Burada, farelerdeki içsel kardiyak fonksiyonu ve β-adrenerjik rezervi belirlemek için artan intravenöz aşılanmış izoproterenol dozları altında bir kardiyak basınç hacmi döngü analizi açıklıyoruz. Basınç hacmi döngüsü ölçümleri için, pozitif uç-ekspiratör basınçlı havalandırmayı dahil ettiğimiz modifiye edilmiş bir açık göğüs yaklaşımı kullanıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Basınç-Hacim Döngüsü Analizi ile Belirlenen β-Adrenerjik Stimülasyona Kardiyak Yanıt
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Kardiyak fonksiyonun belirlenmesi, belirli tedavilerin kalp üzerindeki etkilerini karakterize etmek için kardiyovasküler hastalıkların hayvan modellerinde sağlam bir uç nokta analizidir. Genetik manipülasyonların fizibilitesi nedeniyle fare, kardiyak fonksiyonu incelemek ve yeni potansiyel terapötik hedefler aramak için en yaygın memeli hayvan modeli haline gelmiştir. Burada, bazal koşullar sırasında basınç hacmi döngüsü ölçümleri ve analizleri kullanılarak ve artan izoproterenol konsantrasyonlarının intravenöz infüzyonu ile β-adrenerjik stimülasyon altında kardiyak fonksiyon in vivo'yu belirlemek için bir protokol açıklıyoruz. Açık göğüs ölçümleri sırasında olumsuz etkileri iyileştirmek için pozitif uç-ekspiratuar basıncı dikkate alarak havalandırma desteği ve işlem sırasında ağrının uyandırdığı kontrol edilemeyen miyokard stresini önlemek için güçlü analjezi (Buprenorfin) dahil olmak üzere rafine bir protokol sunuyoruz. Prosedürün ayrıntılı açıklaması ve olası tuzaklar hakkındaki tartışma, son derece standartlaştırılmış ve tekrarlanabilir basınç hacmi döngü analizi sağlar ve olası metodolojik önyargıyı önleyerek hayvanların deneysel kohorttan dışlanmasını azaltır.
Giriş
Kardiyovasküler hastalıklar tipik olarak kardiyak fonksiyonu etkiler. Bu konu, hayvan hastalıkları modellerinde in vivo detaylı kardiyak fonksiyonun değerlendirilmesinde önemine işaret eder. Hayvan deneyleri, üç Rs (3R) kılavuz prensibinin (Küçült/İyileştir/Değiştir) bir çerçevesi ile çevrilidir. Mevcut gelişim düzeyinde sistemik yanıtları (yani kardiyovasküler hastalıkları) içeren karmaşık patolojilerin anlaşılması durumunda, ana seçenek mevcut yöntemleri iyileştirmektir. Arıtma ayrıca, daha az değişkenlik nedeniyle gerekli hayvan sayılarının azaltılmasına yol açacak ve bu da analiz ve sonuçların gücünü artıracaktır. Ek olarak, kardiyak kontrtinaklık ölçümlerinin nör....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan deneyleri Karlsruhe Bölge Konseyi ve Heidelberg Üniversitesi yönetmeliklerine göre onaylanmış ve gerçeklendirilmiştir (AZ 35-9185.82/A-2/15, AZ 35-9185.82/A-18/15, AZ 35-9185.81/G131/15, AZ 35-9185.81/G121/17) Avrupa Parlamentosu'nun 2010/63/AB sayılı Bilimsel Amaçlarla Kullanılan Hayvanların KorunmasıNa İlişkin Direktifi'ne uygundur. Bu protokolde gösterilen veriler, vahşi tip C57Bl6/N erkek farelerden (17 ± 1,4 haftalık) türetilmiştir. Fareler, Heidelberg Tıp Fakültesi'nin hayvan tesisinde (IBF) belirtilen patojensiz koşullar altında muhafaza edildi. Fareler, 12 saatlik açık-karanlık bir döngüde, % 56-60 arasında bağıl nem, saatte 15 kat hava değişimi ve ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Basınç hacim döngüsü (PVL) ölçümü, ilaçların kardiyak farmakodinamiklerini analiz etmek ve genetiği değiştirilmiş fare modellerinin kardiyak fenotipini normal ve patolojik koşullar altında araştırmak için güçlü bir araçtır. Protokol, yetişkin fare modelinde kardiyak β-adrenerjik rezervin değerlendirilmesine izin verir. Burada, izoproterenol konsantrasyonlarını femoral ven kateteri ile aşılayarak β-adrenerjik stimülasyona kardiyak yanıta odaklanan buprenorfin (analjezik) ve panküronyum (kas gevşetici) ile birlikte izoflur.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada, artan β-adrenerjik stimülasyon altında farelerde in vivo kardiyak fonksiyonu analiz etmek için bir protokol sunuyoruz. Prosedür, genetiği değiştirilmiş farelerde veya müdahaleler üzerine hem kardiyak fonksiyonun temel parametrelerini hem de adrenerjik rezervi (örneğin, inotropi ve kronotropi) ele almak için kullanılabilir. Basınç hacmi döngüsü (PVL) ölçümlerinin diğer kardiyak fonksiyon belirleme araçlarına göre en belirgin avantajı içsel, yük bağımsız kardiyak fonksiyonun analizidir. Diğer tüm yöntemler (örneğin.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan edilmesine gerek yok.
Teşekkürler
Manuela Ritzal, Hans-Peter Gensheimer, Christin Richter ve Interfakultäre Biomedizinische Forschungseinrichtung (IBF) ekibine uzman teknik yardım için minnettarız.
Bu çalışma DZHK (Alman Kardiyovasküler Araştırmalar Merkezi), BMBF (Alman Eğitim ve Araştırma Bakanlığı), bir Baden-Württemberg federal eyaleti Innovation fonds ve Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Alman Araştırma Vakfı) Project-ID 239283807 - TRR 152, FOR 2289 ve İşbirlikçi Araştırma Merkezi (SFB) 1118 tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1.4F SPR-839 kateter | Millar Instruments, ABD | 840-8111 | |
| 1 ml şırınga | Beckton Dickinson, ABD | REF303172 | |
| Biyo Amplifikatör | Cihazları, ABD | FE231 | |
| Köprü-Amplifikatör | Cihazları, ABD | FE221 | |
| Sığır Serumu Albümini | Roth, Almanya | 8076.2 | |
| Buprenorfin hidroklorür | Bayer, Almanya | 4007221026402 | |
| Kalibrasyon küveti | Millar, ABD | 910-1049 | |
| Diferansiyel basınç dönüştürücü MPX | Hugo Sachs Elektronik- Harvard Aparatı, Almanya | Tip 39912 | |
| Dumont Forseps #5/45 | Güzel Bilim araçları A.Ş. | 11251-35 | |
| Dumont Forseps #7B | Güzel Bilim araçları A.Ş. | 11270-20 | |
| Graefe Forseps | Güzel Bilim araçları A.Ş. | 11051-10 | |
| GraphPad Prizma | GraphPad Yazılımı | Ver. 8.3.0 | |
| EcoLab-PE-Micotube | Smiths, ABD | 004/310/168-1 | |
| Etomidat Lipuro | Braun, Almanya | 2064006 | |
| Excel | Microsoft | ||
| Heparin | Ratiopharm, Almanya | R26881 | |
| Sıcak plaka ve kontrol ünitesi | Labotec, Almanya | Sıcak Plaka 062 | |
| Isofluran | Baxter, Almanya | HDG9623 | |
| Isofluran Buharlaştırıcı | Abbot | Buharı 19.3 | |
| İzoprenalinhidroklorür | Sigma-Aldrich, ABD | I5627 | |
| İnce Delikli Polietilen boru 0,61 mm OD, 0,28 mm İç | Smiths Medical International Ltd, Birleşik Krallık | Referans 800/100/100 | |
| MiniVent fareler için ventilatör | Hugo Sachs Elektronik- Harvard Apparatus, Almanya | Tip 845 | |
| MPVS Ultra PVL Sistemi | Millar Instruments, ABD | ||
| NaCl | AppliChem, Almanya | A3597 | |
| NaCl %0,9 izotonik | Braun, Almanya | 2350748 | |
| Pankuronyum-bromür | Sigma-Aldrich, ABD | BCBQ8230V | |
| Perfusor 11 Plus | Harvard Apparatus | Nr. 70-2209 | |
| Powerlab 4/35 kontrol ünitesi | ADInstruments, ABD | PL3504 | |
| Şarj edilebilir koter seti | Faromed, Almanya | 09-605 | |
| Makas | Güzel Bilim araçları A.Ş. | 140094-11 | |
| Yazılım Laboratuvarı 7 Pro | Cihazları, ABD | LabChart 7.3 Pro | |
| Standart fare maması | LASvendi GmbH, Almanya | Rod18 | |
| Stereo mikroskop | Zeiss, Almanya | Stemi 508 | |
| Cerrahi sütür 8/0 | Suprama, Almanya | Ch.B.03120X | |
| kanülü Venflon Pro Emniyet 20 gauge | Beckton Dickinson, ABD | 393224 | |
| Gemi Kanülasyon Forseps | Güzel Bilim araçları A.Ş. | 00574-11 | |
| Su banyosu | Thermo Fisher Scientific, ABD | ||
| Şırınga filtresi (Filtropur S 0.45) | Sarstedt, Almanya | Referans 83.1826 |
Kaynaklar
- Bacmeister, L., et al. Inflammation and fibrosis in murine models of heart failure. Basic Research in Cardiology. 114 (3), 19(2019).
- Hartupee, J., Mann, D. L. Neurohormonal activation in heart failure with reduced ejection fraction. Nature ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
