מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft

Summary

המטופל נגזר מבע (pdx) דגמים נוספים ביותר בסדר מלנומה מולקולרית תכונות ביולוגיות, הם ניבוי יותר של תגובת הטיפול לעומת רקמה פלסטית מסורתית התרבות מבוסס assays. כאן אנו מתארים את פרוטוקול ההפעלה הסטנדרטית שלנו להקמת דגמי PDX חדשים ואפיון/ניסויים של דגמי PDX קיימים.

Abstract

צבירת ראיות עולה כי תכונות מולקולריות וביולוגיות שונות בתאי מלנומה גדל בתוך כלי התרבות המסורתית דו מימדי רקמות לעומת בvivo בחולים אנושיים. זה בשל בחירת צוואר הבקבוק של אוכלוסיות שבטים של תאים מלנומה שיכול לצמוח ברוטי בחוץ בהעדר מצבים פיזיולוגיים. עוד, התגובות טיפול בתרבויות דו מימדי רקמות הכולל לא בנאמנות לשקף התגובות טיפול בחולי מלנומה, עם רוב הניסויים הקליניים נכשל להראות את היעילות של שילובים טיפוליים המוצג להיות יעיל ב מבחנה. למרות שתלה שתלה של תאים מלנומה לתוך עכברים מספק את הפיסיולוגיים בהקשר vivo נעדר משני מימדי התרבות רקמה, התאים מלנומה המשמשים לחרט כבר עברו בחירת צוואר בקבוק עבור תאים שיכולים לצמוח תחת תנאים דו-ממדיים כאשר קו התא הוקם. השינויים הבלתי הפיכה המתרחשים כתוצאה של צוואר הבקבוק כוללים שינויים במאפייני הצמיחה והפלישה, כמו גם הפסד של אוכלוסיות משנה ספציפיות. לכן, מודלים כי טוב יותר ללכוד את המצב האנושי vivo אולי טוב יותר לנבא אסטרטגיות טיפוליות המגבירים ביעילות את ההישרדות הכוללת של חולים עם מלנומה גרורתית. המטופל נגזר מבע (pdx) טכניקה כרוכה השרשה ישירה של תאים סרטניים מהמטופל האנושי לנמען העכבר. באופן זה, תאים סרטניים גדלים בעקביות תחת מתחים פיזיולוגיים בvivo ולעולם לא לעבור בקבוק דו מימדי, אשר שומר על המאפיינים המולקולריים והביולוגיים נוכח כאשר הגידול היה החולה האנושי. הבולטים, PDX מודלים נגזר מאתרי איברים של גרורות (כלומר, המוח) להציג קיבולת גרורתית דומה, בעוד מודלים PDX נגזר מחולים תמימים תרפיה וחולים עם עמידות לטיפול (כלומר, BRAF/מעכב מעכבי טיפול) להציג רגישות דומה לטיפול.

Introduction

מודלים preclinical הם קריטיים עבור כל ההיבטים של מחקר הסרטן translational, כולל אפיון המחלה, גילוי של פגיעויות שימושי ייחודי לסרטן לעומת תאים נורמליים, ופיתוח של טיפולים יעיל לנצל פגיעויות אלה כדי להגביר את ההישרדות הכוללת של חולים. בשדה מלנומה, עשרות אלפי דגמים של קו התא כבר מנוצל בכבדות עבור הקרנת סמים, עם > 4000 תרמה על ידי הקבוצה שלנו לבד (סדרת WMXXX). אלה מודלים קו התא נגזר מחולי מלנומה עם צורות שונות של מלנומה עורית (כלומר, acral, uveal, ו התפשטות שטחית) ו גנוסוגים מגוונים (כלומר, Braf^V600-מוטציה ו נוירובלסטומה RAS ויראלי אונאוולוג הומולוג [ מיכל הנברס ^Q61R-מוטציה]), אשר תוחלת את הספקטרום של המחלה הנוכחית בקליניקה

Protocol

פרוטוקולי החיות הבאים מתבקשים לבצע את ההנחיות של ועדת האתיקה ההומאנית של מכון וויסטאר והנחיות לטיפול בבעלי חיים.

1. רקמת הגידול מלנומה אוסף

1. לאסוף רקמת הגידול (כינה מעבר 0) מחולים מלנומה על ידי אחד הניתוחים הבאים או שיטות ביופסיה.
   1. עבור רקמת כריתה כירורגית, לשמור על מינימום של 1 גרם של רקמה (לכרות גרורות ונגעים ראשוניים) באמצעי אחסון התחבורה (RPMI 1640 + 0.1% fungizone + 0.2% gentamicin) ב 4 ° c או על קרח.
   2. עבור רקמת ביופסיה כירורגית, לשמור פחות מ 1 גרם של רקמה (לעתים קרובות אגרוף ביופסיות של תת עורית [ספורטינג ראגה] גרורות הלימפה [in] גרורות) באמצעי אחסון התחבורה ב 4 ° צ' או על קרח.
   3. עבור רקמת ביופסיה לי....

Results

רקמת הגידול עבור מלנומה PDX מודלים יכול לבוא ממגוון של מקורות שונים, יכול גם להיות מעובד לפי הדינמיקה הצמיחה של מודלים בודדים את השימוש הרצוי של רקמת PDX. העדיפות בעת יצירת מודל PDX היא לקבל חומר מספיק לבנק לשימוש עתידי DNA לאפיון (איור 1).

פעם מספיק חומר הוא הפקידה, רקמת הגידול ניתן להרחיב באחת משלוש שיטות עיקריות כדי לגדול גידול מספיק כדי לבצע מחקר טיפול פורמלי (איור 2א). כל אחת מהשיטות המתוארות במסמך זה תאפשר הרחבת.......

Discussion

יש לנו במסמך זה תיאר הפקת מודלים PDX של מלנומה עם רקמת החולה נגזר גידולים ראשוניים וגרורתי, ביופסיות ליבה, ו FNAs. כאשר העפילו ישירות לתוך עכברי NSG, הגידולים מציגים את המאפיינים המיורפולוגיים הדומים, גנומית ותכונות ביולוגיים לאלה שנצפו בחולה. במקרה כאשר רק כמות קטנה של רקמות זמין לחוקרים, כפי שקורה לעתים קרובות עם FNAs, טכניקת PDX מאפשר הרחבה של רקמת הגידול עבור DNA, RNA, ואפיון חלבונים, כמו גם עבור ניסויים תרפיה כדי לאפשר תרופות פרה-קליניים פיתוח.

ביקורת על ההצלחה של העפיב PDX היא איכות החוק.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 מ 'Hepes	SIGMA-ALDRICH CORPORATION	CAT # H0887-100ML
100x PenStrep	Invitrogen	Cat # 15140163
1x HBSS-/- (w/o Ca++ או Mg++)	MED	Cat # MT21-023-CV
2.5% טריפסין	תאגיד סיגמא-אולדריץ'	חתול # T4549-100 מ"ל	10 מ"ל אליקוטים מאוחסנים ב – 20oC
BSA	SIGMA-ALDRICH CORPORATION	חתול # A9418-500G
כלורהקסידין	פישר סיינטיפיק	חתול # 50-118-0313
קולגנאז IV (2,000 u/mL)	וורת'ינגטון	Cat #4189	מפצה ב-HBSS-/- ממלאי אבקת קולגנאז IV (Worthington #4189, u/mg מצוין על הבקבוק ומשתנה עם כל אצווה); להקפיא 1
DMSO	SIGMA-ALDRICH CORPORATION	Cat # C6295-50ML
DNase	SIGMA-ALDRICH CORPORATION	Cat # D4527
EGTA (אתילן גליקול ביס(2-אתר אמינואתיל)-N,N,N' חומצה N'-טטראצטית)	Merck	Cat # 324626.25
FBS	INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES	Cat # 16000-044
Fungizone	INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES	Cat # 15290-018
Gentamicin	FISHER SCIENTIFIC	CAT # BW17518Z
Isoflurane	הנרי שיין בריאות בעלי חיים	חתול # 050031
מדיית L15 של לייבוביץ	Invitrogen	Cat # 21083027
Matrigel	Corning	Cat # 354230	מטריצה חוץ-תאית מלאכותית
מלוקסיקם	HENRY SCHEIN ANIMAL HEALTHRequisition # ::Henry Schein	Cat # 025115	1-5 מ"ג/ק"ג, כמשכך כאבים
NOD/SCID/IL2-קולטן null (NSG) עכברים מכון	וויסטאר, גידול PVA
.	SIGMA-ALDRICH CORPORATION	CAT # P8136-250G
RPMI 1640 בינוני (מוד) 1X עם L-גלוטמין	פישר מדעי	חתול# MT10041CM
חתול נוצות	אזמל	# 2976-22
Virkon	GALLARD-SCHLESINGER IND	Cat # 222-01-06
קליפים לפצעים	MikRon	Cat #427631