Diese Studie stellt Methoden zur Untersuchung der pathomorphologischen und molekularen Mechanismen vor, die der Kichererbsen–Rhizoctonia-Bataticola-Interaktion zugrunde liegen. Die Blotting-Papier-Methode ist nützlich, um Kichererbsen-Genotyp-Antworten schnell zu studieren, während die kranke Topf-basierte Methode verwendet werden kann, um gleichzeitig Dürre und R. Bataticola-Infektion und Bildschirm für tolerante Genotypen aufzuerlegen.
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Methodenartikel
Dry Root Rot Disease Assays in Chickpea: eine detaillierte Methodik
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Die Trockenwurzelfäule (DRR)-Krankheit ist eine sich abzeichnende biotische Stressgefahr für den Kichererbsenanbau auf der ganzen Welt. Es wird durch einen bodengestützten Pilzerreger, Rhizoctonia bataticolaverursacht. In der Literatur sind umfassende und detaillierte Schritt-für-Schritt-Protokolle zu Krankheitsassays spärlich. Dieser Artikel enthält vollständige Details zu den Schritten bei der Einrichtung einer Blotting-Papiertechnik zum schnellen Screening von Genotypen auf DRR-Resistenz. Die Blotting-Papiertechnik ist einfach und kostengünstiger. Eine andere Methode, die auf dem Krankentopfansatz basiert, ist eine Mimik natürlicher Infektion und kann angewendet werden, um die interagierenden Komponenten – Pflanze, Krankheitserreger und Umwelt – zu untersuchen, die am Krankheitsdreieck beteiligt sind.
Darüber hinaus kommt DRR in der Natur vor allem in regengespeisten Kichererbsenanbaugebieten vor, wo die Bodenfeuchtigkeit mit fortschreitendem Pflanzenwachstum abgeht. Dürrestress ist dafür bekannt, Kichererbsenpflanzen für DIE DRR-Krankheit prädisponieren. Das pathomorphologische und molekulare Verständnis der Pflanzen-Pathogen-Interaktion unter Dürrestress kann den Weg für die Identifizierung von ELITE-DRR-resistenten Sorten aus dem Kichererbsen-Keimplasmapool ebnen. Dieser Artikel enthält eine schrittweise Methodik für die Vorbereitung eines Krankentopfs und den anschließenden Krankheitstest. Insgesamt werden die hier vorgestellten Informationen den Forschern helfen, R. bataticola pilzinoculum vorzubereiten, diesen Erreger zu erhalten, die Blotting-Papier-Technik einzurichten, Krankenkultur und Krankentopf vorzubereiten und Krankheitserreger-Infektionen in Kichererbsenpflanzen zu bewerten.
Einleitung
Trockenwurzelfäule (DRR) ist eine der wirtschaftlich signifikanten Krankheiten bei Kichererbsen1,2. Es ist eine wurzelspezifische Krankheit, die durch Rhizoctonia bataticola (Teleomorph, Macrophomina phaseolina)verursacht wird. Infizierte Pflanzen haben seitliche Wurzeln und besitzen spröde Taproots und gelbes Laub1,3. DRR unter Dürrestress wurde berichtet, eine aufkommende Bedrohung für kichererbsenanbau1,2,3. Darüber hinaus wird berichtet, ....
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Protokoll
1. Isolierung von R. bataticola und Lagerung
- Details zum Kichererbsengenotyp und DRR-Symptomen
- Verwenden Sie Kichererbsenpflanzen (Genotyp, JG 62), die in der Regel typische DRR-Symptome zeigen, wie trockene, spröde Primärwurzel ohne laterale Wurzeln und Mikrosklerotie unter der Rinde und innerhalb der Pith1,3.
- Abholung und Waschen
- Entwurzelung stagnieren Pflanzen, die Symptome wie trockene strohfarbene Blattblätter und spröde Primärwurzel mit Mikrosklerotie unter der Epidermisschicht zeigen. Während der Entwurzelung wird ein großteil der Wurzeln im Bod....
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Ergebnisse
Diese Studie zielte darauf ab, Techniken wie das Bloten von Papier und Kranke Topftechniken zu demonstrieren, um das pathomorphologische und molekulare Verständnis der Pflanzen-Pathogen-Interaktion unter Dürrestress zu erleichtern. Um dies zu erreichen, wurden Pflanzen mit DRR-Symptomen1,3,4 aus einem Kichererbsenfeld gesammelt, und der Pilz wurde mit der Hyphal-Spitzenmethode8isoliert. R. bataticola<.......
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Diskussion
Die Blotting-Papier-Technik bietet einen einfachen Ansatz, um Kichererbsen-Genotypen unter Laborbedingungen zu untersuchen. Die Dip-Impfung ermöglicht die untersuchung der Wechselwirkung auf zeitlicher Basis mit einfacher Kontrolle der Inokulumbelastung (Zusatzabbildung 1) und erleichtert das In-vitro-Screening. Darüber hinaus können auch junge Sämlinge verwendet werden. Fünf Tage alte Pilzkultur (Abbildung 1B) kann genug Inokulum liefern, um die Pflanzen zu infizieren. Flüs.......
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Offenlegungen
Wir haben nichts zu verraten
Danksagungen
Projekte im M.S.K-Labor werden vom National Institute of Plant Genome Research unterstützt. VI erkennt DBT- JRF an (DBT/2015/NIPGR/430). Wir danken Den Auszubildenden, Miss. Rishika, Mr. Jayachendrayan und Miss. Durgadevi für die technische Hilfe bei Videoaufnahmen und Herrn Sandeep Dixit, Miss. Anjali und Dr. Avanish Rai für die kritische Bewertung von Rohdaten und den Manuskriptakten. Wir danken Herrn Rahim H Tarafdar und Herrn Sunder Solanki für ihre Hilfe im Labor. Wir würdigen das DBT-eLibrary Consortium (DeLCON) und die NIPGR Library für den Zugang zu e-Ressourcen und der NIPGR Plant Growth Facility für die Unterstützung/Raum für das Pflanzenwachstum.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Pilz- Rhizoctonia bataticola | Pathogen-Inokulum | Indian Type Culture Collection No. 8365 | GenBank: MH509971.1, ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article& id=1251&Itemid=1370) |
| Soilrite mix | Bodenmedium im Labor | Keltech Energies Limited, Bangalore, Indien | http://www.keltechenergies.com/ |
| Filterpapier | Löschpapier Löschpapier zur Unterstützung des Pflanzenwachstums | Himedia | http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 |
| Topf | Wachsende Pflanzen Töpfe mit einer Größe von 10 und 30 cm Routinemäßig | verwendete Anzuchttöpfe, z. B. https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html | |
| Kartoffel-Dextrose-Agar/Brühe | Den Pilz Züchten und pflegen | Cat# 213400, DifcoTM, MD, USA | https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946 |
| Inkubator | Kultivieren Sie den Pilz | LOM-150-2, S/N AI13082601-38, MRC, Inkubator und Schüttler | http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131 |
| Wachstumskammer | Anbau von Pflanzen unter kontrollierten Bedingungen | Modell Nr. A1000, Conviron, Kanada | https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber |
| Laminarer Luftstrom | Durchführung von aseptischen Übungen | Telstar, Bio II Advance, Klasse II Schrank, EN-12469-2000 | https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/, http://www.atlantisindia.co.in/laminar-air-flow.html |
| Mesh | Filterung des Pilzmyzels | Nylon-Moskitonetz | Mesh mit 0,6-1 mm Durchmesser Porengröße |
| Autoklav | Autoklaviermedien und Kichererbsensamen | Autoklav | http://www.scientificsystems.in/autoclave |
| Mikroskope | der Infektion mit Pilzmyzel | SMZ25 / SMZ18, Forschungsstereomikroskope, Leica EZ4 pädagogisches Stereomikroskop | https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18 https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/ https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i |
| Wägewaage | Wiegen von Pilzen und Chemikalien | Sartorius Elektronische Waage, BSA 4202S-CW | https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances |
| WGA-FITC | Pilzfärbung | Sigma | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en®ion=IN |
| Anilinblau | Pilzfärbung | Himedia | http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901 |
Referenzen
- Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand. Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).
- Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from:
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Nachdrucke und Genehmigungen
