Bu yöntem kan trypanosome ayrılma memeli kan hücreleri daha az negatif olmak onların yüzey şarj bağlı olarak değişir. Enfekte kan yerleştirilir ve bir anyon değiştirici sütun tedavi. Bu yöntem, en uygun teşhis için Afrika tripanozomiyasına, immünolojik, biyolojik, biyokimyasal, ilaç ve moleküler biyoloji İncelemeler için saflaştırılmış parazitler sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Afrika, anyon-değiştiriciler (Diethylaminoethyl-selüloz sütunlar) tarafından kandan da dahil olmak üzere hücre dışı Tripanozomlar arıtma
Bu makalede
Özet
Özet
Bu yöntem Tripanozomlar, parazit bulaşmış kan hayvan ve insan Afrika tripanozomiyasına için (HAT), sorumlu ayırma verir. Bu ilk aşamasının şapka tanı için en iyi yöntem ve ayrıca bu parazit arıtma yöntemi serolojik izin verir ve araştırmalar araştırma.
ŞAPKA çeçe sineği aktarılan Trypanosoma brucei gambiense tarafından neden olduğu ve T. b. rhodesiense. İlgili Tripanozomlar hayvan tripanozomiyasına sorumlu ajanlar. Trypanosome algılama şapka tanı, tedavi ve takibi için esastır. Burada açıklanan tekniği alan koşulları T. b. gambiense şapka tanı için uyarlanmış en hassas parazit algılama teknik ve bir saat içinde tamamlanabilir. Kan pH 8 daha önce ayarlanmış bir anyon değiştirici sütuna (DEAE selüloz) katmanlı ve elüsyon arabellek eklenir. Daha az olumsuz ücret Tripanozomlar geçmesine ise son derece olumsuz dolu kan hücreleri sütun adsorbe. Toplanan Tripanozomlar Santrifüjü tarafından pelleted ve mikroskopi tarafından görülmektedir. Ayrıca, parazitler hücresel hasar onların infektivite muhafaza ederken hazırlanır.
Arıtılmış Tripanozomlar immünolojik test etmek için gerekli olan; Bunlar trypanolysis tahlil, şapka seroloji altın standart kullanılır. Lekeli parazitler alan seroloji kartı Aglutinasyon test (CATT) kullanılmaktadır. Antijenler gibi değişik yüzey glikoprotein, exoantigens, saflaştırılmış Tripanozomlar üzerinden de çeşitli uzun kullanılır. Burada açıklanan yordamı Afrika Tripanozomlar için tasarlanmıştır; Sonuç olarak, Kromatografi koşulları her trypanosome zorlanma ve daha genel olarak, her tür Ana Memeli kan için adapte zorunda.
Bu patojenler büyüleyici kolayca saflaştırılmış ve kullanmak kullanılabilir vardır biyokimyasal, moleküler ve hücre membran reseptörleri, sinyal ve gen düzeyinde ana bilgisayar-parazit ilişkileri araştırmak için konak hücreleri ile ortak kültür Biyoloji çalışmaları ifade; test içinde in vitroilaç; Gen silme, mutasyon veya metabolik süreçleri, hücre iskeleti Biyogenez ve parazit hayatta kalma overexpression incelenmesi.
Giriş
Yöntemi sunulan açıklanan burada Tripanozomlar, parazitler kan hayvan ve insan Afrika tripanozomiyasına için (HAT), sorumlu ayırma verir. Bu ilk aşamasının şapka tanı için en iyi yöntem ve ayrıca bu parazit arıtma yöntemi sağlam serolojik ve araştırma soruşturma izni.
ŞAPKA çeçe sineği aktarılan Trypanosoma brucei gambiense ve T. b. rhodesiense1ile. neden olur Bu protozoon parazitler (hemolymphatic sahne) hastalığın ilk aşamasında extracellularly kan, lenf ve interstisyel sıvı ile çarpın. Parazitler kan beyin bariyerini geçerken ikinci sahne (meningoencephalitic sahne) başlar; Onun adı "uyk....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Araştırmalar ana bakım ve laboratuvar hayvanlarının kullanımı (1996 revize NIH yayın No. 85±23) için standartlarla uyumlu. İletişim kuralları bizim yerel Etik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. hayvanlar
- 8-10 hafta yaşlı, 20-25 g, on beş gün önce her deney tesisi konut bir hayvan yaşlı kadın İsviçre (OF-1) fareler tutun. Onları bir korumalı, sıcaklık (22 ° C) ve nem (% 50) tutulur havalandırılmış kutularındaki ev Oda, açık/kapalı ışık-siklet 12 saat ile kontrol.
- Hayvanlar yiyecek ve su için ücretsiz erişim sağlar. Ağrı, acı ve sıkıntı en aza indirmek ve zenginleştirme ortamı sağlar.
- Konut için düz duv....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Arıtılmış Tripanozomlar ilaç testlerinde kullanılmaktadır. Parazitler belirli ilaçların tek başına ya da karışık19seri dilutions içeren kültür kuyu aktarılır. Mikroskobik gözlemler, motilite değerlendirilmesi bir belirtecidir canlılık, sadece birkaç Dug'lar test edilen gerçekleştirilebilir, AlamarBlue hücre canlılığı tahlil büyük hareketliliği deneyleri için mükemmel bir yöntem20eleme ilaç sırasında ise. Pentamidine, şapka tedavisinde kullan.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Arıtılmış Tripanozomlar İmmünoloji, biyokimya, hücresel ve moleküler biyoloji çalışma için güçlü bir araç temsil eder. Veri ve sonuçları büyük expanses Tripanozomlar elde edilmiştir hangi sonra diğer ökaryotik hücreler30' dan itibaren bilgi edinmek için yardımcı oldu. Çünkü onlar hayatta ve iki çok farklı ortamlarda büyümeye izin vermek çok sayıda mekanizmaları tasarlanmış Tripanozomlar önemli ve ilginç araştırma Ayrıca vardır: çeçe sineği vektör ve memeli ev sahibi23,.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Biz tüm üyeleri UMR 177 INTERTRYP IRD CIRAD Université de Bordeaux, teşekkür ederim. Bu araştırma iç Bordeaux Üniversitesi fon tarafından desteklendi ve destek LABEX ParaFrap ANR-11-LABX-0024 ANR ve derneğin pour le développement de la recherche en parasitologie et médecine tropicale ve hizmet de coopération et d'action culturelle de l'Ambassade de France à Bangui (Centrafrique).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 10 mL Pipetler | Falcon | 357,551 | |
| 2 mL Pipetler | Falcon | 352,507 | |
| Santrifüj tüpü 50 mL | Falcon | 352,070 | |
| Santrifüj | Sigma Aldrich | 4K15 | |
| DEAE selüloz | Santa Cruz | s/c- 211213 | 100 G |
| filtre kağıdı | Whatman | 1,001,125 | |
| Düz tabanlı matara dar boyunlu | Duran | 21 711 76 | 6000 mL |
| Glikoz | VWR | 101174Y | 500 G |
| Heparin | Sigma Aldrich | H3149-50KU | 5 000 U |
| KH2PO4 | VWR | 120 26936.260 | 500 G |
| Mikroskop | Olympus | CH-20 | |
| Mikroskop lameller | Thermofisher bilimsel | CB00100RA020MNT0 | |
| Mikroskop slaytları | Thermofisher bilimsel | AGAA000001 | |
| Na2HPO4 | VWR | 100 28026; 260 | 500 G |
| NaCl | VWR | 27800.291 | 1 KG |
| NaH2PO4 | VWR | 110 33616; 262 | 500 G |
| Nalgene Plastik Medya Şişeleri boyutu 125 mL | Thermofisher scientific | 342024-0125 | |
| Nalgene Plastik Medya Şişeleri boyutu 500 mL | Thermofisher scientific | 342024-0500 | |
| Pasteur Pipet | VWR | BRND125400 | |
| Penisilin 10.000 UI/Streptomisin 10.000 & mikro; g | EUROBIO | CABPES01 OU | 100 mL |
| Fenol kırmızısı | Sigma Aldrich | P0290 | 100 mL |
| Beze | Dutscher | SS + 10S21381 | |
| Doku kültürü başlığı | Thermoelectro Corporation | MSC-12 | |
| Trypanosoma brucei brucei< / em > | Tropikal Tıp Enstitüsü (Antwerp, Belçika). | ANTAT 1.1 | |
| Trypanosoma brucei gambiense | Tropikal Tıp Enstitüsü (Antwerp, Belçika). | ITMAP 1893 | |
| Trypanosoma musculi | London School of Hygiene and Tropical Medicine (İngiltere) | Partinico II |
Kaynaklar
- Büscher, P., Cecchi, G., Jamonneau, V., Priotto, G. Human African trypanosomiasis. Lancet. 390 (10110), 2397-2409 (2017).
- Lejon, V., Bentivoglio, M., Franco, J. R. Human African trypanosomiasis. Handbook of Clinical Neurology. 114, 169-181 (2013).
- Giordani, F., Morrison, L. J., Rowan, T. G., De Koning, H. P....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
