Summary
Tidspunktet for eksponering for ligander kan påvirke deres utviklingsmessige konsekvenser. Her viser vi hvordan du bilde utgivelsen av en Drosophila Bone Morfogenetiske PROTEIN (BMP) kalt DPP fra cellene i vingen platen.
Abstract
Den transformere vekstfaktor-beta (TGF-β) overfamilie er avgjørende for tidlig embryonale mønstre og utvikling av voksne strukturer i flercellede organismer. Den TGF-β overfamilie inkluderer TGF-β, bein Morfogenetiske protein (BMPs), Activins, vekst og differensiering faktorer, og Nodals. Det har lenge vært kjent at mengden av ligand eksponert for celler er viktig for dens virkninger. Det var antatt at langtrekkende konsentrasjon graderinger satt opp embryonale mønsteret. Men nylig har det blitt klart at tidspunktet for eksponering for disse ligander er også viktig for deres nedstrøms transcriptional konsekvenser. En TGF-β overfamilie ligand kan ikke ha en utviklingsmessige konsekvens før den slippes ut fra cellen der den ble produsert. Inntil nylig var det vanskelig å fastslå når disse ligander ble løslatt fra celler. Her viser vi hvordan du måler utgivelsen av en Drosophila BMP kalt Decapentaplegic (DPP) fra cellene i vingen primordium eller vinge plate. Denne metoden kan endres for andre systemer eller signalering ligander.
Introduction
Bone Morfogenetiske proteiner (BMPs) er avgjørende for tidlig embryogenesis og mønstre av voksen strukturer. BMPs produseres og utskilles for å påvirke transkripsjon av målet gener som trengs for vekst og celle differensiering i å svare på celler. Decapentaplegic (DPP) er en Drosophila HOMOLOGE av BMP4 som er viktig for utvikling av embryonale og voksne strukturer som fløy1,2,3,4. Flere grupper har fokusert på rollen som DPP i mønster voksen flyvinger fordi 1) vingene består av to gjennomsiktige prolifererende ark med en konsistent en mønster som lett kan vurderes; 2) vingen platene er også rimelig flat, kan kultivert utenfor Larven, og er enkle å avbilde og kvantifisere forskjeller i mønster; og 3) vingen mønster utviklingen er følsom for DPP slik at små forstyrrelser i veien vil påvirke vinge en mønster.
DPP produseres i celler som ligger i fremre/bakre grense av vinge platen5,6,7,8. DPP binder seg til et kompleks av type 1 og type 2 Serine/threonin kinase reseptorer9,10. Etter DPP binding, type 2 reseptor fosforylerer type 1 reseptor som deretter fosforylerer mødre mot DPP (Mad), en Smad 1/5/8 homologe. Fosforylert SMAD rekrutterer en ekstra co-Smad (Medea), som gjør det inn til kjernen der det regulerer mål gener, som fører til nedstrøms effekter som spredning eller differensiering4,11.
I den seneste tid har Bates Lab vist at den feilaktige utgivelsen av DPP innenfor vingen platen kan føre til en reduksjon i gal fosforylering, reduksjon i målet genuttrykk, og vinge mønster defekter12,13. Flere ion-kanaler påvirker utviklingen av Drosophila vingen og tilhørende strukturer14,15. Disse ion kanalene kunne likeledes være involvert inne DPP løslate. Ved fastsettelsen av mekanismen for morphogen utgivelse, er det viktig at det er en metode for å visualisere Release hendelser.
DRS. Aurelio Teleman og Stephen Cohen opprettet en DPP-GFP Fusion protein som er i stand til å redde tap av DPP, noe som betyr at det er biologisk aktive og er utgitt i en biologisk relevant måte16. Her beskriver vi hvordan vi visualiserer DPP løslate hendelser ved hjelp av denne DPP-GFP. Dette Fusion proteinet er spesielt nyttig fordi GFP er pH-følsom slik at når den er i Sure blemmer, er fluorescens slukket17. Derfor, når et protein merket med GFP frigjøres fra en vesicle til det mer nøytrale ekstracellulære miljøet, øker GFP fluorescens intensitet17. Vi tok fordel av pH-følsomheten til GFP å avgjøre om DPP-GFP bor i Sure blemmer. Vi avbildet vinge plater uttrykker DPP-GFP før og etter tilsetning av ammonium klorid, som nøytraliserer intracellulære rom blemmer18. Vi fant en betydelig økning i fluorescens av puncta etter tilsetning av ammonium klorid, noe som tyder på at intracellulære DPP-GFP er slukket før tilsetning av ammonium klorid18. Vi konkluderer med at intracellulære DPP-GFP bor i Sure membran-bundet rom, slik som blemmer, og er unquenched ved tilsetning av ammonium klorid for å nøytralisere pH i intracellulære rom18. Dette gjør live Imaging av DPP-GFP en nyttig teknikk for å visualisere dynamikken i DPP i Drosophila vingen platen som det er sluppet fra Sure rom i ekstracellulære miljøet.
Her beskriver vi metoden vi bruker for å visualisere Utgivelses hendelser i DPP ved hjelp av DPP-GFP. DPP-GFP kan uttrykkes i sitt opprinnelige mønster i Drosophila vinge plater ved hjelp av UAS-GAL4 system19. Dette er metoden som ble brukt til å fastslå at irk kanaler innvirkning DPP utgivelse18. Vi validerte metoden ved Live-Imaging z-stabler. Vi ser ikke DPP-GFP puncta beveger seg innenfor flyet av fokus i tidsserier hvis vi ervervet i ett plan av fokus. Vi ser heller ikke bevegelse av DPP-GFP puncta hvis vi avbildet i en z-stack. Vi konkluderer med at DPP-GFP puncta sett ved hjelp av denne metoden er Release hendelser snarere enn bevegelse av blemmer intracellulært. Denne metoden for Live-Imaging av DPP-GFP kan potensielt brukes til å teste andre antatte bestemmelsesord av DPP utgivelse for deres innvirkning på DPP dynamikk eller kan endres for å se på dynamikken i andre ligander
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. samle egg for å generere larver for disseksjon
- Cross 30-40 Virgin kvinnelig DPP-GAL4/TM6 TB Hu flyr til 10-15 mannlige SP/CyO-GFP; UAS-DPP-GFP/TM6 TB Hu.
Merk: Alle to genotyper inneholder DPP-GAL4 og UAS-DPP-GFP kanskje bli brukt idet lang idet det fordelinger ha larvestadiet merker tillater for utvalg av det passende avkom under larvestadiet scene. - For å samle egg, Vend de kryssende fluene inn i en fersk hetteglass med mat og la dem ligge i 3 – 4 timer før de fjernes fra hetteglasset. Å oppmuntre egglegging, en liten mengde gjær lim laget av kornete gjær blandet med en liten mengde vann kan legges til toppen av maten før fluene er innført i hetteglasset. Det samme settet med kryssende fluer kan oppbevares og brukes i opptil 7 dager med egg samlinger.
Merk: Enhver standard Drosophila cornmeal mat oppskrift bør være akseptabelt. Brukt her er maten oppskriften beskrevet av Hazegh og Reis20. - Hold egg samlingen hetteglass ved 25 ° c for ca 144 h til Larvene er på tredje skikkelsen (vandrende) scenen.
- For å velge riktig larver for disseksjon (de uttrykker både DPP-GAL4 og UAS-DPP-GFP) først velge larver som ikke er TB. Disse Larvene vil være normal lengde i stedet for kort og fett.
- Blant de ikke-TB larver vil det være larver uttrykker CyO-GFP og larver uttrykker DPP-GFP. For å velge DPP-GFP uttrykke larver, se dem under en fluorescens stereomikroskopet. Mens både DPP-GFP og CyO-GFP uttrykker larve vil ha noen GFP fluorescens, den DPP-GFP uttrykker larver kan skilles i at GFP er begrenset til vingen plater og fluorescens er mye mindre lys enn CyO-GFP uttrykke larver. Velg disse mindre lyse larver for disseksjon.
2. klargjøre løsning for larvestadiet Imaging og disseksjon
- For levende bilde av vinge plater, Forbered modifiserte HL3-medier21 (70 mm NaCl, 5 mm KCl, 1,5 mm CaCl2 Dyhydrate, 4 mm MgCl2, 10 mmNaHCO 3,5mm trehalose-DYHYDRATE, 115 mm sukrose, 5 mm HEPES). Dette mediet gjør at vingen platen skal holdes i live for Imaging21.
- Juster pH til 7,1 ved hjelp av HEPES og Filtrer med et 0,22 μm-filter. Bruk dette mediet både for vinge plate dissections og som monterings Media for levende bilder.
3. klargjøre lysbilder for vinge plate montering
- Plasser to stykker av fargeløs dobbeltsidig tape byplanen over et mikroskop lysbilde, etterlot et mellomrom på ca 5 mm mellom dem. Bitene av tape bør være lenge nok til at endene av tapen ligge flush med kantene av mikroskopet lysbildet.
- Bruk en flat kant (for eksempel håndtaket slutten av et par dissekere tang) til å trykke båndet fast til lysbildet slik at ingen medier kan sive under den.
- Plasser 25 μL av modifiserte HL3-medier mellom de to delene av tapen. Vingen platen vil bli montert i denne dråpe medier mellom biter av tape, slik at tapen hindrer dekkglass fra knuse platen (figur 1a).
4. dissekere og monterings vinge plater for bildebehandling
- Analysere larver i forberedt modifisert HL3 Media26.
- Riv Larvene forsiktig i halvparten ved hjelp av to par tang og kast den bakre halvdelen av Larven.
- Ta tak i midten av den fremre halvdelen av Larven med ett par tang og bruk et annet par med lukket tang for å dytte munn krokene tilbake i Larven til Larven er helt invertert.
- Vingen platene kan lettest funnet ved å se etter den skarpe bøyer i de to mørkere fargede primære grener av tracheae som kjører ned begge sider av larvene. Vinge platene ligger rett under disse svingene i tracheae i en invertert Larven.
- Fjern vinge platene forsiktig og Overfør dem til 25 μL av HL3-medier på det klargjorte mikroskop lysbildet. Det er viktig å sørge for at ingen deler av luftrøret er igjen festet til dissekert vingen platene som dette kan føre til at platene til å flyte, noe som gjør Imaging vanskelig.
- Plasser vinge platen slik at den peripodial siden av vinge posen vender oppover, bort fra objektglasset med platen som ligger flatt (se figur 1A, B).
- Dekk vingen platen og tape med en dekkglass og forsegle dekkglass ved hjelp av neglelakk. Når den polske er tørr, umiddelbart videre til tenkelig trinnene nedenfor.
5. tenkelig DPP løslate
- Image montert vinge platen ved hjelp av et konfokalmikroskopi laserskanning mikroskop med en 40x oljeobjektiv og 488 NM laser. Den DPP-GFP skal vises som en stripe av GFP fluorescens nedover midten av vingen plate med små puncta av DPP-GFP blir løslatt fra dette senteret stripe av celler.
- Samle bilder med en hastighet på 2 Hz i 2 minutter for å visualisere DPP utgivelse. For best resultat, sette laseren ved en innstilling bare sterk nok til å få et klart bilde av DPP-slippe celler for å unngå over-bleking under bilde samlingen. Bildene kan samles som en tidsserie som deretter kan eksporteres som AVI-filer (ingen komprimering, 3 rammer/s) for å få videofiler av DPP utgivelsen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 2 viser representative Live-Imaging resultatene av denne protokollen. Når protokollen er vellykket, kan DPP-GFP sees som en stripe nedover midten av vingen plate med kjerner synlig som ikke-fluorescerende sirkler i DPP-GFP regionen (figur 2). DPP-GFP løslate er synlig idet fluorescerende puncta det komme og forsvinne. Vi har observert DPP-GFP fluorescens vises og forsvinner i cellen organer og langt fra celle organer. DPP signalering er avhengig av utgangen-baserte filopodia-lignende strukturer kalt cytonemes som strekker seg langt fra cellen kroppen22,23. Derfor er det sannsynlig at DPP-GFP puncta som er vist langt fra DPP-produserende celle organer i disse presentert videoene er sannsynligvis i cytonemes eller på cytoneme "synapser"15. Disse puncta er mest åpenbare nær D/V grensen, som kan ses som gapet i DPP-GFP stripe.
Figur 3 viser et suboptimal resultat. I metoden som er beskrevet her, er vinge platene montert slik at peripodial IDen vender bort fra objektglasset slik at platen er avbildet fra peripodial IDen (som vist i figur 1B). Hvis vingen platen er avbildet fra motsatt side, det vil si peripodial side mot mikroskopet lysbildet, den DPP-GFP fluorescens vises ute av fokus og oppløsning vil være dårlig, noe som resulterer i suboptimal resultatet vist i Figur 3. Trinn 4,6 er derfor avgjørende for å sikre at vinge platen ligger flatt i riktig retning før bildebehandling for å unngå dette resultatet.
Figur 4 viser en tidsserie med bilder av en DPP > GFP (DPP-GAL4; UAS-GFP) tredje skikkelsen larvestadiet vinge plate. Når GFP ikke er smeltet sammen med DPP, observerer vi ikke utseendet til puncta utenfor celle organene. Denne kontrollen er viktig for den konklusjon at DPP-GFP oppfører seg annerledes enn GFP alene.
Figur 5 viser en tidsserie av bilder av en DPP-GAL4 driver alene tredje skikkelsen larvestadiet vinge plate. Bildene ble tatt med de samme innstillingene for mikroskop anskaffelse som alle de andre eksemplene. Disse bildene viser at fluorescerende puncta ikke vises når DPP-GFP ikke er uttrykt.
Figur 1: illustrasjon av vinge plate monteringsoppsett. Til bilde DPP-GFP utgivelse, den dissekert vingen platene skal monteres som vist. (A) to stykker dobbeltsidig tape er plassert byplanen over mikroskopet lysbildet med vingen platen montert i modifisert HL3 medium mellom båndet. (B) side visning av en riktig montert vinge plate. Platen er orientert slik at den peripodial siden av vinge posen vender oppover mot dekkglass. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: representativ video av DPP-GFP utgivelse i vingen platen. DPP-GFP ble uttrykt i vingen platen ved hjelp av UAS-GAL4 system. Vist her er en representativ video av Live Imaging resultater av DPP-GFP utgivelse. Cellekjerner kan ses som sirkulære hull i fluorescens. Utskilles DPP-GFP kan sees som lyse puncta. På grunn av kontrasten, disse lyse puncta er lettest å observere utenfor regionen som inkluderer DPP-produserende celle organer. Et slikt område indikeres av et rektangel som forsvinner etter de første rammene. Ventrale og bakre retninger på vinge platen indikeres av pilene. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Figur 3: suboptimal resultat av DPP-GFP utgivelsen Imaging. Eksempel på et suboptimal resultat som oppstår hvis vinge platen er orientert peripodial side med forsiden ned. På grunn av feil orientering av vingen plate posen DPP-GFP er ikke i fokus, klare kjerner kan ikke sees, og oppløsningen forblir dårlig uansett hvordan parametrene av mikroskopet er justert. Ventrale og bakre retninger på vinge platen indikeres av pilene. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Figur 4: representative video av GFP uttrykk i DPP-produserende celler av vingen platen. GFP uttrykk vises sterkt i celle organer og vises ikke som lyse puncta utgitt i periferien. Ventrale og bakre retninger på vinge platen indikeres av pilene. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Figur 5: representative video av DPP-Gal4 tredje skikkelsen vinge plater uten uttrykk for DPP-GFP eller GFP. Hvis Gal4 ikke kan kjøre uttrykk for GFP eller DPP-GFP på grunn av mangel på UAS-GFP eller UAS-DPP-GFP, ingen fluorescens er observert. Vennligst klikk her for å laste ned denne videoen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
BMPs som DPP gjøre sin betydelige innvirkning når de binder et kompleks av membran bundet reseptorer å forårsake en kaskade av intracellulære signalering i nabolandet eller tilsynelatende fjerne celler. Dr. Thomas Kornberg ' laboratorium har vist det celler det tilvirke det DPP signal kontakt celler det få signalet benytter utgangen basert spinkle filapodia-like strukturer alarmert cytonemes15,24,25. Disse dataene tyder på at utviklingsmessige celle celle kommunikasjon i denne sammenhengen kan være lik en neuronal synapse26. I Synaptic kommunikasjon, dynamikken i signalstoffet utgivelse er avgjørende for dens effekt på postsynaptic cellen. På samme måte er dynamikken i DPP utgivelse også viktig for dens nedstrøms konsekvenser12. Derfor er det viktig å kunne måle dynamikken i DPP utgivelse i ulike genetiske bakgrunner og forhold for å forstå hvilke faktorer som påvirker DPP utgivelse.
Her har vi presentert den optimaliserte metoden for å avbilde DPP utgivelse. Vi har også prøvd å bruke brønner til kultur vingen platen for Imaging. For dypt av en brønn kan føre til vanskeligheter med fokus på den DPP utgivelsen hendelsene. I tillegg kan vingen platen bevege seg under Live Imaging, noe som kompliserer analysen. Dobbeltsidig tape gir nok plass mellom dekselet slip og skyv for å hindre knusing av vingen platen, samtidig som riktig fokus. Vi har funnet at å snu mikroskopet på en halv time før bildebehandling slik at mikroskopet å varme opp hindrer drift av bildet over varigheten av videoen. Plassering av vingen platen med peripodial siden av vingen posen vendt oppover er svært viktig for Imaging DPP utgivelse. Vi fant at motsatt orientering ikke tillater oss å bilde DPP løslate hendelser.
Denne metoden kan brukes til å lete etter genetisk bestemmelsesord i DPP utgivelse. Vi har observert at hemming av en ion kanal virkninger DPP utgivelse12. Andre ion-kanaler kan også påvirke DPP utgivelse dynamikk. Vi kan også teste hvordan miljøforhold som teratogens påvirker utgivelsen av DPP. bestemmelsesord av DPP utgivelse kan avdekke den molekylære mekanismen som styrer ligand sekresjon. Release dynamikk kan være viktig for de nedstrøms konsekvensene av flere ulike utviklingsmessige signalering ligander. Selv om vi bare har beskrevet hvordan vi bilde DPP utgivelse, andre ligander som pinnsvin har blitt observert i cytoneme mediert signalering og kan være regulert av en lignende mekanisme.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Vi vil gjerne takke Dr. Sarala Pradhan for å ha jobbet med en tidligere versjon av denne protokollen. Vi takker NSF-IOS 1354282 for finansiering mens vi utviklet denne protokollen. Vi vil gjerne takke NIH-NIDCR RO1DE025311 for finansiering av laboratoriet vårt for øyeblikket.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Baker's yeast | Red Star | ||
| CaCl2 dyhydrate | Fisher Scientific | C79-500 | |
| Coverslips | VWR | 484-457 | |
| Double-sided tape | Scotch | ||
| Drosophila Agar Type II | Apex | 66-104 | |
| Drosophila melanogaster: Dpp-GAL4/TM6 Tb Hu | This stock will soon be made available at Bloomington Drosophila Stock Center | ||
| Drosophila melanogaster: Sp/CyO-GFP; UAS-Dpp-GFP/TM6 Tb Hu | This stock will soon be made available at Bloomington Drosophila Stock Center | ||
| Dumont Tweezers #5 | World Precision Instruments | 500233 | Forceps for dissecting |
| HEPES | Sigma Aldrich | H3375 | |
| KCl | Fisher Scientific | AC193780010 | |
| Light Corn Syrup | Karo | ||
| Malt Extract | Breiss | ||
| MgCl2 | Fisher Scientific | AC223210010 | |
| Microscope slides | Sigma Aldrich | S8400 | |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-500 | |
| NaHCO3 | RPI | S22060-1000.0 | |
| Nail polish | Electron Micsroscopy Sciences | 72180 | |
| Propionic Acid | VWR | U330-09 | |
| Soy Flour | ADM Specialty Ingredients | 062-100 | |
| Sucrose | Fisher Scientific | S5-3 | |
| Sucrose | Fisher | S512 | |
| Tegosept | Genesee Scientific | 20-259 | |
| Trehalose dyhydrate | Chem-Impex International, Inc. | 00766 | |
| Yellow Corn Meal | Quaker | ||
| Zeiss LSM 780 confocal microscope | Zeiss | Microscope for live imaging | |
| Zeiss SteREO Discovery.V8 microscope | Zeiss | Microscope for dissections |
References
- Ferguson, E. L., Anderson, K. V. Decapentaplegic acts as a morphogen to organize dorsal-ventral pattern in the Drosophila embryo. Cell. 71 (3), 451-461 (1992).
- Ferguson, E. L., Anderson, K. V. Localized enhancement and repression of the activity of the TGF-beta family member, decapentaplegic, is necessary for dorsal-ventral pattern formation in the Drosophila embryo. Development. 114 (3), 583-597 (1992).
- Wharton, K. A., Ray, R. P., Gelbart, W. M. An activity gradient of decapentaplegic is necessary for the specification of dorsal pattern elements in the Drosophila embryo. Development. 117 (2), 807-822 (1993).
- Raftery, L. A., Twombly, V., Wharton, K., Gelbart, W. M. Genetic screens to identify elements of the decapentaplegic signaling pathway in Drosophila. Genetics. 139 (1), 241-254 (1995).
- Raftery, L. A., Sanicola, M., Blackman, R. K., Gelbart, W. M. The relationship of decapentaplegic and engrailed expression in Drosophila imaginal disks: do these genes mark the anterior-posterior compartment boundary. Development. 113 (1), 27-33 (1991).
- Blackman, R. K., Sanicola, M., Raftery, L. A., Gillevet, T., Gelbart, W. M. An extensive 3' cis-regulatory region directs the imaginal disk expression of decapentaplegic, a member of the TGF-beta family in Drosophila. Development. 111 (3), 657-666 (1991).
- de Celis, J. F. Expression and function of decapentaplegic and thick veins during the differentiation of the veins in the Drosophila wing. Development. 124 (5), 1007-1018 (1997).
- De Celis, J. F. Pattern formation in the Drosophila wing: The development of the veins. Bioessays. 25 (5), 443-451 (2003).
- Letsou, A., et al. Drosophila Dpp signaling is mediated by the punt gene product: a dual ligand-binding type II receptor of the TGF beta receptor family. Cell. 80 (6), 899-908 (1995).
- Nellen, D., Affolter, M., Basler, K. Receptor serine/threonine kinases implicated in the control of Drosophila body pattern by decapentaplegic. Cell. 78 (2), 225-237 (1994).
- Raftery, L. A., Sutherland, D. J. TGF-beta family signal transduction in Drosophila development: from Mad to Smads. Developmental Biology. 210 (2), 251-268 (1999).
- Dahal, G. R., Pradhan, S. J., Bates, E. A. Inwardly rectifying potassium channels regulate Dpp release in the Drosophila wing disc. Development. 144 (15), 2771-2783 (2017).
- Dahal, G. R., et al. An inwardly rectifying K+ channel is required for patterning. Development. 139 (19), 3653-3664 (2012).
- George, L. F., et al. Ion Channel Contributions to Wing Development in Drosophila melanogaster. G3. 9 (4), Bethesda. 999-1008 (2019).
- Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. Glutamate signaling at cytoneme synapses. Science. 363 (6430), 948-955 (2019).
- Teleman, A. A., Cohen, S. M. Dpp gradient formation in the Drosophila wing imaginal disc. Cell. 103 (6), 971-980 (2000).
- Miesenbock, G., De Angelis, D. A., Rothman, J. E. Visualizing secretion and synaptic transmission with pH-sensitive green fluorescent proteins. Nature. 394 (6689), 192-195 (1998).
- Dahal, G. R., Pradhan, S. J., Bates, E. A. Inwardly rectifying potassium channels influence Drosophila wing morphogenesis by regulating Dpp release. Development. 144 (15), 2771-2783 (2017).
- Duffy, J. B. GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife. Genesis. 34 (1-2), 1-15 (2002).
- Hazegh, K. E., Reis, T. A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila. Journal of Visualized Experiments. (117), e54744 (2016).
- Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F. A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. Journal of Neurogenetics. 18 (2), 377-402 (2004).
- Hsiung, F., Ramirez-Weber, F. A., Iwaki, D. D., Kornberg, T. B. Dependence of Drosophila wing imaginal disc cytonemes on Decapentaplegic. Nature. 437 (7058), 560-563 (2005).
- Roy, S., Hsiung, F., Kornberg, T. B. Specificity of Drosophila cytonemes for distinct signaling pathways. Science. 332 (6027), 354-358 (2011).
- Kornberg, T. B., Roy, S. Cytonemes as specialized signaling filopodia. Development. 141 (4), 729-736 (2014).
- Roy, S., Huang, H., Liu, S., Kornberg, T. B. Cytoneme-mediated contact-dependent transport of the Drosophila decapentaplegic signaling protein. Science. 343 (6173), 1244624 (2014).
- Kornberg, T. B., Roy, S. Communicating by touch--neurons are not alone. Trends in Cell Biology. 24 (6), 370-376 (2014).
