Detecção de vírus de Bioaerossóis usando resina de troca de ânion

Summary

Um ânion trocar o método à base de resina, adaptado para amostragem de bioaerosol baseado em choque de vírus é demonstrada o líquido. Quando acoplado com deteção molecular a jusante, o método permite a fácil e sensível de detecção de vírus de Bioaerossóis.

Abstract

Este protocolo demonstra um método de amostragem de bioaerosol personalizado para vírus. Neste sistema, a resina de troca de ânion é acoplada com dispositivos de amostragem líquida baseada no choque do ar para a concentração eficaz de vírus com carga negativa da Bioaerossóis. Assim, a resina serve como um passo adicional de concentração do fluxo de trabalho de amostragem de bioaerosol. Extração de ácidos nucleicos de partículas virais, em seguida, é executada directamente a partir da resina de troca de ânion, com a amostra resultante apropriada para análises moleculares. Além disso, este protocolo descreve uma câmara de bioaerosol custom-built, capaz de gerar Bioaerossóis carregados de vírus sob uma variedade de condições ambientais e permitindo a monitorização contínua das variáveis ambientais tais como temperatura, umidade, velocidade do vento e a concentração em massa de aerossol. A principal vantagem de usar este protocolo é o aumento da sensibilidade de detecção viral, avaliada através da comparação direta para um impinger líquido convencional sem modificações. Outras vantagens incluem o potencial de concentrar diversos vírus de carga negativa, o baixo custo da resina de troca de ânion (~$0.14 por exemplo) e facilidade de uso. As desvantagens incluem a incapacidade do presente protocolo para avaliar a infectividade de resina-adsorvido em partículas virais, e potencialmente a necessidade para a otimização da reserva líquida de amostragem usado dentro do impactor.

Introduction

A finalidade desse método é proporcionar uma plataforma de amostragem de bioaerosol altamente sensível para facilitar a detecção molecular do vírus de carga negativa de Bioaerossóis. Microorganismos, incluindo partículas virais, Bioaerossóis podem sobreviver por longos períodos de tempo de¹. Bioaerossóis podem viajar distâncias relativamente longas e manter a viabilidade e a infectividade, como evidenciado por um surto de doença do legionário que originou-se industrial localizados a uma distância de 6 km dos indivíduos afetados de torres de resfriamento e resultou em 18 mortes². Transmissão indirecta de vírus para os ser....

Protocol

1. instalação da câmara Bioaerosol (ver Figura 2)

1. Pré-carrega os líquido impingers com 20 mL de 0,01 M tamponado fosfato salina, pH 7,5 (PBS).
   1. Adicionar 0,5 g de resina de troca de ânion e suspender dentro da PBS de dentre os impingers líquidos, com outro líquido impactor servindo como um controle.
2. Impingers líquidos de posição em paralelo no interior da câmara de bioaerosol usando braçadeira carrinhos com entradas de aerossol, enfrentando o nebulizador.
   Nota: Consulte a Figura 2 para obter detalhes adicionais.
3. Colocalizar um monitor de....

Results

A Figura 1 demonstra o princípio por trás de captura com base em carga de vírus de Bioaerossóis através da inclusão de resina em impingers líquido-baseado. A Figura 2 mostra a configuração da câmara bioaerosol custom-built. A Figura 3 descreve as etapas envolvidas na criação da experiência de clorofórmio e medidas para garantir o controle de qualidade. A Figura 4 mostra .......

Discussion

Este protocolo descreve um método para a captura de viral sensível de Bioaerossóis usando impingers líquidos modificados. O método é otimizado para detecção e quantificação da carga viral em Bioaerossóis. A modificação específica demonstrada aqui envolve a adição de resina de troca de ânion ao líquido contido em um impinger líquido comum. Este método foi desenvolvido por sua simplicidade no processamento da amostra a jusante, Considerando que outras técnicas de processamento de amostra como centrifugação, filtração e mét.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Escherichia coli bacteriófago MS2 (ATCC 15597-B1)	Coleção de cultura de tipo americano	ATCC 15597-B1
FluMist Quadrivalente	AstraZeneca	Contato fabricante	Os constituintes virais desta vacina estão sujeitos a alterações anuais Sistema de detecção de
PCR em tempo real CFX96 Touch	Bio-Rad
Primers e sondas	Tecnologias Integradas de DNA	NA
0.2 µ M filtro estéril	NA	NA
1 L garrafas de pirex ou equivalente	NA	NA
1 mL pontas de pipeta	NA	NA
1 mL pipetador	NA	NA
50 mL pipeta serológica	NA	NA
PCR
Pipeta-auxiliar ou equivalente	NA	NA
QIAamp Viral RNA Mini Kit	Qiagen	52904
QuantiTect Sonda RT-PCR Kit	Qiagen	204443
Amberlite IRA-900 forma de cloreto	Sigma-Aldrich	216585-500G
Solução salina tamponada com fosfato	Sigma-Aldrich	P5368-10PAK
Água (grau de biologia molecular)	Sigma-Aldrich	W4502-1L
Tubos de Microcentrífuga Eppendorf DNA LoBind	ThermoFisher	13-698-791
Falcon 50 mL Tubos de Centrífuga Cônicos	ThermoFisher	14-432-22
Tubos de Centrífuga de Polipropileno Falcon	ThermoFisher	05-538-62
SuperScript III Platinum One-Step qRT-PCR Kit w/ROX	ThermoFisher	11745100
SKC Biosampler 20 mL, conjunto de vidro de 3 peças	SKC Inc.	225-9593
Bombas de amostra Vac-u-Go	SKC Inc.	228-9695
Nebulizador Collison (6 jatos)	BGI Inc.	NA
HEPA cápsula	PALL	12144
Q-TRAK monitor de qualidade do ar interno 8554	TSI Inc.	Anemômetro térmico de
Alnor AVM440-A	TSI Inc.	Monitor
SidePak AM510	TSI Inc.	Câmara de
		NA