Method Article

Taze ve donmuş Gastrointestinal örnekleri üzerinden hücre altı ayırma

DOI:

10.3791/57740

⸱

July 15th, 2018

 ,  ,  ,  , 
1Department of Genetics, Physical Anthropology and Animal Physiology, University of the Basque Country (UPV-EHU), Biocruces Health Research Institute, 2Endocrinology and Diabetes Research Group, Biocruces Health Research Institute, UPV-EHU, CIBERDEM

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, insan taze ve donmuş bağırsak biyopsisi sitoplazmik ve nükleer proteinlerin hücre altı ayrılması için basit bir hücresel ayırma gerçekleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu iletişim kuralının amacı insan bağırsak dokusu tarafından endoskopi yerelleştirme analizi için nükleer ve sitoplazmik bölmeleri spesifik proteinlerin veya protein kompleksleri (Yani, sağlıklı farklı doku Birleşik Devletleri içine elde edilen fractionate etmektir hastalığı) vs . Bu yöntem her iki taze ve donmuş bağırsak doku örneği ayırma için yararlıdır; Tüm laboratuarlar için kolayca erişilebilir ve zaman alıcı.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir hücre içinde hemen hemen tüm biyolojik fonksiyonları proteinler katılmak ve herhangi bir varyasyon kendi yapısı, miktar veya konumu patojenik bir senaryo için neden olabilir. Doku örneği ayırma yöntemleri çoğu hastalık karmaşıklığını azaltmak için yararlı bir yaklaşım ile ilgili protein analizleri. Bazı çalışmalarda protein yerelleştirme bilgileri kullanın veya belirli bir hücresel bölme bir protein olduğu gibi proteinlerin tekrarlanabilir ayırma için bir protokol biyolojik bazı soruları cevaplamak yararlı bu yüzden zenginleştirmek. Proteinlerin hücre altı yerelleştirme belirleme ve kendi compartmental yeniden dağıtım veya etkileşimler, bazal izleme ve hastalık ko....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada Cruces Üniversitesi Hastane etik kurulu tarafından kabul edildi ve aydınlatılmış onam tüm konular ya da aileleri elde sonra analizleri gerçekleştirilmiştir.

1. biyopsi koleksiyonu

Not: Biyopsi örnekleri hastaların distal duodenum dan bu aralıktaki arasında 2 ve 10 mg kilo biyopsi yönetme rutin tanı endoskopi sırasında elde edilir. Biyopsi doku, bağışıklık epitel ve endotel hücreleri de dahil olmak üzere farklı hücre türleri oluşan karmaşık bir dokudur. Klinik gastroenterologlar endoskopi gerçekleştirmek aşağıdaki kurulan klinik yönergeleri.

  1. Biyopsi endoskopi sonra steril bir filtre kağıdı y....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 1 bir hematoksilen eozin boyama sağlam villus ve mezar yapıları ile bir bağırsak biyopsisi bölümünün gösterir.

Bu iletişim kuralını kullanan nükleer ve sitoplazmik ayırma temsilcisi sonuçları rakamlar 2 ve 3' te gösterilmiştir. Şekil 2, bir taze (Fh) ve dondurulmuş (Fz) gösterilen deneyinde biyopsi aynı anda şeker burada sunulan p.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada açıklanan protokolü bağırsak biyopsisi nükleer ve sitoplazmik ayırma için kullanılır. Saf protein denatüre değil ve sadece Şekil 2 ve 3 ' te ama aynı zamanda immunoprecipitation, elektroforetik hareketlilik üst karakter tahlil (Emsan) gibi yerli katlanmış proteinlerin gerektiren deneyleri içinde gösterildiği gibi Batı leke analiz kullanılabilir veya yerli polyacrylamide jel elektroforez (sayfa).

Açıklanan yöntemi ile birlikte nükleer membra.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Ander Lopez ve Miren Telletxea yardım video kayıt ve düzenleme için kabul. ACR Ikerbasque arkadaş grubu ve bir araştırma projesi Asociación de Celiacos Madrid (ACM) tarafından finanse edilmektedir. JRB proje ISCIII-PI16/00258 tarafından finanse edilen ve Avrupa Birliği ERDF/ESF tarafından "Avrupa nın yolunu" ortak finanse. Bu bir araştırma projesi hibe Bask Sağlık Bakanlığı tarafından 2015111068 finanse edilmektedir. IRG ve AJM HGUGM bursu hibe UPV/EHU ve Bask Department of Education, sırasıyla destekler.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
HEPESSigma AldrichH4034-1kg
KClSigma AldrichP9333-1kg
EDTASigma AldrichE9884-100G
NaClSigma Aldrich5588886-1kg
DTTSigma Aldrich10197777001
PMSFTermo Bilimsel36978
Proteinaz ve fosfataz inhibitörleriThermo ScientificA32959
NP-40 Sigma AldrichCA-630Deterjan
BCA testiThermo Scientific23227Protein miktar tayin kiti
Tek kullanımlık plastik tokmaklarSigma AldrichZ359947-100EA
Dounce homojenizatörVWR431-0100
MikrosantrifüjEppendorf5415-R
ShackerIKAMS3 temel

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cox, B., Emili, A. Tissue subcellular fractionation and protein extraction for use in mass-spectrometry-based proteomics. Nature Protocols. 1 (4), 1872-1878 (2006).
  2. Itzhak, D. N., Tyanova, S., Cox, J., Borner, G. H. Global, quantitative and ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Subcellular FractionationGastrointestinal SpecimensNuclear Cytoplasmic CompartmentsProtein Localization AnalysisFresh Frozen TissueCytoplasmic Protein FractionNuclear Protein FractionWestern Blot AnalysisProtease InhibitorsHSP90 Tubulin Controls

Related Articles