Méthode d'empalement de microélectrode pour enregistrer le potentiel de membrane d'une artère cérébrale moyenne cannulated

Summary

L'objectif principal de cet article est de fournir des détails sur la façon d'enregistrer le potentiel membranaire (V_m) de l'artère cérébrale moyenne en utilisant la méthode d'impalement de microélectrode. L'artère cérébrale moyenne cannulated est équilibrepour obtenir le tonus myogénique, et la paroi du vaisseau est empalé à l'aide de microélectrodes à haute résistance.

Abstract

Le potentiel membranaire (V_m) des cellules musculaires vasculaires lisses détermine le tonus des vaisseaux et donc le flux sanguin vers un organe. Les changements dans l'expression et la fonction des canaux ioniques et des pompes électrogéniques qui régulent V_m dans les conditions de la maladie pourraient potentiellement altérer V_m, tonalité vasculaire, et le flux sanguin. Ainsi, une compréhension de base de l'électrophysiologie et les méthodes nécessaires pour enregistrer avec précision V_m dans des états sains et malades sont essentiels. Cette méthode permettra de moduler V_m à l'aide de différents agents pharmacologiques pour restaurer V_m. Bien qu'il existe plusieurs méthodes, chacune avec ses avantages et ses inconvénients, cet article fournit des protocoles pour enregistrer V_m à partir de vaisseaux de résistance cannulés tels que l'artère cérébrale centrale en utilisant la méthode d'empalement de microélectrode. Les artères cérébrales moyennes sont autorisées à obtenir un tonus myogénique dans une chambre myographique, et la paroi du vaisseau est empalée à l'aide de microélectrodes à haute résistance. Le signal V_m est recueilli à l'aumoyen d'un électromètre, numérisé et analysé. Cette méthode fournit une lecture précise du V_m d'une paroi de navire sans endommager les cellules et sans changer la résistance de membrane.

Introduction

Le potentiel membranaire (V_m) d'une cellule se réfère à la différence relative de charge ionique à travers la membrane plasmatique et à la perméabilité relative de la membrane à ces ions. Le V_m est généré par la distribution différentielle des ions et est maintenu par des canaux ioniques et des pompes. Les canaux ioniques tels que K ^,Na^etCl contribuent substantiellement au v_mau repos . Les cellules musculaires vasculaires et lisses (VSMC) expriment plus de quatre types différents de canaux K¹, deux types de canaux Ca 2^(VGCC) (VGCC)², plus de deu....

Protocol

Les rats mâles ont été logés dans l'établissement de soins aux animaux de l'UMMC, qui est approuvé par l'Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC). Les animaux ont eu un accès gratuit à la nourriture et à l'eau tout au long de l'étude. Les animaux ont été maintenus dans un environnement contrôlé avec une température de 24 à 2 oC, des niveaux d'humidité de 60 à 80 % et des cycles de lumière/obscurité de 12 h. Tous les protocoles ont été approuvés par le Comité des soins et de l'utilisation des animaux de l'UMMC.

1. Préparation de l'équipement

1. Placez un amplificateur d'électromètre différentiel ....

Results

La méthode présentée peut être utilisée de façon fiable pour enregistrer V_m dans des navires cannulés. Une brève procédure décrivant comment isoler le MCA du cerveau est présentée à la figure 1A. Après avoir séparé le cerveau du crâne, le MCA a été disséqué et placé dans un plat de Petri contenant le PSS bas de calcium. Une partie du tissu conjonctif qui a été attaché a également été disséqué avec MCA utilisant des ciseaux de ressort et des forceps.......

Discussion

Cet article fournit les étapes nécessaires sur la façon d'utiliser une méthode d'empalement de microélectrode forte pour enregistrer V_m à partir d'une préparation de navire cannulated. Cette méthode est largement utilisée, et offre des enregistrements cohérents de haute qualité de V_m qui répondent à un large éventail de questions expérimentales.

Certaines considérations critiques et des étapes de dépannage sont décrites ici pour assurer le succès de la méthode. La qualité.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dissection instruments
Aneshetic Vaporiser	Parkland	scientifique V3000PK
Dissection microscope	Nikon Instruments Inc., NY	Eclipse Ti-S
Kleine Guillotine Type 7575	Harvard Apparatus, MA	73-198
Littauer Bone Cutter	Outils de haute science	16152-15
Moria MC40 Pince ultra fine	Outils de science fine	11370-40
Ciseaux chirurgicaux Sharp-Blunt	Outils de science fine	14008-14
Suture	Appareil de Harvard	72-3287
Ciseaux à ressort Vannas	Outils de science fine	15018-10
Instruments d’électrophysiologie
Caméra à dispositif à couplage de charge	Qimaging, , BC	Retiga 2000R
Amplificateur électromètre différentiel	WPI	FD223A
Transducteur de pression en ligne	Harvard Apparatus, MA	MA1 72-4496
Micromanipulateur	Thor labs	PCS-5400
Microélectrodes	Warner Instruments LLC, CT	G200-6,Micro
Fil (seringue en microfibre)	WPI	MF28G67-5
Porte-microélectrodes	WPI	MEH1SF
Myograph	Living Systems Instrumentation, VT	CH-1-SH
Extracter	Sutter Instrument, San Rafael, CA	P-97
Table sans vibrations	TMC	3435-14
< strong>Softwares
Clampex 10	Dispositifs
p Clamp 10	Dispositifs
Logiciel d’imagerie	Nikon, NY	NIS-elements
Chemicals
NaCl	Sigma	S7653
KCl	Sigma	P4504
MgSO4	Sigma	M7506
CaCl2	Sigma	C3881
HEPES	Sigma	H7006
Glucose	Sigma	G7021
NaH2PO4	Sigma	S0751
NaHCO3	Sigma	S5761