحن نقترح البروتوكول التالي لعزل تينوسيتيس التنكسية الإنسان أثناء الجراحة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
في المختبر استخدام تينوسيتيس التنكسية ضروري عند التحقيق في فعالية العلاج الرواية في تيندينوباثي. ومع ذلك، استخدام معظم البحوث والدراسات فقط نموذج الحيوان أو تينوسيتي صحية. ونحن نقترح البروتوكول التالي لعزل تينوسيتيس التنكسية الإنسان أثناء الجراحة.
تيندينوباثي، حالة مؤلمة أن يتطور استجابة لانحطاط وتر، أخذ في الارتفاع في العالم المتقدم النمو بسبب زيادة النشاط البدني وعمر أطول. على الرغم من انتشاره المتزايد، المرضية الأساسية لا تزال غير واضحة، وعلاج الأعراض عموما. في الآونة الأخيرة، تم التحقيق في العديد من الخيارات العلاجية، بما في ذلك عوامل النمو والخلايا الجذعية والعلاج الجيني، أملا في تعزيز فاعلية الشفاء لوتر التنكسية. ومع ذلك، أجريت معظم هذه الدراسات البحثية فقط على نماذج حيوانية أو تينوسيتيس بشرية صحية. على الرغم من بعض الدراسات باستخدام تينوسيتيس المرضية، على حد علمنا لا يوجد حاليا البروتوكول لا تصف كيفية الحصول على تينوسيتيس التنكسية البشرية. الهدف من هذه الدراسة وصف بروتوكول قياسي لاكتساب تينوسيتيس التنكسية البشرية. في البداية، كان حصاد الأنسجة وتر من مريض مع اللقيمه أثناء الجراحة. ثم أخذت عينات خزعة من باسطة الباسطة القصيرة وتر المقابلة للتغييرات الهيكلية التي لوحظت في وقت الجراحة. ظهر كل الأوتار المقطوع لتكون مملة، والرمادي، وقابلة للتفتيت، ومتوذمه، مما جعلها متميزة بصريا من الأصحاء. تينوسيتيس مثقف وتستخدم لإجراء التجارب. وفي الوقت نفسه، حللت نصف الأنسجة المقطوع الأشيع، وتبين أنهما يشتركان في نفس الميزات الرئيسية من تيندينوباثي (خلل التنسج أنجيوفيبروبلاستيك أو تضخم). وأكد تحليل ثانوي من إيمونوسيتوتشيميستري الخلايا المستزرعة تينوسيتيس مع الأغلبية من وجود البقع الإيجابية للبروتينات الموهوك وتينومودولين الخلايا. ثم حددت صفات طبيعة الأمراض التنكسية تينوسيتيس بمقارنة الخلايا مع مراقبة صحية باستخدام مقايسة الانتشار أو قرت-بكر. عرض تينوسيتي التنكسية أعلى معدل انتشار وأنماط التعبير الجيني مماثلة تيندينوباثي مطابقة للتقارير السابقة. وعموما، هذا البروتوكول الجديد قد توفر أداة مفيدة للدراسات المستقبلية من تيندينوباثي.
تيندينوباثي هو شرط العضلات والعظام التنكسية مزمنة التي تتطور في أجزاء مختلفة من الجسم. في الآونة الأخيرة، ازداد عدد الحالات من تيندينوباثي إلى حد كبير في العالم المتقدم النمو بسبب تزايد المشاركة في الرياضة الترفيهية وزيادة متوسط العمر المتوقع1،2. يعتبر القضية تيندينوباثي المتعددة العوامل، وتتضمن هذه الأسباب الاسكيمية، وإصابات الجذور الحرة الأكسجين، واختلال توازن بين innervations مضيق للأوعية ووعائي والدموع الصغيرة الداخلية والتغيرات العصبية-التنظيم3 ،،من45،6،،م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وأجرى البروتوكول وفقا "إعلان هلسنكي" والبروتوكول أقر "مجلس المراجعة المؤسسية" في المركز الطبي بوندانج تشأ.
1-الأمراض التنكسية وتر الأنسجة الحصاد من المريض
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وكشفت تحاليل نسيجية أن الأنسجة المقطوع من اللقيمه يتسم بسمات وتر تيندينوباثيك. وكشف قسم ح & ه من تيندينوباثي وتر التنكسية حزمة الكولاجين غير منظم مع فقدان قطبية وهياكل غرامة الألياف المتوازية المستقيمة، ومعبأة بشدة. كانت علامات نسيجية توحي بانحطاط مثل سيلولاريتي أعلى ونوى الموسع دون الشكل المغزل النموذجية الشائعة في العينات. بالإضافة إلى ذلك، حزم الكولاجين لوتر تحولت كانت ضعيفة نسبيا ويوزين الملون من ح & ه ولكن كانت إيجابيا الملون بالأزرق السيان تشير إلى زيادة في مادة بروتيوجليكان.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وقد أفاد عدد من الدراسات السابقة كيفية إنشاء نماذج حيوانية تيندينوباثيك المزمن باستخدام إجراءات مختلفة مثل كولاجيناز أو حقن كارتوجينين وتشغيل المطحنة وأكثر26،27. على الرغم من أن العديد من الدراسات التي تبين الآثار العلاجية الواعدة استناداً إلى هذه النماذج الحيوانية، تجارب باستخدام تينوسيتي التنكسية البشرية سيكون حاسما في ميدان تيندينوباثي من أجل استخراج فعالية العلاج. في هذه المقالة، قمنا بإنشاء بروتوكول للحصاد والثقافة تينوسيتيس التنكسية الإنسان دائماً بنجاح. تح.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
كان يؤيد هذا البحث بمنحه من كوريا الصحة التكنولوجيا والتطوير د المشروع من خلال كوريا الصحة الصناعة تطوير معهد (خيدي)، الذي تموله وزارة الصحة والرعاية الاجتماعية، جمهورية كوريا (منح رقم: HI16C1559).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مشرط | Kisanbio | KS-Q0306-15 | رقم 15 |
| سمور | ذو شفرة | 374769 | |
| وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) | Gibco | 11995065 | |
| PBS | Gibco | 14190250 | |
| مصل بقري الجنين (FBS) | جيبكو | 16000044 | |
| 50 ملي مولار حمض الأسكوربيك -2-فوسفات | Sigma-Aldrich | A5960 | |
| محلول مضاد حيوي مضاد للفطريات | Gibco | 15240062 | |
| 4٪ فورمالديهايد | محلول حيوي | BP031 | |
| Triton X-100 & nbsp ؛ | سيجما ألدريتش | X100-100 مل | |
| BSA | Rdtech | C0082 | |
| TWEEN 20 | Sigma-Aldrich | P9416-100ml | |
| MKX (C-5) | سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية | sc-515878 | |
| Tenomodulin (N-14) | سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية | SC-49325 | |
| تصاعد مضان متوسط | DAKO | S3023 | |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | |
| WST-1 | Dojindo Molecular Technologies | CK04 | |
| BrdU Cell Assay Kit | Cell Signaling | Technology#6813 | |
| TRIzol Reagent | Invitrogen | 15596018 | |
| iScript cDNA Synthesis Kit | Bio-Rad | 170-8891 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
| GAPDH | Thermo Fisher Scientific | Hs02786624_g1 | |
| COL3A1 | Thermo Fisher Scientific | Hs00943809_m1 | |
| ACTA2 | Thermo Fisher Scientific | Hs00426835_g1 | |
| TAC1 | Thermo Fisher Scientific | Hs00243225_m1 | |
| TACR1 | Thermo Fisher Scientific | Hs00185530_m1 | |
| PTGS2 | Thermo Fisher Scientific | Hs00153133_m1 | |
| ACTB | Thermo Fisher Scientific | Hs99999903_m1 | |
| Cell Strainers (100 & micro; م) | كورنينج | 352360 | |
| طبق ثقافة 100 مم | Thermo Fisher Scientific | 8188207 | |
| آبار غرفة الشريحة | Thermo Fisher Scientific | 154534 | |
| 96 Well Clear مسطح القاع البوليسترين TC-المعالجة Microplates | Corning | 3596 | |
| Nikon Eclipse 50i المجهر | نيكون | ||
| VERSA ماكس قارئ الألواح الدقيقة | الأجهزة الجزيئية | ||
| CFX96 نظام الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي | فورمالين بيو | ||
| ، مخزن محايد ، 10٪ | سيجما ألدريتش | HT501128 | |
| بارافين | لايكا بيوأنظمة | 3801340 | |
| الإيثانول | JUNSEI CHEMICAL | 90303-2185 | |
| هيماتوكسيلين | داكو | CS70030-2 | |
| Eosin | DAKO | CS70130-2 | |
| Alcian blue | DAKO | AR16011-2 | |
| حامض الستريك | Sigma-Aldrich | 251275 | |
| Xylene | JUNSEI CHEMICAL | 25165-0430 | |
| البيروكسيديز الذاتي ؛ | DAKO | S200380-2 | |
| كندا بلسم | JUNSEI CHEMICAL | 23255-1210 | |
| Microtome Blade | FEATHER | A35 | |
| زجاج منزلق | SUPERIOR | 1000612 | |
| غطاء زجاجي | Marienfeld-Superior | 101050 | |
| VEGF | Santa cruz التكنولوجيا الحيوية | SC-7269 | |
| SPSS Software | IBM | الإصدار 18.0 | |
| جهاز طرد مركزي متعدد الأغراض | LABOGENE | 1248R |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.