Locus coeruleus nöronlar fizyolojik süreçleri çeşitli ilgili küçük bir kümesidir. Burada, biz fare beyin bölümleri çalışmalar proteinler ve bu çekirdek metal analizleri hazırlamak için bir protokol tanımlamak.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare beynindeki Locus Coeruleus lokalizasyonu
Bu makalede
Düzeltme bildirimi
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Özet
Özet
Locus coeruleus (LC) fizyolojik fonksiyonları bir dizi modüle nöronlar üreten norepinefrin önemli bir merkezidir. LC yapısal veya fonksiyonel anormallikleri korteks, Hipokampus ve beyincik de dahil olmak üzere çeşitli beyin bölgeleri etkileyen ve depresyon, bipolar bozukluk, anksiyete, hem de Parkinson hastalığı ve Alzheimer hastalığı için katkıda bulunabilir. Bu bozuklukların genellikle metal dengesizliğe ile ilişkili, ama metaller LC rolü yalnızca kısmen anlaşılmaktadır. Akkreditivin morfolojik ve fonksiyonel çalışmalar insan patolojiler ve metaller katkısını daha iyi anlamak için ihtiyaç vardır. Fareler yaygın olarak kullanılan bir deneysel model, ancak fare LC küçük (~0.3 mm çap) ve sigara bir uzman için tanımlamak zor. Burada, biz fare beynindeki LC yerelleştirmek için adım adım bir immünhistokimya tabanlı protokol tanımlamak. Dopamin-β-hidroksilaz (DBH) ve alternatif olarak, tirozin hidroksilaz (TH), son derece LC ifade edilen her iki enzim immunohistokimyasal işaretleyicilerini beyin dilimler olarak kullanılır. LC içeren bölümler için bitişik bölümleri Histoloji morfolojik araştırmalar, metabolik test, hem de metal görüntüleme için de dahil olmak üzere daha fazla analiz, x-ışını Floresans mikroskobu (XFM) tarafından kullanılabilir.
Giriş
Locus coeruleus (LC) beyin sapı ve norepinefrin (NE) üretim1büyük bir sitenin önemli bir ülkedir. LC korteks, Hipokampus ve beyincik3 projeksiyonlar beyin2 boyunca gönderir ve sirkadiyen ritim4,5, dikkat ve bellek6dahil olmak üzere önemli fizyolojik süreçleri düzenler, 7, Bilişsel süreçler8ve duygu9,10stres. Disfonksiyon Akkreditivin Parkinson hastalığı12,13<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Çalışmalar hayvanların Johns Hopkins Üniversitesi hayvan bakımı ve kullanımı (ACUC) iletişim kuralı numarası M017M385 tarafından onaylanmış.
1. beyin Dilimleme
- Hareketsiz için % 3 isoflurane uygulama tarafından fareler anestezi.
- Bir pamuk topağı isoflurane damlaları ile ıslatın ve bir 15 mL microcentrifuge tüpü yerleştirin. Hayvanın burun tüp içine yerleştirin ve isoflurane nefes sağlar. Anestezi derinliği için yanıt-e doğru ayak parmağı-çimdik eksikliği tarafından kontrol.
- Hayvan sırtında yerleştirin ve yoluyla onun kol ve bacaklar bir T iğne ile onun karın erişimine süre hareketsiz.
- Ekran....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Değişiklikleri (örneğin, Cu, Fe, Zn ve Mn) metal homeostazı kez LC34,35değişiklikler dahil olmak üzere nörolojik hastalıklarda gözlenir. Böylece, beyindeki metal düzeylerini belirleme hastalığı mekanizmaları anlamak için gereklidir. Açıklanan protokolü kullanılarak oluşturulan beyin bölümleri LC diğer metaller ve Cu seviyesini ölçmek ve onları LC dışındaki bölgelerde düzeylere karşılaştırmak için kullanılabilir. (
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Düzgün örnek yönlendirme bu iletişim kuralı çok önemli bir adımdır. LC (beyincik ve aşağı olacaklar arasında sınır) bulmak için beyin dorsal yüzeyi anatomik özellikleri kullanmakta olduğunuz için bölümleri düzgün uyumlu önemlidir. Bu fare beyin dilimleyici matris beyin arızalı özen gerektirir. Anterior ve posteiror LC çekirdek eksik önlemek için daha fazla doku ~ 500 mikron kesme tavsiye ediyoruz. En yaygın hata LC tamamen eksik sonuçları çok az bölümleri azaltmak olduğunu. Böylece, bu protokol sonrası kişinin ilk kez, g.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Teşekkürler
Biz Abigael Muchenditsi fare koloni bakımı için teşekkür ederim. ABD Enerji Bakanlığı, bilim Office, Office temel Enerji Bilimler, sözleşme numarası altında tarafından desteklenen Argonne Ulusal Laboratuvarı Gelişmiş foton kaynak kullanımı: DE-AC02-06CH11357. Biz Olga Antipova ve Dr. Stefan Vogt kullanıcı desteği ve gelişmiş foton kaynağında yardım için teşekkür ederiz. Bu eser SL için Ulusal Sağlık Enstitüsü grant 2R01GM101502 tarafından finanse edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Yetişkin fare beyin dilimleyici matrisi | Zivic Instruments | BSMAS001-1 | |
| Anti-tavşan ikincil antikoru, Alexa Fluor 488 (kaynak - eşek) | Thermo Fisher Scientific | A-21206 | |
| Şarjlı cam slaytlar | Genesee | 29-107 | |
| Konfokal mikroskop | Zeiss | LSM 800 | |
| Kriyostat | Microm GmbH | HM 505E | |
| Kriyostat kesme bıçakları | Thermo Fisher Scientific | MX35 | |
| Makas Mini, 9.5cm | Antech Teşhisler | 503241 | |
| DAPI (4 ',6-diamidino-2-fenilindol) | Sigma-Aldrich | D9542-10MG | |
| Dopamin ve beta;-hidroksilaz (DBH) antikoru - kurum içi üretim (kaynak - tavşan) | B. Eipper | - | |
| Dopamin ve beta;-hidroksilaz (DBH) antikoru - ticari olarak kullanılabilir (kaynak - tavşan) | Hücre Sinyalizasyonu | 8586 | |
| Falcon tüpleri, 50ml | ABD Bilimsel | 339652 | |
| Foran (izofloran) | Baxter | NDC 1019-360-60 | |
| Forseps Mikro Adson | Antech Teşhis | 501245 | |
| Sert set montaj ortamı | EM bilimleri | 17984-24 | |
| Mikroskop | Pascal | LSM 5 | |
| Çok kuyulu plakalar, 24 kuyu | Thermo Fisher Scientific | 930186 | |
| Optimum kesme sıcaklığı bileşiği (OCT) | VWR / doku teknolojisi | 102094-106 | |
| Paraformaldehit (PFA) / formalin% 10 | Fisher Scientific | SF98-4 | |
| Peel-A-Way tek kullanımlık gömme kalıpları | Polysciences Inc. | 18646A | |
| Kalem fırçası | |||
| Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) | Life Tech | 14190250 | |
| Tıraş bıçakları | Amazon | ASIN: B000CMFJZ2 | |
| Spatula | Antech Teşhis | 14374 | |
| T pinleri | Ofis Deposu | 344615 | |
| Stereotaksik Koordinatlarda Fare Beyni, Paxinos ve Franklin, 3rd Edition | Amazon | ISBN: 978-0123694607 | |
| Triton-X 100 (PBSD'yi hazırlamak için) | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P7949-500ml | |
| Tirozin hidroksilaz (TH) antikoru (kaynak - tavşan) | EMD Millipore | AB152 | |
| SPEX Sample Prep | 3525 | ||
| için Ultralene ince filmGeniş alan floresan mikroskobu | Zeiss | Axio Zoom.V16 |
Kaynaklar
- Robertson, S. D., Plummer, N. W., de Marchena, J., Jensen, P. Developmental origins of central norepinephrine neuron diversity. Nature neuroscience. 16, 1016-1023 (2013).
- Kobayashi, R. M., Palkovits, M., Jacobowitz, D. M., Kopin, I. J.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Düzeltme
Formal Correction: Erratum: Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain
Posted by JoVE Editors on 4/08/2019. Citeable Link.
An erratum was issued for: Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain. An author affiliation was updated.
The affiliation for Evan Maxey was updated from:
Department of Neuroscience, Johns Hopkins University
to:
X-ray science division, Advanced Photon Source, Argonne National Laboratory
