Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

In Vitro tilnærming til Fotodynamisk terapi

Published: August 17, 2018 doi: 10.3791/58190
Automatic Translation
1,2, 1,2,3
1Department of Dermatology, University of California, Davis, 2Dermatology Service, Sacramento VA Medical Center, 3Department of Dermatology, State University of New York, Downstate Medical Center

Summary

Fotodynamisk terapi (PDT) er en medisinsk prosedyre som innebærer inkubasjonstiden for en exogenously anvendt photosensitizer (PS) etterfulgt av synlig lys photoactivation å indusere apoptose. Vi presenterer en i vitro PDT protokoll for å simulere PDT som kan brukes til å studere forskjeller i PS inkubasjon og lysbehandling parametere.

Abstract

Fotodynamisk terapi (PDT) er en medisinsk prosedyre som innebærer inkubasjonstiden for en exogenously anvendt photosensitizer (PS) etterfulgt av synlig lys photoactivation å indusere celle apoptose. Federal Drug Administration har godkjent PDT for behandling av Aktiniske keratose og klinisk retningslinjene anbefaler PDT som behandling for visse ikke-melanom hudkreft og akne vulgaris. PDT er en fordelaktig terapeutisk modalitet som er rimelig, ikke-invasiv, og forbundet med minimale bivirkninger og skremmer. I det første trinnet i PDT, er en PS brukt og tillatt å akkumulere intracellulært. Etterfølgende lys bestråling induserer reaktive oksygen arter formasjonen, som kan til slutt føre til celle apoptose, membran avbrudd, mitokondrie skade, immun modulasjon, keratinocyte spredning og kollagen omsetning. Her presenterer vi en i vitro metode studie PDT i en tilhenger cellen linje. Denne behandling protokollen er utformet for å simulere PDT og kan justeres til å studere bruken av PDT med ulike linjer, photosensitizers, inkubasjon temperaturer eller photoactivation bølgelengder. Squamous celle carcinoma celler ble inkubert med 0, 0.5, 1.0 og 2 mM 5-aminolevulinic syre (5-ALA) for 30 min og photoactivated med 417 nm blått lys for 1000 s. Primært resultat tiltaket var apoptose og nekrose, målt ved annexin-V og 7-aminoactinomycin D-flowcytometri. Det var en doseavhengig økning i celle apoptose etter tretti minutters inkubasjonstiden for 5-ALA. For å oppnå høy mellom test gyldigheten, er det viktig å opprettholde konsekvent inkubasjon og lys parametere når du utfører i vitro PDT eksperimenter. PDT er en nyttig klinisk fremgangsmåte og i vitro forskning tillate utviklingen av romanen PSs, optimalisering av protokoller og nye indikasjoner for PDT.

Introduction

Fotodynamisk terapi (PDT) er en medisinsk prosedyre som innebærer inkubasjonstiden for en exogenously anvendt photosensitizer (PS) etterfulgt av synlig lys photoactivation å indusere celle apoptose. Federal Drug Administration (FDA) har godkjent PDT for behandling av Aktiniske keratose (AK), og kliniske retningslinjer anbefaler PDT som behandling for visse ikke-melanom hudkreft og akne vulgaris1,2. Nye ikke-dermatologiske bruksområder for PDT er behandling av mage, prostata og gynekologisk kreft3. PDT er en fordelaktig terapeutisk modalitet som det er rimelig, ikke-invasiv og forbundet med minimale bivirkninger og arrdannelse2.

I det første trinnet i PDT, er en PS brukt og tillatt å akkumulere intracellulært2. I USA brukes aktuell 5-aminolevulinic syre (5-ALA) ofte til å behandle AKs. Under incubation konverteres fase, 5-ALA til protoporphyrin IX (PP-IX) via måltema biosyntesen sti i innarbeidet celler3. Før kreft celler har redusert ferrochelatase aktivitet, som konverterer protoporphyrin IX (PP-IX), til sluttproduktet, måltema. Som et resultat, akkumuleres kreft celler PP-IX i forhold til normale celler4,5. Denne opphopningen av PP-IX i kreft og pre kreft celler i forhold til de omkringliggende vev tillater PDT å være en målrettet tilnærming med minimale bivirkninger. Lys bestråling fører til reaktive oksygen arter (ROS) generasjon når oksygen godtar spent elektroner fra PP-IX. PP-IX har en topp absorpsjon i ultrafiolett spektrum med mindre topper i det synlige lyse spekteret, inkludert blå og røde lys2. ROS formasjon kan til slutt føre til celle apoptose, membran avbrudd, mitokondrie skade, immun modulering, keratinocyte spredning og kollagen, omsetning,6,,7,,8,,9 , 10.

PDT ble utviklet i 1970 og er en utvikling terapeutisk modalitet3. FDA-godkjent protokollen for behandling av AKs anbefaler 5-ALA huden inkubasjon 14 – 18 h, men 1-2 h incubations er brukt i klinisk praksis2. I vitro, vi har vist at kortere 15 min 5-ALA incubations kan øke fibroblast celle apoptose sammenlignet med ubehandlet fibroblaster11,12. I tillegg blir roman chlorin, phthalocyanine og hydrogenion-baserte PSs undersøkt for å forbedre PDT effekt3. Her presenterer vi en i vitro metode studie PDT i en tilhenger squamous celle carcinoma celler. I denne protokollen, SCC-13 celler er ruges med 0, 0.5, 1.0, og 2 mM 5-ALA for 30 min og photoactivated med 417 nm blått lys for 1000 s. Primært resultat tiltaket er apoptose og nekrose, målt ved annexin-V og 7-aminoactinomycin D (7-AAD) flowcytometri. Denne behandling protokollen er utformet for å simulere PDT og kan justeres til å studere bruken av PDT med andre linjer, photosensitizers, inkubasjon temperaturer eller photoactivation bølgelengder. Utarbeidelse av ekstra kontroll grupper kan være nødvendig, inkludert unstained kvinne, single fluorophore farget, negative og positive kontroller for flowcytometri. En omfattende gjennomgang av teori, protokoller, eksperimentell design og gating for apoptose/nekrose flowcytometri kan finnes andre steder13.

Protocol

1. forberedelse av celler

  1. Plate 20.000 celler i 2 mL kultur medium i hver brønn av en 6-vel plate med steril teknikk i en biosafety kabinett.
  2. Plasser 6-og plater i en fuktet inkubator (37 ° C, 5% CO2) 24 h til at cellene å overholde plater.

2. utarbeidelse av Photosensitizer for behandling av celler

  1. Forberede 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA løsninger i kultur medium. Hvis fosterets bovin serum (FBS) er en ingrediens i kultur medium, forberede og behandle celler med 5-ALA i kultur medium løsning med 0,1% FBS for incubations. 11 , 12 i dette tilfellet SCC-13 celler krever ikke FBS, så 5-ALA ble lagt direkte til keratinocyte serum-free middels supplert med bovin hypofysen ekstrakt og epidermal vekstfaktor.
  2. Sug opp kultur medium og vask cellene med minst 2 mL fosfat bufret saltoppløsning (PBS).
  3. Sug opp PBS og Legg 2 mL 0, 0,5, 1 eller 2 mM 5-ALA løsninger i separate plater eller brønner.
  4. Inkuber cellene med 0, 0,5, 1 eller 2 mM 5-ALA på en 36-37 ° C oppvarming blokk for 30 min. beskytte cellene fra lyseksponering under inkubasjonen med aluminiumsfolie.
  5. Sug opp 0, 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA løsninger og vask cellene med 2 mL PBS.
  6. Sug opp PBS og legge 2 mL kultur medium for blå lys bestråling.

3. blå lys fototerapi

  1. Før irradiating cellene, slå på blått lys enhet (f.eks, samme, lysrør eller halogenlamper) og kjøre en syklus (1000 s) å varme opp enheten. Den blått lys enheten bør ha en utgang bølgelengden til 417 +/-5 nm. Slik at enheten skal kjøre i en syklus før behandlinger sikrer at blå lys bølgelengde og Irradians er konsekvent photoactivation fasen.
  2. Bruk et fotometer måle Irradians på celleoverflaten. Den blå lys Irradians på celleoverflaten skal 10 mW/cm2. Avstanden mellom lys og cellene må justeres for å oppnå en Irradians av 10 mW/cm2 avhengig av intensiteten av lyskilden.
  3. Plass 0, 0,5, 1 og 2 mM ALA behandlingsgrupper på en svart overflate under blå lyskilden. Irradiate cellene med blått lys for 1000 s (16 min og 40 s) for en total fluence av 10 J/cm2. Etter blå lys photoactivation er cellene klar for analyse.

4. innhenting og flekker

  1. Forberede flyt buffer ifølge produsenten retningslinjer (se Tabell for materiale).
  2. Sug opp kultur medium og vask celler med 2 mL PBS.
  3. Legg 1 mL av 0,25% trypsin-EDTA og tillate at celler koble i ca 3 til 5 minutter. Cellene kan undersøkes under mikroskop for å bekrefte celle avdeling.
  4. Legge 1 mL av kultur medium (eller PBS) med 10% fosterets bovin serum å deaktivere trypsin.
  5. Samle celle suspensjon i merket 5 mL flyt rør.
  6. Spinne 5 mL flyt tube i en centrifuge på 201 x g for 5 min. leveringstanken løsning uten å fjerne celle pellets.
  7. Legge 200 µL flyt bufferen med konjugert annexin-V antistoff (1 µL av annexin-v per 39 µL av flyt buffer) til hvert utvalg.
  8. Resuspend cellene og sted i inkubator (37 ° C, 5% CO2) for 20 min å tillate annexin-V binding.
  9. Legge til 3 µL av 7-AAD hvert utvalg. Inkuber i 5 minutter ved romtemperatur.

5. flyt Cytometric analyse

  1. Følg flyten cytometer produsenten retningslinjer for oppsett (se Tabell for materiale).
  2. Samle og analysere prøver med flowcytometri. 13
  3. Utføre statistiske sammenligning av behandling og kontroll grupper bruk variansanalyse (ANOVA)14. Sammenligne av behandlingsgrupper middelverdien av kontrollen med en Dunnett test for post hoc analyse.

Representative Results

Etter SCC-13 celler ble inkubert i 30 min med 0, 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA og bestrålt med 1000 s av blått lys, var det en doseavhengig økning i celle apoptose. Totalt apoptose (gjennomsnittlig ± standardfeilen betyr) var 3.94 ± 0,34, 7.90 ± 0.52, 23.86 ± 0.52 og 38.33 ± 1,81 etter 30 min med inkubering 0, 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA, henholdsvis, og 1000 sekunder av blått lys (figur 1). Vi sammenlignet mener andelen apoptotisk cellen 0, 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA inkubert grupper med ANOVA. Cellene behandlet med 1 og 2 mM 5-ALA hadde en betydelig økning i celle apoptose sammenlignet med 0 mM 5-ALA behandlet celler. Figur 2A viser representant flyt cytometric gating av fremover punkt (FSC) versus siden xy (SSC) for SCC-13 celler inkubert med 0, 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA. Sirkel gating omslutter SCC-13 celle befolkningen. For dette eksperimentet, 7500 hendelser ble samlet og SCC-13 celle befolkningen porten tatt minst 90% av hendelser. Figur 2B viser en representant tomt 7-AAD på x-aksen og annexin-V på y-aksen. Celle populasjoner er gated i fire quadrants (Q1 å Q4) å diskriminere apoptotisk celler. Q1 (høy annexin-v, lite 7-AAD) representerer cellene gjennomgår tidlig apoptose. Q2 (høy annexin-v, høy 7-AAD) representerer cellene gjennomgår sent apoptose eller nekrose. Q3 (lav annexin-v, høy 7-AAD) representerer cellene gjennomgår nekrose. Q4 (lav annexin-v, lite 7-AAD) representerer cellene ikke gjennomgår apoptose eller nekrose. For å beregne prosentdelen av cellene gjennomgår apoptose, lagt vi prosentandelen av celler i Q1 og Q2. Inkonsekvens i 5-ALA inkubasjon Periodelengde, inkubasjon temperatur eller photoactivation bestråling dose kan endre PDT effekt. Figur 3 viser en representant annexin-V og 7-AAD flyt cytometric tomt når inkubasjon temperaturen er variert (dvs. 27, 36 eller 42 ° C). Det var en temperatur avhengig økning i apoptose.

Figure 1
Figur 1: doseavhengig økning i apoptose etter tretti minutters inkubasjonstiden for 5-ala 5-ALA ruget på 36 ° C for tretti minutter etterfulgt av 1000 s blått lys i SCC-13 celler. Stolpene angir gjennomsnittlig prosent annexin-V positiv celler i hver behandling og kontrollgruppen. Eksperimenter ble utført i teknisk tre eksemplarer. Statistisk betydning ble fastsatt ANOVA, med p < 0,05 merket med en stjerne (*). Feilfelt representerer gjennomsnittlig ± standardfeil av gjsnitt. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: representant flyt cytometri tomter. (A) representant frem scatter vs siden scatter cytometri tomter i vilkårlig enheter (AU) for x - og y - aksen for 0, 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA inkubert celler. For dette eksperimentet, 7500 hendelser ble samlet og SCC-13 celle befolkningen gate tatt 90% av hendelser. (B) representant annexin-V g. 7-AAD flowcytometri tomter au for x - og y - aksen for 0, 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA inkubert celler. Q1: tidlig apoptotisk celler, Q2: slutten apoptotisk/nekrose celler, Q3: nekrotisk celler og Q4: levedyktige cellers. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: rugende 5-ALA ved forskjellige temperaturer kan endre PDT effekt. Representant annexin-V g. 7-AAD flowcytometri tomter au for x - og y - aksen for SCC-13 celler inkubert med 0,5 mM 5-ALA på 27, 36 og 42 ° C. Q1: tidlig apoptotisk celler, Q2: slutten apoptotisk/nekrose celler, Q3: nekrotisk celler og Q4: levedyktige cellers. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Discussion

Det var en betydelig økning i SCC-13 apoptose etter 30 min incubations 0,5, 1 og 2 mM 5-ALA etterfulgt av 1000 s blått lys. Disse resultatene er konsistente med våre tidligere publisert forskning viser at 5-ALA incubations 30 min etterfulgt av blått lys aktivisering fører til en doseavhengig økning i andelen fibroblast cellene gjennomgår apoptose12, 14.

Denne eksperimentelle tilnærming til studere PDT har fordeler og begrensninger. Metodene beskrevet overholder klinisk praksis som et kommersielt tilgjengelig PS og lyskilde ble brukt. Forskere kan tilpasse metodene med forskjellige celletyper, PSs, lyskilder og bestråling parametere. Det er imidlertid begrensninger på denne tilnærmingen som denne protokollen er utformet for tilhenger celler kultivert i en monolayer. I klinisk praksis, forskjeller i vev arkitektur eller sykdom patologi (dvs. hyperkeratosis eller fibrose) kan redusere PS absorpsjon eller penetrasjon15. Som et resultat tilsvarer av behandling doser og eksperimentelle resultatene direkte ikke klinisk praksis. Spheroid svulst modeller og microfluidic chip har vært studert som metoder nærmere replikere svulst microenvironments16,17,18. Spheroids har indre og ytre mobilnettet nisjer som ulikt innlemme photosensitizers og representerer heterogene svulst arkitektur. Andre forskere har brukt microfluidic sjetonger skjermen behandling forhold og vaskulær levering av photosensitizers. Microfluidic chips kan imidlertid være dyrt å utvikle eller vanskelig å gjennomføre for forskere kjent med teknikken. Videre gjenspeiler spheroids og microfluidic chips ikke klinisk behandling av hudkreft som photosensitizers brukes direkte på svulst overflaten uten vaskulær formidling. Forskere må vurdere fordeler og ulemper monolayer kultur, formet svulst modeller og microfluidic sjetonger for studere PDT i forskjellige sykdommen systemer. Som det er ingen immunceller eller ekstracellulær matrix, er det ikke mulig å fastslå hvordan PDT påvirker komplekse celle-celle interaksjoner. Forskere må bekrefte i vitro eksperimentelle resultater dyremodeller og kliniske studier. For å oppnå høy mellom test gyldigheten, er det viktig å opprettholde konsekvent inkubasjon og lys parametere når du utfører i vitro PDT eksperimenter.

Temperaturen er kjent for å endre effekten av PDT19. En studie viste at celledød, 5-ALA opptak, PP-IX dannelse og cytokin utgivelsen kan bli styrket av rugende celler med 5-ALA ved temperaturer opp til 44 ° C19. Inkubasjon temperaturer over 44 ° C kan føre til termisk indusert celledød, og inkubasjon temperaturer under 20 ° C føre til betydelige 5-ALA opptak og akkumulering19. Vi anbefaler at forskere utfører PS incubations på temperatur regulerbare oppvarming blokk på en konstant temperatur kontroll for potensielt confounding termiske effekten. I tillegg er det viktig å ruge på photosensitizer for en tilstrekkelig mengde tid å tillate konvertering av 5-ALA i PP-IX. I denne protokollen, ble SCC-13 celler inkubert med 5-ALA i 30 min, som ble indusert celle apoptose. Vi har tidligere vist at en 10 min inkubasjonstiden for 5-ALA ikke betydelig økte apoptose i fibroblast sammenlignet med ubehandlet kontroll fibroblaster11,14. PP-IX begynner samler i musen huden etter 5-ALA er incubating i seks minutter på 37 ° C. Derfor etter ti minutter med 5-ALA inkubering, kan det ikke være tilstrekkelig opphopning av PP-IX å indusere celle apoptose20. Vi anbefaler en minimum inkubasjonstid på 20 til 30 min for 5-ALA basert på våre tidligere studier11,14. Forskere må optimalisere inkubasjonstid basert på laboratoriet innstilling, photosensitizer av interesse, celle type og klinisk. Antistoff titrering og optimalisering eksperimenter kan utføres best resultater med produsenter retningslinjer. Andre analyser av interesse kan utføres etter blå lys photoactivation inkludert dihydroethidium flyt cytometric kvantifisering av ROS. 14

Variasjon i lys levert per enhet areal (dvs. Irradians) og total bestråling dose (dvs. fluence) i photoactivation-fasen kan påvirke ROS dannelse og celle apoptose21. Forholdet mellom fluence og Irradians tid kan beskrives med følgende ligning:

Fluence (J/cm2) = Irradians (W/cm2) x tid (s)

Fluence er avhengig av tid, kan forlenge eller forkorte photoactivation fasene endre behandling effekt. Irradians er proporsjonal med avstand kvadrat mellom lyskilden og vevet. Som et resultat, hvis lyset er for langt unna, det er ikke nok lys energi levert til målrettet vev å opphisse i PS. eventuelt Irradians kan økes ved lys reflekteres omkringliggende overflater. Derfor anbefaler vi utfører lys irradiations med celle kultur plater på en svart overflate å hindre lyset refleksjon. Forskere kan kjøpe kommersielt tilgjengelig eller FDA-godkjent blå hemmeligstemplet og fluorescerende enheter bruke PDT eksperimenter, men disse enhetene kan ha ulike ytelser og lys feltet ensartethet. En bølgelengde-spesifikke fotometer bør brukes til å måle Irradians på celleoverflaten og ensartethet i feltet lys før hvert eksperiment for konsistente resultater. En kommersielt tilgjengelig diffuser kan brukes til å forbedre feltet ensartethet, om nødvendig.

Vi har beskrevet i vitro tilnærming til undersøker PDT av detaljering teori, eksperimentelle metoder, begrensninger, potensielle fallgruver og anbefalinger for optimering, oppsummert. PDT er en nyttig klinisk fremgangsmåte og i vitro forskning tillate utviklingen av romanen PSs, optimalisering av protokoller og nye indikasjoner for PDT.

Disclosures

DUSA/Søn farmasøytiske gitt 5-ALA og BLU-U lys enheten. Dette manuskriptet ble støttet av Dr. Jagdeos gjenværende midler. Innholdet representerer ikke synspunktene til det amerikanske Department of Veterans Affairs eller myndighetene i USA.

Acknowledgments

Forfatterne har ingen takk.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Keratinocyte serum free medium  Thermofisher 17005042 Culture medium for SSC-13 cells
DMEM low glucose glutamax Thermofisher 10567022 Possible culture medium for other cell types
6-well culture plates Thermofisher 720083
PBS Thermofisher 14190250
0.25% Trypsin-EDTA Thermofisher 25200056
Trypan Blue Solution, 0.4% Thermofisher 15250061 For cell counting and plating 
BLU-U light  DUSA Request from manufacturer Other blue LED, flourescent, or halogen lights may used 
5-ALA DUSA Request from manufacturer
FBS Atlanta Biologicals C17032
FlowCellect Annexin Red Kit Millipore Sigma  FCCH100108  Propidium iodide may replace 7-AAD. Comes with annexin-V, 7-AAD, and flow buffer
FACSCanto II BD Request from manufacturer Any flow cytometer may be used 
Counting Chamber Hausser 3120 For cell counting and plating 
FlowJo FlowJo Request from manufacturer Flow cytometry analysis software

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Morton, C., et al. European Dermatology Forum guidelines on topical photodynamic therapy. European Journal of Dermatology. 25 (4), 296-311 (2015).
  2. Ozog, D. M., et al. Photodynamic therapy: A clinical consensus guide. Dermatologic Surgery: Official Publication for American Society for Dermatologic Surgery. 42 (7), 804-827 (2016).
  3. Abrahamse, H., Hamblin, M. R. New photosensitizers for photodynamic therapy. Biochemical Journal. 473 (4), 347-364 (2016).
  4. Josefsen, L. B., Boyle, R. W. Photodynamic therapy and the development of metal-based photosensitisers. Metal-Based Drugs. 2008, 276109 (2008).
  5. Ohgari, Y., et al. Mechanisms involved in δ-aminolevulinic acid (ALA)-induced photosensitivity of tumor cells: Relation of ferrochelatase and uptake of ALA to the accumulation of protoporphyrin. Biochemical pharmacology. 71 (1-2), 42-49 (2005).
  6. Kessel, D., Luo, Y. Mitochondrial photodamage and PDT-induced apoptosis. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 42 (2), 89-95 (1998).
  7. Goldberg, D. J. Photodynamic therapy in skin rejuvenation. Clinics in Dermatology. 26 (6), 608-613 (2008).
  8. Sakamoto, F. H., Lopes, J. D., Anderson, R. R. Photodynamic therapy for acne vulgaris: A critical review from basics to clinical practice: Part I. Acne vulgaris: When and why consider photodynamic therapy. Journal of the American Academy of Dermatology. 63 (2), 183-193 (2010).
  9. Boen, M., Brownell, J., Patel, P., Tsoukas, M. M. The role of photodynamic therapy in acne: An evidence-based review. American Journal of Clinical Dermatology. 18 (3), 311-321 (2017).
  10. Allison, R. R., Moghissi, K. Oncologic photodynamic therapy: Clinical strategies that modulate mechanisms of action. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 10 (4), 331-341 (2013).
  11. Koo, E., Austin, E., Mamalis, A., Jagdeo, J., et al. Thermal ultra short photodynamic therapy: heating fibroblasts during sub-30-minute incubation of 5-aminolevulinic acid increases photodynamic therapy-induced cell death. Dermatologic Surgery: Official Publication for American Society for Dermatologic Surgery. , (2017).
  12. Koo, E., Austin, E., Mamalis, A., Jagdeo, J. Efficacy of ultra short sub-30 minute incubation of 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy in vitro. Lasers in Surgery and Medicine. 49 (6), 592-598 (2017).
  13. JoVE Science Education Database. Cell Biology. Annexin V and Propidium Iodide Labeling. JoVE. , Cambridge, MA. (2018).
  14. Mamalis, A., Koo, E., Sckisel, G., Siegel, D., Jagdeo, J. Temperature-dependent impact of thermal aminolaevulinic acid photodynamic therapy on apoptosis and reactive oxygen species generation in human dermal fibroblasts. British Journal of Dermatology. 175 (3), 512-519 (2016).
  15. Gilaberte, Y., et al. Cellular intrinsic factors involved in the resistance of squamous cell carcinoma to photodynamic therapy. Journal of Investigative Dermatology. 134 (9), 2428-2437 (2014).
  16. Yoon, H. K., et al. Nanophotosensitizers engineered to generate a tunable mix of reactive oxygen species, for optimizing photodynamic therapy, using a microfluidic device. Chemistry of Materials. 26 (4), 1592-1600 (2014).
  17. Chen, Y. -C., Lou, X., Zhang, Z., Ingram, P., Yoon, E. High-throughput cancer cell sphere formation for characterizing the efficacy of photo dynamic therapy in 3D cell cultures. Scientific Reports. 5, 12175 (2015).
  18. Campos, C., Inada, N., Kurachi, C. Low-dose PDT on breast cancer spheroids. Optical Methods for Tumor Treatment and Detection: Mechanisms and Techniques in Photodynamic Therapy XXVII. , (2018).
  19. Yang, J., et al. The influence of temperature on 5-aminolevulinic acid-based photodynamic reaction in keratinocytes in vitro. Photodermatology, Photoimmunology & Photomedicine. 26 (2), 83-88 (2010).
  20. Juzeniene, A., Juzenas, P., Kaalhus, O., Iani, V., Moan, J. Temperature effect on Accumulation of protoporphyrin IX after topical application of 5-aminolevulinic acid and its methylester and hexylester derivatives in normal mouse skin. Photochemistry and Photobiology. 76 (4), 452-456 (2002).
  21. Novak, B., Heesen, L., Schary, N., Lubbert, H. The influence of different illumination parameters on protoporphyrin IX induced cell death in squamous cell carcinoma cells. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 21, 385-392 (2018).

Tags

Medisin problemet 138 Fotodynamisk terapi PDT photosensitizer aminolevulinic syre fototerapi hudkreft Aktiniske keratose
<em>In Vitro</em> tilnærming til Fotodynamisk terapi
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Austin, E., Jagdeo, J. An In… More

Austin, E., Jagdeo, J. An In Vitro Approach to Photodynamic Therapy. J. Vis. Exp. (138), e58190, doi:10.3791/58190 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter