Yeni beyin bölgelerindeki genç nöronlar zorlu nasıl çevre nöronal kader ve olgunlaşma sculpts içine önemli anlayışlar ortaya çıkarabilir. Bu iletişim kuralı interneuron öncüleri belirli beyin bölgelerinden hasat ve onları her iki homotopically nakli için bir yordam açıklanır veya beyin ve postnatal yavrularını içine heterotopically.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Erken Postnatal fare beyin içine Interneuron öncüleri Homochronic nakli
Bu makalede
Özet
Özet
Nöronal kader tayini ve olgunlaşma genetik programlarla çevre sinyalleri arasında karmaşık bir etkileşim gerektirir. Ancak, bu Farklılaşma süreci düzenleyen dışsal mekanizmaları vs içsel rolleri disentangling tüm gelişimsel neurobiologists için bir bilmece olduğunu. Bu sorun GABAergic interneurons, geçici embriyonik yapılardan tarihi ve telencephalon dağıtmak için uzun süren bir göçmen faz tabi bir inanılmaz türdeş olmayan hücre nüfus için büyütülür. Ne kadar farklı beyin ortamları etkiler interneuron kader ve olgunlaşma keşfetmek için geliştirdiğimiz fluorescently etiketli olgunlaşmamış interneuron öncüleri (P0-P2) yeni doğan farelerde belirli beyin bölgelerinden hasat için bir iletişim kuralı. Bu yaşta interneuron geçiş neredeyse tamamlanmış ve bu hücreler nispeten küçük sinaptik entegrasyonu ile son istirahat ortamlarında bulunan. Toplama tek hücre çözümler akış sitometresi ile bu interneuron öncüleri P0-P2 wildtype Doğum sonrası pups nakledilen. Her iki Homotopik yaparak (örneğin, korteks korteks) veya heterotopik (örneğin, korteks hipokampus) nakillerine, bir can değerlendirmek yeni beyin ortamlarda olgunlaşmamış interneurons zor onların kaderi, olgunlaşma ve devre entegrasyon nasıl etkiler. Beyin yetişkin fareler hasat ve posthoc analiz aşılı hücrelerde immunohistokimyasal, dahil olmak üzere, çok çeşitli ile denetlesinler elektrofizyolojik ve transkripsiyon profil oluşturma. Müfettişler nasıl ayrı beyin ortam tahlil için bir strateji ile çok sayıda nöron gelişim yönlerini etkilemeye ve belirli nöronal özellikleri öncelikle kablolu genetik programlar tarafından tahrik edilmektedir tanımlamak bu genel yaklaşım sağlar veya çevre ipuçları.
Giriş
Düzgün kortikal uyarıcı projeksiyon nöronlar ve inhibitör GABAergic interneurons, farklı türleri morfoloji, elektrofizyolojik özellikleri, connectivity ile son derece heterojen bir nüfus arasında bir denge gerektirir ve nörokimyasal işaretleri. Anormal gelişimi ve interneurons (ve belirli interneuron alt gruplar) fonksiyonu bağlı psikiyatrik bozukluklar şizofreni, otizm ve epilepsi1,2,3gibi pathobiology. Ayrıca, birçok genler bu beyin bozukluklarında karıştığı güçlü genç interneurons4' te zenginleştirilmiş. Böylece, interneuron kader tayini ve olgunlaş....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneysel yordamlar Ulusal Sağlık Enstitüleri kılavuzlarınıza uygun olarak yapılmıştır ve NICHD hayvan bakım ve kullanım Komitesi (ACUC) tarafından kabul edildi. Nkx2.1-Cre aşağıda açıklanan protokol kullanırC / +; AI9+ / MGE kaynaklı interneuron öncüleri hasat sersemler, ancak herhangi bir istenen floresan muhabir fare satırında gerçekleştirilebilir. Hem erkek hem de dişi erken postnatal fareler (P0-P2) gelişigüzel donör ve ana bilgisayar doku için kullanılmıştır.
1. çözüm hazırlık
- Sükroz yapay beyin omurilik sıvısı (sACSF) aşağıdaki tarifi (mM biriminde) göre hazırlamak: 87 NaCl, 26 NaHCO3....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu iletişim kuralı erken postnatal beyin (Şekil 1-2) belirli beyin bölgelerine hasat, tek hücre dissociations interneuron öncüleri, toplamak ve saf WT çeşitli beyin bölgeleri içine bu hücrelerin nakli gösterilmiştir postnatal pups (Şekil 3). Posthoc analiz için interneuron habercisi Greftler alınan beyin P30-35 arasında hücre morfolojisi, nörokimyasal işaretleri ve elektrofizyolojik özellikleri tanımlamak için ha.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Önemli bir özelliği, bu iletişim kuralı hücrelerin Beka maksimize. Doku ve hücreler her zaman buz gibi carboxygenated sACSF sağlama hücre survival tanıtmak gereklidir. Bu bir verimli diseksiyon ve çeşitli çözüm ve beyin ortamı dışında hücreleri harcamak süreyi en aza indirmek için ayrılma strateji gerektirir. Disseke ve nakledilen beyin bölgeleri sayısına bağlı olarak, diseksiyon ve/veya nakli adımda deneme uzunluğu azaltmak için yardımcı bir arkadaşın olduğu yararlı olabilir. Sağlık ve yavru hayatta kalmasını sağlamak i.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu araştırma Ulusal Sağlık Enstitüleri (K99MH104595) ve T.J.P. NICHD intramural araştırma programı tarafından desteklenen Gord Fishell, kimin Laboratuarı'nda bu yaklaşım başlangıçta kurulmuş teşekkür ediyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sodyum klorür | Sigma | S7653 | |
| Sodyum bikarbonat | Sigma | S6297 | |
| Potasyum klorür | Sigma | P9541 | |
| Sodyum fosfat monobazik | Sigma | S0751 | |
| Kalsiyum klorür | Sigma | C5080 | |
| Magnezyum klorür | Sigma | M2670 | |
| Glikoz | Sigma | G7528 | |
| Sükroz | Sigma | S7903 | |
| Beyin Matrisleri | Roboz | SA-2165 | Sadece striatum hasadı yapılırsa gereklidir |
| İnce nokta Dumont Forseps | Roboz | RS-4978 | |
| Mikrodiseksiyon makası | Roboz | RS-5940 | |
| Jiletli bıçaklar | ThermoFisher | 12-640 | |
| Pastör pipetleri | ThermoFisher | 1367820C | |
| Nanoject III | Drummond | 3-000-207 | |
| Manuel Manipülatör, standlı | World Precision Instruments | M3301R/M10 | |
| 5 ml yuvarlak tabanlı plastik tüpler | ThermoFisher | 149591A | |
| 60 mm Petri kapları | ThermoFisher | 12556001 | |
| 100 mm Petri kapları | ThermoFisher | 12565100 | |
| Pronase | Sigma | 10165921001 | |
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | ThermoFisher | 16140063 | |
| DNase I | Sigma | 4716728001 | |
| Celltrics 50um filtreler | Sysmex | 04-0042327 | |
| Tripan mavisi | ThermoFisher | 15-250-061 | |
| Hemositometre | ThermoFisher | 02-671-6 |
Kaynaklar
- Bozzi, Y., Casarosa, S., Caleo, M. Epilepsy as a neurodevelopmental disorder. Front Psychiatry. 3 (19), (2012).
- Takano, T. Interneuron Dysfunction in Syndromic Autism: Recent Advances. Dev Neurosci. , (2015).
- Inan, M., Petros, T. J., Anderson, S. A.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
