생쥐의 외상성 말초 신경 손상

요약

본 프로토콜은 정밀하게 보정된 압착, 엄격하게 정렬되거나 잘못 정렬된 열상, 생쥐의 좌골 신경의 이식 및 이식되지 않은 틈을 포함한 외상성 말초 신경 손상(TPNI)을 설명합니다. 신경 외상을 측정하기 위해 맞춤형으로 설계된 센서가 개발되었으며, 재현 가능한 TPNI 후 결과를 보장하기 위해 일반적으로 사용 가능한 도구로 유도됩니다.

초록

외상성 말초 신경 손상(TPNI)은 정형외과적 외상 후 이환율의 흔한 원인입니다. 신경 및 탈돌기 근육을 손상시키는 재현 가능하고 정확한 방법은 오랫동안 근골격계 연구의 목표였습니다. 외상으로 손상된 많은 팔다리는 장기적인 환자 결과를 정의하는 신경 외상을 가지고 있습니다. 수년에 걸쳐 압착, 열상 및 신경 간극 이식을 포함하여 미세 수술 신경 손상을 생성하는 정확한 방법이 개발되어 재현 가능한 결과 평가가 가능해졌습니다. 또한, 인간 환자를 평가하는 데 사용되는 결과와 임상적으로 관련된 상관 관계를 제공하는 보정된 압착 부상에 대한 새로운 방법이 개발되었습니다. 신경 손상의 낮은 변동성을 보장하기 위한 최소 조작의 원칙은 이러한 모델에 더 많은 관련 조직 손상을 추가할 수 있도록 합니다. 여기에는 직접적인 근육 찌그러짐 및 사지 부상의 다른 구성 요소가 포함됩니다. 마지막으로, 위축 평가와 행동 결과의 정확한 분석은 이러한 방법을 인간의 외상성 사지 손상의 모든 요소를 현실적으로 통합하는 근골격계 외상 연구를 위한 완벽한 패키지로 만듭니다.

서론

외상성 말초신경 손상(TPNI)은 정형외과적 외상 후 이환율의 흔한 원인이다 ^1,2,3. 매년 약 3%의 외상 환자가 신경 손상을 입고^1,4 있으며, 이 중 3,50,000건^{5이 발생하여} 50,000건의 외과적 치료가 이루어졌다⁶. TPNI는 다양한 중증도로 발생하며, 기능 회복은 이러한 부상의 유형과 중증도에 직접적으로 의존합니다 ^7,8,9. 덜 심각한 외상(예: 가벼운 압착, 불완전한 열상 등)은 수초와 축삭을 먼저 손상시키는 반면, 더 심한 힘(예: 심한 압착, 완전한 열상 등)은 결합 신경 조직을 파괴합니다. 예를 들어, 수초(myelin)와 축삭(^axons) 외에....

프로토콜

실험 설계 및 동물 프로토콜은 펜실베이니아 주립 대학교 의과 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받았습니다. 성인 C57BL/6J 수컷 마우스, 10주 령, 체중 20-25g을 연구에 사용했습니다. 동물들은 멸균 동물 관리 조건으로 동물 시설에 수용되었으며, 연구를 수행하기 최소 5일 전에 적응 교육을 받았습니다.

1. 동물 준비

1. 케타민(100mg/kg)과 자일라진(10mg/kg)의 칵테일을 사용하여 26G 바늘을 사용하여 복강 내 주사를 통해 동물을 깊숙이 마취합니다.
2. 트리머를 사용하여 동물의 오른쪽 뒷다리와 허리를 면도한 다음 멸균 솜 팁 어플리케이터를 사용하여 10% 포비돈 요오드 용액을 준비한 알코올로 청소합니다( 재료 표 참조).
3. 눈이 건조해지지 않도록 멸균 솜 팁 애플리케이터를 사용하여 눈에 안과 윤활제 연고를 바르십시오.
4. 준비 후 동물을 항온용 발열 패드( 재료 표 참조)에 올려 체온을 37°C로 유지합니다.
5. 생쥐의 뒷다리를 발열 패드에 테이프로 붙....

결과

맞춤형 디지털 압력 센서 장치(그림 1D)는 힘이 가해질 때 FSR의 저항 변화를 감지하여 작동합니다. 이 장치는 <5μs의 응답 시간, 20Hz의 샘플링 속도 및 2.5-25lbs³¹의 압력 범위로 가해지는 가장 적당한 압력량을 감지하고 기록합니다. 압력 센서 장치(그림 1D)에 의해 감지되고 표시되는 겸자(그림 1C) 유도 SNCI(그림 1A, B) 압력의 차이는 그림 2A, B에 나와 있습니다. STG, FTG, 갭 및 이식 및 STS의 갭리스 미세수술 신경 복구 방법은 각각 그림 3A-D

토론

TPNI 연구의 역사는 수십 년에 걸쳐^11,12 이어집니다. 개와 더 큰 종을 대상으로 한 초기 실험은 TPNI 결과 연구에서 동물 모델의 중요성을 확립했습니다 36,37,38. 시간이 지남에 따라 이러한 모델은 확립되고 일반적으로 사용되는 검증된 결과 측정 ^39,40,41을 통해 더 작은 설치류로 이동했습니다. 그러나 이러한 모델은 결과 측면에서 표준화가 거의 이루어지지 않았으며, 많은 저자들이 동일한 부상에 대해 다양한 효과를 발표.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
알코올 준비	COVIDIEN	5110
부프레노르핀	ZooPharm	BSRLAB0.5-211706
C57BL/6J	Jackson Laboratories, Bar Harbor	N/A
면 팁 애플리케이터	Puritan	25-8062WC
해부 가위	ASSI	ASSI.
피브린 접착제-TISSEEL	Baxter	1501263
Force Sensitive Resistor (FSR)	N/A	FlexiForce A301
집게	FST-Dumont	5SF Inox, 11252-00
GraphPad Prism	GraphPad Software Inc.	버전 8.4.3.
동종 발열 패드	Kent Scientific	RJ1675
케타민/케타베드	VEDCO	VED1220
미세수술 겸자	Miltex 프리미엄 기기	BL1901
안과 윤활제 연고	Akorn Animal Health	NDC 59399-162-35
페트리 접시	VWR	25384-092
인산염 완충 식염수	Gibco	14190-144
포비돈 요오드	Solimo	L0017765SA
정밀 핀치 압력 센서 장치	맞춤형	N/A
가위	Miltex Premium	21-536
스테레오 줌 양안 현미경	세계 정밀 기기	모델 PZMIII
멸균 장갑	Cardinal Health	9L19E511
수술용 스테이플	3M-Precise	DS-25
수술 테이프	3M-Microphore	1530-0
봉합	Ethicon	BV130-5
주사기	BD 주사기	309597
	트리머 Philips Electronics	MG3750
Xylazine/Anased	에이콘 애니멀 헬스(Akorn Animal Health, Inc.)

SDC18R8사 VAM4811