Digitale Analyse der Immunostainierung von ZW10 Interacting Protein in menschlichen Lungengeweben

Summary

ZW10 Interacting Protein (ZWINT) beteiligt sich am mitotischen Spindel-Checkpoint und der Pathogenese des Karzinoms. Hier stellen wir eine Methodik zur Immunostainierung von ZWINT in menschlichen Lungenkrebsgeweben vor, gefolgt vom digitalen Scannen ganzer Dias und Bildanalyse. Diese Methode kann qualitativ hochwertige digitale Bilder und zuverlässige Ergebnisse liefern.

Abstract

Ziel dieser Studie ist es, eine Methodik zur Immunfärbung menschlichen Lungengewebes einzuführen, gefolgt von einem digitalen Volldia-Scanning und einer Bildanalyse. Digitales Scannen ist eine schnelle Möglichkeit, einen Stapel von Dias zu scannen und digitale Bilder mit hoher Qualität zu erzeugen. Es kann konkordante Ergebnisse mit konventioneller Lichtmikroskopie (CLM) von Pathologen produzieren. Darüber hinaus ermöglicht die Verfügbarkeit digitaler Bilder, dass dieselbe Folie gleichzeitig von mehreren Personen beobachtet werden kann. Darüber hinaus können digitale Bilder von Dias in einer Datenbank gespeichert werden, was eine langfristige Verschlechterung von Glasdias vermeidet. Die Grenzen dieser Technik sind wie folgt. Zunächst benötigt es hochwertiges vorbereitetes Gewebe und die ursprüngliche Immunhistochemie (IHC) gleitet ohne Beschädigung oder überschüssige Dichtstoffrückstände. Zweitens sollten Tumor- oder Nichttumorbereiche von erfahrenen Pathologen vor der Analyse mit Software angegeben werden, um Verwirrung über den Tumor oder Nichttumorbereiche während der Bewertung zu vermeiden. Drittens muss der Bediener die Farbwiedergabe während des gesamten Digitalisierungsprozesses in der Ganzschiebebildgebung steuern.

Introduction

ZW10 interagierendes Protein (ZWINT) ist ein notwendiger Bestandteil des Kinetochore-Komplexes, der am mitotischen Spindel-Checkpoint^1,2,3beteiligt ist. Es wurde berichtet, dass die Erschöpfung von ZWINT zu einer abnormen vorzeitigen Chromosomentrennung^1,2,3führt. Jüngste Studien haben ergeben, dass ZWINT an der Pathogenese mehrerer Tumoren beteiligt ist, indem die Proliferation von Tumorzellen gefördert wird^4,5. Wir berichte....

Protocol

Alle hier beschriebenen Methoden wurden vom Ethikkomitee des Zhongnan Hospital der Wuhan University und des Renmin Hospital der Wuhan University genehmigt.

1. Vorbereitung von IHC-Folien

1. Fixieren Sie die Lungengewebeprobe, indem Sie das menschliche Lungengewebefragment (ca. 3 x 3 cm) in 4% Paraformaldehyd in phosphatgepufferter Saline (PBS) für 24 h bei Raumtemperatur (RT) eintauchen.
2. Dehydrieren Sie das Gewebe in 80%, 95% und 100% Ethanol für 15 min, 20 min, bzw. 20 min, bei Raumtemperatur. Schließlich tauchen Sie das Gewebe in 100% Xylol 3x für jeweils 20 min bei Raumtemperatur ein.
3. Zum Einbetten das Gewebe 3....

Results

Wir haben die Expressionskonzentrationen von ZWINT in 28 Paaren von nicht-kleinzelligen Lungenkrebs (NSCLC)-Proben (Tumor und angrenzendes Nichttumorgewebe) gemessen, darunter 14 Plattenepithelkarzinome (SCCs) und 14 Adenokarzinome (ADCs) durch IHC. Das ganzdiale digitale Scannen der Dias lieferte digitale Bilder von hoher Qualität (Abbildung 1A). Die Ergebnisse zeigten, dass der H-Wert des Lungenkrebses signifikant höher war als der von angrenzenden nicht-kr.......

Discussion

Ganzdia-Scanning wird zu einem heißen Thema für sein robustes Scannen und die Produktion von qualitativ hochwertigen Bildern für klinische und Forschungszwecke^11,12,13. Bilder können mit Dia-Scanning-Mikroskopen innerhalb von Minuten erstellt werden^11,12,13. Mit dieser Methode erhielten wir hochwertige Bilder für ZWINT IHC-Dias und verg.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Pannoramic MIDI	3D HISTECH	Cat: PMIDI-040709	Ein automatisierter digitaler Diascanner mit einem bemerkenswerten Funktionsumfang: 12 Objektträgerkapazitäten, Fluoreszenzabtastung und vieles mehr.
QuantCenter	3D HISTECH	Heruntergeladen von der offiziellen Website des Unternehmens	Das Framework für die Bildanalyseanwendungen von 3DHISTCH.
LEICA RM2235	Leica Microsystems	Kat: 14050038604	Die verbesserte Präzision des neuen Zubehörs erhöht den Komfort bei der Annäherung von Block zu Messer sowie bei der Probenausrichtung.
Kaninchen Anti-Mensch Anti-ZWINT Antikörper	Abcam	Katze: ab197794	Immunhistochemische Analyse von ZWINT in menschlichem Lungengewebe.
Anti-Kaninchen-Sekundärantikörper	Wuhan Goodbio Technology	Cat:GB23303-1	Sekundärantikörper für die IHC-Färbung.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung	Wuhan Goodbio Technology	Kat:G0002	Eine Lösung, die einen Phosphatpuffer enthält.
OLYMPUS CX23	OLYMPUS	Cat:6M87620	Mikroskop zur Detektion von H& E- oder IHC-Objektträger.
Dimethylbenzol	Shanghai Lingfeng Chemisches Reagenz	Kat:1330-20-7	Eine farblose, brennbare Flüssigkeit, die als Lösungsmittel und Klärmittel bei der Vorbereitung von Gewebeschnitten für mikroskopische Untersuchungen verwendet wird.
Hämatoxylin-Färbelösung	Wuhan Servicebio-Technologie	Kat:G1039	Es wird häufig für histologische Untersuchungen verwendet, oft färbt es die Zellkerne blau.
Tween 20	Baitg	Cat:2005-64-5	Es ist ein nichtionisches Tensid vom Polysorbat-Typ, das durch die Ethoxylierung von Sorbitan vor der Zugabe von Laurinsäure gebildet wird. Es wird als Abschreckungsmittel und Emulgator in pharmakologischen Anwendungen eingesetzt.
Zitronensäure-Reparaturflüssigkeit	Wuhan Servicebio-Technologie	Kat: G1202	wird verwendet, um das Antigen nach der Fixierung während des IHC-Verfahrens zu reparieren.
LEICA ASP200s	Leica	Cat: 14048043626	Es wurde für die Routine- und Forschungshistopathologie von bis zu 200 Kassetten entwickelt.
LEICA Arcadia H	Leica	Cat: 14039354103	Es handelt sich um eine beheizte Paraffineinbettstation, die eine einfache Bedienung und präzise Steuerung ermöglicht, was zu einer verbesserten Qualität, einem reibungslosen Arbeitsablauf und Zuverlässigkeit führt.
LEICA Arcadia C	Leica	Cat: 14039354102	Es handelt sich um eine Kühlplatte, die auf ihrer großen Arbeitsfläche mehr als 60/65 Kassetten fasst. Er wurde mit einem umgebungsadaptiven Steuermodul ausgestattet, um sicherzustellen, dass die Betriebstemperatur immer bei -6 °C stabilisiert wird.
CaseViewer Software	3DHISTECH