Un protocollo per acquisire il Tenocyte degenerativa dagli esseri umani

Soo-Hong Han; Hyung Kyung Kim; Jong-Ho Ahn; Dong Hyeon Lee; Minjung Baek; Geunhee Ye; Joong-Myung Lee; Kyunghoon Min; Chihoon Oh; Soonchul Lee

doi:10.3791/57634

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Articolo metodologico

Un protocollo per acquisire il Tenocyte degenerativa dagli esseri umani

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DOI:

10.3791/57634

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9 giugno 2018

Soo-Hong Han^*¹ , Hyung Kyung Kim^*² , Jong-Ho Ahn^*¹ , Dong Hyeon Lee³ , Minjung Baek¹ , Geunhee Ye¹ , Joong-Myung Lee¹ , Kyunghoon Min⁴ , Chihoon Oh¹ , Soonchul Lee¹

¹Department of Orthopaedic Surgery, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine, ²Department of Pathology, Kyung Hee University Hospital at Gangdong, Kyung Hee University School of Medicine, ³Department of Physiology, CHA University School of Medicine, ⁴Department of Rehabilitation, CHA Bundang Medical Center, CHA University School of Medicine

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Uso in vitro di tenociti degenerativa è essenziale quando indagare l'efficacia del trattamento novello su tendinopathy. Tuttavia, molti studi di ricerca utilizzano solo il modello animale o un sano tenocyte. Vi proponiamo il seguente protocollo per isolare tenociti degenerativa umana durante la chirurgia.

Abstract

Tendinopatie, una condizione dolorosa che si sviluppa in risposta alla degenerazione del tendine, sono in aumento nei paesi industrializzati a causa della crescente attività fisica e maggiore aspettativa di vita. Nonostante la sua prevalenza aumentante, la patogenesi di fondo rimane ancora poco chiara, e il trattamento è generalmente sintomatico. Recentemente, numerose opzioni terapeutiche, tra cui fattori di crescita, cellule staminali e terapia genica, sono state studiate nella speranza di migliorare la potenza di guarigione del tendine degenerante. Tuttavia, la maggior parte di questi studi sono stati condotti solo su modelli animali o tenociti umano sano. Nonostante alcuni studi utilizzando tenociti patologiche, al meglio della nostra conoscenza non c'è attualmente nessun protocollo che descrive come ottenere umano tenociti degenerativa. Lo scopo di questo studio è di descrivere un protocollo standard per l'acquisizione di tenociti degenerativa umana. Inizialmente, il tessuto del tendine è stato raccolto da un paziente con epicondilite laterale durante la chirurgia. Quindi i campioni di biopsia sono stati prelevati il tendine di brevis radialis dei carpi dell'estensore corrispondenti ai cambiamenti strutturali osservati al momento della chirurgia. Tutti i tendini raccolti è sembrato essere opaco, grigio, friabile ed edematosa, che li ha resi visivamente distinta da quelle sane. Tenociti erano coltivati e utilizzati per esperimenti. Nel frattempo, la metà dei tessuti raccolti sono stata analizzata istologicamente ed è stato indicato che condividevano le stesse caratteristiche chiave della tendinopatia (displasia angiofibroblastic o iperplasia). Un'analisi secondaria di immunocitochimica ha confermato che le cellule coltivate erano tenociti con la maggior parte delle cellule che hanno le macchie positive per le proteine mohawk e tenomodulin. Le qualità della natura degenerativa di tenociti sono stati quindi determinate confrontando le cellule con il controllo sano mediante un'analisi di proliferazione o qRT-PCR. Il tenocyte degenerativa visualizzato un più alto tasso di proliferazione e simili modelli di espressione genica di tendinopathy corrispondenti rapporti precedenti. Nel complesso, questo nuovo protocollo potrebbe fornire uno strumento utile per gli studi futuri di tendinopatia.

Introduzione

Tendinopatia è una condizione muscolo-scheletrica degenerativa cronica che si sviluppa in varie parti del corpo. Recentemente, il numero di casi di tendinopathy è aumentato notevolmente nel mondo sviluppato a causa della crescente partecipazione in attività sportive e una maggiore aspettativa di vita¹^,². La causa della tendinopatia è considerata multifattoriale e queste cause comprendono ischemia, lesioni di radicali liberi dell'ossigeno, uno squilibrio tra innervazione vasocostrittore e vasodilatatore, micro-strappi interni ed i cambiamenti neuro-regolamento³ ^,