La macchiatura di Immunohistochemical fluorescente multiplex, Imaging e analisi in campioni istologici di linfoma

Guo Hong; Shuangyi Fan; The Phyu; Priyanka Maheshwari; Michal Marek Hoppe; Hoang Mai Phuong; Sanjay de Mel; Michelle Poon; Siok-Bian Ng; Anand D. Jeyasekharan

doi:10.3791/58711

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Articolo metodologico

La macchiatura di Immunohistochemical fluorescente multiplex, Imaging e analisi in campioni istologici di linfoma

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DOI:

10.3791/58711

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9 gennaio 2019

Guo Hong^*¹^,² , Shuangyi Fan^*³ , The Phyu³ , Priyanka Maheshwari² , Michal Marek Hoppe² , Hoang Mai Phuong² , Sanjay de Mel⁴ , Michelle Poon⁴ , Siok-Bian Ng²^,³ , Anand D. Jeyasekharan²^,⁴

¹Department of Laboratory Medicine, AnSteel Group General Hospital, ²Cancer Science Institute of Singapore, National University of Singapore, ³Department of Pathology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ⁴Department of Haematology-Oncology, National University Health System

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Qui descriviamo un protocollo per multiplex immunohistochemical fluorescente di colorazione e di imaging per la localizzazione simultanea di più antigeni tumore-associati nel linfoma. Questo protocollo può essere esteso all'analisi di colocalizzazione dei biomarcatori all'interno di tutte le sezioni di tessuto.

Abstract

Metodi di immunoistochimica (IHC) per l'analisi in situ di espressione della proteina da microscopia chiara sono un potente strumento per la ricerca sia gli scopi diagnostici. Tuttavia, la visualizzazione e la quantificazione degli antigeni multipli in un singolo tessuto sezione utilizzando convenzionali cromogenico IHC è impegnativo. Multiplex imaging è particolarmente rilevante nella ricerca di linfoma e di diagnostica, dove gli indicatori devono essere interpretate nel contesto di un microambiente tumorale complesse. Qui descriviamo un protocollo per multiplex fluorescente IHC che macchia per permettere la valutazione quantitativa di bersagli multipli in tipi cellulari specifici di interesse nel linfoma. Il metodo copre gli aspetti della convalida dell'anticorpo, ottimizzazione dell'anticorpo, l'ottimizzazione multiplex con marcatori di sottotipi di linfoma, la colorazione dei vetrini di tessuto microarray (TMA) e la scansione delle diapositive, seguita da analisi dei dati, con specifico riferimento per linfoma. Spartiti per sia l'intensità media di un marcatore di interesse e la percentuale di positività, utilizzando questo metodo, vengono generati per facilitare ulteriormente l'analisi quantitativa. Multiplexing riduce al minimo l'utilizzo di esempio e vengono fornite informazioni spaziali per ogni indicatore di interesse.

Introduzione

Neoplasie linfoidi sono causati dalla incontrollata proliferazione maligna dei linfociti. Queste cellule sono componenti fondamentali del sistema immunitario e si localizzano gli organi immuni primari e secondari, quali il midollo osseo, nei linfonodi, milza e altri sistema linfoide mucosa-collegato. Neoplasie linfoidi sono un gruppo eterogeneo di disordini che sono classificati basato su una costellazione di caratteristiche, tra cui morfologia, immunofenotipo, caratteristiche genetiche e presentazione clinica. Mentre ogni parametro svolge un ruolo, lignaggio rimane una caratteristica distintiva e costituisce la base per il sistema di classificazione del WHO che ricon....