يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

بروتوكول لاكتساب تينوسيتي التنكسية من البشر

7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57634

⸱

يونيو 9, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

في المختبر استخدام تينوسيتيس التنكسية ضروري عند التحقيق في فعالية العلاج الرواية في تيندينوباثي. ومع ذلك، استخدام معظم البحوث والدراسات فقط نموذج الحيوان أو تينوسيتي صحية. ونحن نقترح البروتوكول التالي لعزل تينوسيتيس التنكسية الإنسان أثناء الجراحة.

الملخص

تيندينوباثي، حالة مؤلمة أن يتطور استجابة لانحطاط وتر، أخذ في الارتفاع في العالم المتقدم النمو بسبب زيادة النشاط البدني وعمر أطول. على الرغم من انتشاره المتزايد، المرضية الأساسية لا تزال غير واضحة، وعلاج الأعراض عموما. في الآونة الأخيرة، تم التحقيق في العديد من الخيارات العلاجية، بما في ذلك عوامل النمو والخلايا الجذعية والعلاج الجيني، أملا في تعزيز فاعلية الشفاء لوتر التنكسية. ومع ذلك، أجريت معظم هذه الدراسات البحثية فقط على نماذج حيوانية أو تينوسيتيس بشرية صحية. على الرغم من بعض الدراسات باستخدام تينوسيتيس المرضية، على حد علمنا لا يوجد حاليا البروتوكول لا تصف كيفية الحصول على تينوسيتيس التنكسية البشرية. الهدف من هذه الدراسة وصف بروتوكول قياسي لاكتساب تينوسيتيس التنكسية البشرية. في البداية، كان حصاد الأنسجة وتر من مريض مع اللقيمه أثناء الجراحة. ثم أخذت عينات خزعة من باسطة الباسطة القصيرة وتر المقابلة للتغييرات الهيكلية التي لوحظت في وقت الجراحة. ظهر كل الأوتار المقطوع لتكون مملة، والرمادي، وقابلة للتفتيت، ومتوذمه، مما جعلها متميزة بصريا من الأصحاء. تينوسيتيس مثقف وتستخدم لإجراء التجارب. وفي الوقت نفسه، حللت نصف الأنسجة المقطوع الأشيع، وتبين أنهما يشتركان في نفس الميزات الرئيسية من تيندينوباثي (خلل التنسج أنجيوفيبروبلاستيك أو تضخم). وأكد تحليل ثانوي من إيمونوسيتوتشيميستري الخلايا المستزرعة تينوسيتيس مع الأغلبية من وجود البقع الإيجابية للبروتينات الموهوك وتينومودولين الخلايا. ثم حددت صفات طبيعة الأمراض التنكسية تينوسيتيس بمقارنة الخلايا مع مراقبة صحية باستخدام مقايسة الانتشار أو قرت-بكر. عرض تينوسيتي التنكسية أعلى معدل انتشار وأنماط التعبير الجيني مماثلة تيندينوباثي مطابقة للتقارير السابقة. وعموما، هذا البروتوكول الجديد قد توفر أداة مفيدة للدراسات المستقبلية من تيندينوباثي.

المقدمة

تيندينوباثي هو شرط العضلات والعظام التنكسية مزمنة التي تتطور في أجزاء مختلفة من الجسم. في الآونة الأخيرة، ازداد عدد الحالات من تيندينوباثي إلى حد كبير في العالم المتقدم النمو بسبب تزايد المشاركة في الرياضة الترفيهية وزيادة متوسط العمر المتوقع1،2. يعتبر القضية تيندينوباثي المتعددة العوامل، وتتضمن هذه الأسباب الاسكيمية، وإصابات الجذور الحرة الأكسجين، واختلال توازن بين innervations مضيق للأوعية ووعائي والدموع الصغيرة الداخلية والتغيرات العصبية-التنظيم3 ،،من45،6،،م....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وأجرى البروتوكول وفقا "إعلان هلسنكي" والبروتوكول أقر "مجلس المراجعة المؤسسية" في المركز الطبي بوندانج تشأ.

1-الأمراض التنكسية وتر الأنسجة الحصاد من المريض

  1. تشخيص اللقيمه بأخذ تاريخ طبي واستخدام نتائج اختبار بدني: الرقة على أصل تيندينوس قريبة من ابيكونديلي الجانبية؛ ألم أثارت قبل التمديد وقاوم المشتركة للرسغ.
  2. استخدام معايير الاشتمال التالية: أكثر من 18 سنة عمر؛ تاريخ اللقيمه على الأقل لمدة ستة أشهر؛ المتعنت للمعاملة غير المنطوق؛ لقد مرت ثلاثة أشهر على الأقل منذ حقن الكورتيزون أو البلازما الغنية الصفيحات البوتولينوم
  3. استبعاد ما يلي: النساء الحوامل؛ المرضى الذين يعانون من أمراض عنق الرحم العمود الفقري، الكوع التهاب ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وكشفت تحاليل نسيجية أن الأنسجة المقطوع من اللقيمه يتسم بسمات وتر تيندينوباثيك. وكشف قسم ح & ه من تيندينوباثي وتر التنكسية حزمة الكولاجين غير منظم مع فقدان قطبية وهياكل غرامة الألياف المتوازية المستقيمة، ومعبأة بشدة. كانت علامات نسيجية توحي بانحطاط مثل سيلولاريتي أعلى ونوى الموسع دون الشكل المغزل النموذجية الشائعة في العينات. بالإضافة إلى ذلك، حزم الكولاجين لوتر تحولت كانت ضعيفة نسبيا ويوزين الملون من ح & ه ولكن كانت إيجابيا الملون بالأزرق السيان تشير إلى زيادة في مادة بروتيوجليكان.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وقد أفاد عدد من الدراسات السابقة كيفية إنشاء نماذج حيوانية تيندينوباثيك المزمن باستخدام إجراءات مختلفة مثل كولاجيناز أو حقن كارتوجينين وتشغيل المطحنة وأكثر26،27. على الرغم من أن العديد من الدراسات التي تبين الآثار العلاجية الواعدة استناداً إلى هذه النماذج الحيوانية، تجارب باستخدام تينوسيتي التنكسية البشرية سيكون حاسما في ميدان تيندينوباثي من أجل استخراج فعالية العلاج. في هذه المقالة، قمنا بإنشاء بروتوكول للحصاد والثقافة تينوسيتيس التنكسية الإنسان دائماً بنجاح. تح.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

كان يؤيد هذا البحث بمنحه من كوريا الصحة التكنولوجيا والتطوير د المشروع من خلال كوريا الصحة الصناعة تطوير معهد (خيدي)، الذي تموله وزارة الصحة والرعاية الاجتماعية، جمهورية كوريا (منح رقم: HI16C1559).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مشرطKisanbioKS-Q0306-15رقم 15
سمورذو شفرة374769
وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM)Gibco11995065
PBSGibco14190250
مصل بقري الجنين (FBS)جيبكو16000044
50 ملي مولار حمض الأسكوربيك -2-فوسفاتSigma-AldrichA5960
محلول مضاد حيوي مضاد للفطرياتGibco15240062
4٪ فورمالديهايدمحلول حيويBP031
Triton X-100 & nbsp ؛سيجما ألدريتشX100-100 مل
BSARdtechC0082
TWEEN 20Sigma-AldrichP9416-100ml
MKX (C-5)سانتا كروز التكنولوجيا الحيويةsc-515878
Tenomodulin (N-14)سانتا كروز التكنولوجيا الحيويةSC-49325
تصاعد مضان متوسطDAKOS3023
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)Thermo Fisher ScientificD1306
WST-1Dojindo Molecular TechnologiesCK04
BrdU Cell Assay KitCell SignalingTechnology#6813
TRIzol ReagentInvitrogen15596018
iScript cDNA Synthesis Kit  Bio-Rad170-8891
TaqMan Gene Expression Master MixApplied Biosystems4369016
GAPDHThermo Fisher ScientificHs02786624_g1
COL3A1Thermo Fisher ScientificHs00943809_m1
ACTA2Thermo Fisher ScientificHs00426835_g1
TAC1Thermo Fisher ScientificHs00243225_m1
TACR1Thermo Fisher ScientificHs00185530_m1
PTGS2Thermo Fisher ScientificHs00153133_m1
ACTBThermo Fisher ScientificHs99999903_m1
Cell Strainers (100 & micro; م) كورنينج352360
طبق ثقافة 100 ممThermo Fisher Scientific8188207
آبار غرفة الشريحةThermo Fisher Scientific154534
96 Well Clear مسطح القاع البوليسترين TC-المعالجة MicroplatesCorning3596
Nikon Eclipse 50i المجهر  نيكون
VERSA ماكس قارئ الألواح الدقيقة الأجهزة الجزيئية
CFX96 نظام الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقيفورمالين بيو
، مخزن محايد ، 10٪سيجما ألدريتشHT501128
بارافينلايكا بيوأنظمة3801340
الإيثانولJUNSEI CHEMICAL90303-2185
هيماتوكسيلينداكوCS70030-2
EosinDAKOCS70130-2
Alcian blueDAKOAR16011-2
حامض الستريكSigma-Aldrich251275
XyleneJUNSEI CHEMICAL25165-0430
البيروكسيديز الذاتي   ؛DAKOS200380-2
كندا بلسمJUNSEI CHEMICAL23255-1210
Microtome BladeFEATHERA35
زجاج منزلقSUPERIOR1000612
غطاء زجاجيMarienfeld-Superior101050
VEGFSanta cruz التكنولوجيا الحيويةSC-7269
SPSS SoftwareIBMالإصدار 18.0
جهاز طرد مركزي متعدد الأغراضLABOGENE1248R
صغيرة 8 محلول راد

المراجع

  1. Ackermann, P. W., Renstrom, P. Tendinopathy in sport. Sports Health. 4 (3), 193-201 (2012).
  2. Maffulli, N., Wong, J., Almekinders, L. C. Types and epidemiology of tendinopathy. Clinical Sports Medicine. 22 (4), 675-692 (2003).
  3. Lui, P. P., Chan, L. S., Fu, S. C., Chan, K. M.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

نسيج الوترالهضم بالكولاجيناززراعة الخلاياالكيمياء النسيجية المناعيةصبغ الهيماتوكسيلين والإيوزينمقايسة التكاثرتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقيبروتين Mohawkبروتين Tenomodulin