מחקר זה מציג מתודולוגיות כדי ללמוד את המנגנונים הפתומורפולוגיים והמולקולריים הבסיסיים חומוס –אינטראקציה בטיקולה Rhizoctonia. שיטת נייר הכתמים שימושית כדי ללמוד במהירות תגובות גנוטיפ חומוס, בעוד השיטה מבוססת סיר חולה יכול לשמש בו זמנית לכפות בצורת וזיהום R. bataticola ומסנן עבור גנוטיפים סובלניים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שורש יבש רוט רוט מחלה אומר חומוס: מתודולוגיה מפורטת
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלת ריקבון שורש יבש (DRR) היא איום לחץ ביוטי המתעוררים על גידול חומוס ברחבי העולם. היא נגרמת על ידי פתוגן פטרייתי הנישא בקרקע, ריזוקוניה באטיקולה. בספרות, פרוטוקולים מקיפים ומפורטים שלב אחר שלב על מחלות הם דלים. מאמר זה מספק פרטים מלאים על השלבים המעורבים בהגדרת טכניקת נייר משתקת להקרנה מהירה של גנוטיפים להתנגדות ל-DRR. טכניקת הנייר הנוהקת קלה ופחות יקרה. שיטה נוספת, המבוססת על גישת החשיש החולה, היא חיקוי של זיהום טבעי וניתן ליישם אותה כדי ללמוד את הרכיבים המקיימים אינטראקציה – צמח, פתוגן וסביבה – המעורבים במשולש המחלה.
יתר על כן, בטבע, DRR מתרחשת בעיקר באזורי גידול חומוס ים, שם לחות הקרקע נסוגה ככל שצמיחת היבול מתקדמת. לחץ בצורת ידוע נטייה צמחי חומוס למחלת DRR. הבנה פתומורפולוגית ומולקולרית של אינטראקציה בין צמחים לפתוגן תחת לחץ בצורת יכולה לסלול את הדרך לזיהוי זנים עמידים בפני DRR מבריכת החיידקים של גרגירי החומוס. מאמר זה מספק מתודולוגיה צעד קדימה להכנת סיר חולה ואסה מחלה לאחר מכן. בסך הכל, המידע המוצג בזאת יסייע לחוקרים להכין את האנוקולום פטרייתי R. bataticola, לשמור על פתוגן זה, להגדיר את טכניקת נייר הכתמים, להכין תרבות חולה וסיר חולה, ולהעריך זיהום פתוגן בצמחי חומוס.
מבוא
ריקבון שורש יבש (DRR) היא אחת המחלות המשמעותיות מבחינה כלכלית חומוס1,2. זוהי מחלה ספציפית שורש הנגרמת על ידי רזוקטוניה bataticola (טלומורפ, Phaseomina). צמחים נגועים חסר שורשים לחוץ ויש להם טפירים שבירים ועלווה צהובה1,3. DRR תחת לחץ בצורת דווח להיות איום המתעוררים על גידולחומוס 1,2,3. יתר על כן, שכיחות DRR מדווח להיות מחמיר תחת לחץ בצורת בתנאי שדה1,2,3
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. בידוד ר. באטיקולה ואחסון
- פרטים על הגנוטיפ של גרגירי החומוס ותסמיני DRR
- השתמש בצמחי חומוס (גנוטיפ, JG 62) כי בדרך כלל להראות סימפטומים DRR טיפוסי, כגון יבש, שורש ראשי שביר ללא שורשים לחוץ microsclerotia מתחת לקליפה ובתוך pith1,3.
- איסוף ושטיפה
- צמחי עקורים המציגים תסמינים כגון בוליאר בצבע קש יבש ושורש ראשי שביר עם מיקרוקלרוטיה מתחת לשכבת האפידרמיס. בעוד העקרוץ, חלק גדול של השורשים יישאר בתוך האדמה כמו השורשים הנגועים הם שבירים. הסר את פסולת האדמה גסה המחוברת לשורש. חותכים את השורשים בנפרד ואספים אותם במעטפות נייר (27.5 ס"מ על 12 ס"מ) עם התווית המתאימה ו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
מחקר זה נועד להפגין טכניקות כגון נייר כתמים וטכניקות סיר חולה כדי להקל על הבנה פתומורפולוגית ומולקולרית של אינטראקציה צמח-פתוגן תחת לחץ בצורת. כדי להשיג זאת, צמחים המציגים תסמיני DRR1,3,4 נאספומתוך שדה חומוס, והפטרייה הייתה מבודדת באמצעות שיטת קצה hyphal8. תרבות פטרייתית באטיקולה מופיעה אפור כהה על צלחת מחשב כף יד ושיפוע על ארבעה ימים לאחר הדגירה (איור 1A &am.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
טכניקת הנייר הנוהקת מספקת גישה פשוטה לגנוטיפים של חומוס על המסך בתנאי מעבדה. מחיסון מטבל מאפשר חקירה של אינטראקציה על בסיס זמני עם שליטה קלה על עומס inoculum (דמות משלימה 1) ומאפשר בהקרנה חוץית. יתר על כן, אפילו שתילים צעירים יכולים לשמש. תרבות פטרייתית בת חמישה ימים(איור 1B)יכולה להניב מספיק לאנוקולום כדי להדביק את הצמחים. אינוקולום נוזלי מכיל הן מיקליה והן מיקרוסקלרוטציה (איור 1D & E). תסמיני ריקבוןשורש (א.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין לנו מה לחשוף.
תודות
פרויקטים במעבדת M.S.K נתמכים על ידי המכון הלאומי למימון הליבה של מחקר הגנום של הצמח. VI מאשרת DBT-JRF (DBT/2015/NIPGR/430). אנו מודים לסטודנטים מתאמנים, מיס רישיקה, מר ג'ייאכנדריאן ומיס דורגדבי על עזרה טכנית במהלך צילומי וידאו ומר סנדיפ דיקסיט, מיס אנג'אלי וד"ר אווניש ראי על הערכה ביקורתית של נתונים גולמיים וקבצי כתב היד. אנו מודים למר רחים ה. טראפדר ולמר סונדר סולנקי על עזרתם במעבדה. אנו מכירים DBT-eLibrary קונסורציום (DeLCON) ו ספריית NIPGR למתן גישה למשאבים אלקטרוניים ומתקן צמיחה צמח NIPGR עבור תמיכה צמח צמיחה / שטח.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| פטריות- Rhizoctonia bataticola | Pathogen inoculum | Indian Type Culture Collection No. 8365 | GenBank: MH509971.1, ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article& id=1251&Itemid=1370) |
| Soilrite mix | מדיום אדמה במעבדה | Keltech Energies Limited, בנגלור, הודו | http://www.keltechenergies.com/ |
| נייר סינון | נייר סופג לתמיכה בצמיחת הצמח | Himedia | |
| http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 Pot | גידול צמחים | עציצים בגודל 10 ו-30 ס"מ | עציצי משתלה בשימוש שגרתי, למשל, https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html |
| תפוחי אדמה דקסטרוז אגר/מרק | תרבות ושמירה על הפטרייה | Cat# 213400, DifcoTM, MD, USA | https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946 |
| תרבית חממה | הפטרייה | LOM-150-2, S/N AI13082601-38, MRC, אינקובטור ושייקר | http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131 |
| תא גידול גידול | צמחים במצב מבוקר | דגם מס' A1000, Conviron, קנדה | https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber |
| זרימת אוויר למינרית | ביצוע תרגילים אספטיים | Telstar, Bio II advance, ארון Class II, EN-12469-2000 | https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/, |
| רשת | סינון התפטיר הפטרייתי | ניילון רשת כילה | עם גודל נקבוביות בקוטר 0.6-1 מ"מ |
| אמצעי | חיטוי וזרעי חומוס | מיקרוסקופים http://www.scientificsystems.in/autoclave חיטוי | |
| הדמיית הזיהום בתפטיר פטרייתי | SMZ25 / SMZ18, סטריאומיקרוסקופים מחקריים, סטריאומיקרוסקופ | חינוכי Leica EZ4https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18 https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/ https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i | |
| איזון שקילה | פטריות וכימיקלים | Sartorius איזון שקילה אלקטרוני, BSA 4202S-CW | https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances |
| WGA-FITC | מכתים פטריות | סיגמא | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en®ion=IN |
| אנילין כחול | מכתים פטריות | Himedia | http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901 |
מקורות
- Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand. Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).
- Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from:
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
