Investigando os efeitos aliviadores da administração de Bacillus cereus na colite por meio da modulação da microbiota intestinal

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer o modelo de camundongo com colite induzida por sódio com sulfato de dextrano livre de germes induzido por antibióticos para investigar o papel da microbiota intestinal na regulação dos efeitos positivos do Bacillus cereus na colite.

Resumo

Acredita-se que a disbiose da microbiota intestinal exerça um papel na progressão da colite. No entanto, os padrões precisos para a administração de probióticos no alívio da colite permanecem indefinidos. A maioria dos métodos de análise depende da diversidade e abundância limitadas de microrganismos intestinais. Portanto, estudos observacionais não podem estabelecer causalidade. Neste estudo, aplicamos camundongos pseudo-livres de germes induzidos por antibióticos para investigar o papel da microbiota intestinal na regulação dos efeitos probióticos de Bacillus cereus (B. cereus) na colite induzida por sulfato de dextrano sódico (DSS) em camundongos. Esse processo permite avaliar o efeito regulador bidirecional da suplementação de B. cereus na saúde e fornece resultados estáveis e reprodutíveis. Aqui, são fornecidos os protocolos detalhados para cultivo de B. cereus , operação de gavagem, coleta de fezes e tratamento de eliminação de antibióticos em camundongos com colite. Os métodos de otimização também são aplicáveis para outros distúrbios inflamatórios crônicos associados. Os resultados mostraram que a administração de B. cereus diminuiu a perda de peso corporal, o encurtamento do comprimento do cólon, o índice de atividade da doença e os escores histopatológicos. No entanto, o tratamento com antibióticos suprimiu o efeito positivo do B. cereus na colite. Esses resultados indicam que a microbiota intestinal é necessária para aliviar os efeitos do B. cereus na colite. Portanto, explorar os efeitos benéficos dos probióticos nesta pesquisa é uma abordagem promissora para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento para aliviar os sintomas de distúrbios inflamatórios crônicos associados.

Introdução

As doenças inflamatórias intestinais (DII) são distúrbios inflamatórios gastrointestinais crônicos comuns, incluindo a doença de Crohn e a colite ulcerativa ()¹. As vias terapêuticas atuais para a colite inflamatória são 5-aminosalicilatos, corticosteróides, azatioprina e antibióticos². Além disso, esses medicamentos têm efeitos colaterais consideráveis³. Portanto, devemos prestar mais atenção ao efeito dos probióticos no tratamento da colite.

Abordagens terapêuticas alternativas incluem a administração de probióticos, que tem sido usad....

Protocolo

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as Diretrizes para Cuidados e Uso de Animais de Laboratório da Universidade de Anhui, China, e todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Anhui, China (No. IACUC(AHU)-2020-014).

1. Administração de antibióticos

1. Prepare um coquetel de antibióticos dissolvendo ampicilina (1 g/L), sulfato de neomicina (1 g/L), metronidazol (0,5 g/L) e vancomicina (0,5 g/L) em 1 L de água potável⁵.
2. Após a dissolução completa, conservar as soluções a 4 °C.
3. Coloq....

Resultados

Suplementação de B. cereus e colite
O modelo de colite aguda experimental foi induzido pela intervenção DSS na água potável. A Figura 1A mostra o protocolo experimental para administração de B. cereus no modelo de camundongo com colite. A indução do DSS obviamente diminuiu o peso corporal (Figura 1B) e o comprimento do cólon. O efeito aliviador de B. cereus por meio de gavagem oral foi investigado nos camundongos mo.......

Discussão

Para usar probióticos em estudos clínicos, é necessário avaliar a eficácia e segurança dos probióticos em modelos animais. Os protocolos fornecidos foram previamente otimizados para avaliar a gravidade da colite. Camundongos tratados com DSS é um modelo de inflamação intestinal, que mimetiza as características clínicas e histológicas características da colite ulcerativa¹². Os camundongos modelo de colite aguda são caracterizados por perda de peso corporal, diarréi.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
0,01 M PBS (pó, pH7,2– 7.4)	Solarbio	Pág. 1010-2L
Álcool etílico absoluto	Hushi	64-17-5
Solução de diferenciação de álcool ácido fsat	Beyotime	No.C0163S
Ágar	Sangon Biotech	9002-18-0
Ampicilina	Solarbio	69-53-4	Loja em 2– 8 ° C
Incubadora anaeróbica	Yue Longo	LA1-3T
Sulfato de dextrano sal de sódio grau de colite	MP Biomédicos	160110
Incubadora eletrotérmica	SANFA	HP-050A
Fixador de tecidos de uso geral	Biosharp	BL539A
Glicerina	Hushi	56-81-5
Kit de coloração de hematoxilina e eosina	Beyotime	Nº C0105
Meio de montagem de Kisser	Beyotime	Nº C0181
Metronidazol	Solarbio	443-48-1	Loja em 2– 8 ° C
Sulfato de neomieína	Solarbio	1405-10-3	Loja em 2– 8 ° C
Incubadora oscilante	Xangai Zhichu	ZQLY-180S
Cloreto de sódio	Sangon Biotech	7647-14-5
Papel de teste de sangue oculto nas fezes	Baso	BA2020B
Triptona	OXÓIDE	2285856
Vancomicina	Solarbio	1404-93-9	Loja em 2– 8 ° C
Xileno	Hushi	1330-20-7
Extrato de levedura	Sangon Biotech	8013-01-2