Descubrir la interacción entre las células asesinas naturales y las neuronas nociceptoras

Summary

Las neuronas nociceptoras y las células NK interactúan activamente en un contexto inflamatorio. Un enfoque de co-cultura permite estudiar esta interacción.

Abstract

Las neuronas somatosensoriales han evolucionado para detectar estímulos nocivos y activar reflejos defensivos. Al compartir medios de comunicación, las neuronas nociceptoras también sintonizan las defensas del huésped al controlar la actividad del sistema inmunológico. La comunicación entre estos sistemas es principalmente adaptativa, ayudando a proteger la homeostasis, también puede conducir a, o promover, la aparición de enfermedades crónicas. Ambos sistemas coevolucionaron para permitir dicha interacción local, como se encuentra en los tejidos linfoides primarios y secundarios y la mucosa. Estudios recientes han demostrado que los nociceptores detectan y responden directamente a antígenos extraños, citoquinas derivadas de células inmunes y microbios.

La activación de los nociceptores no solo produce hipersensibilidad al dolor y picazón, sino que también reduce el umbral de disparo del nociceptor, lo que lleva a la liberación local de neuropéptidos. Los péptidos que son producidos por, y liberados de, los terminales periféricos de los nociceptores pueden bloquear la quimiotaxis y la polarización de los linfocitos, controlando la localización, la duración y el tipo de inflamación. La evidencia reciente muestra que las neuronas sensoriales interactúan con las células inmunes innatas a través del contacto célula-célula, por ejemplo, involucrando receptores del grupo 2D (NKG2D) en células asesinas naturales (NK).

Dado que las células NK expresan los receptores afines para varios mediadores producidos por nociceptores, es concebible que los nociceptores utilicen neuropéptidos para controlar la actividad de las células NK. Aquí, ideamos un método de cocultivo para estudiar las interacciones neuronal-célula NK nociceptor en un plato. Usando este enfoque, encontramos que las neuronas nociceptoras lumbares disminuyen la expresión de citoquinas de las células NK. En general, tal método reduccionista podría ser útil para estudiar cómo las neuronas inervantes de tumores controlan la función anticancerígena de las células NK y cómo las células NK controlan la eliminación de las neuronas lesionadas.

Introduction

Los cuerpos celulares de las neuronas sensoriales se originan en los ganglios de la raíz dorsal (DRG). Los DRG se encuentran en el sistema nervioso periférico (SNP), entre el asta dorsal de la médula espinal y las terminales nerviosas periféricas. La naturaleza pseudo-unipolar de las neuronas DRG permite la transferencia de información de la rama periférica, que inerva el tejido diana, a la rama central, que lleva la información somatosensorial a la médula espinal¹. Utilizando receptores de canales iónicos especializados, las neuronas de primer orden detectan las amenazas planteadas por patógenos, alérgenos y contaminantes²

Protocol

Los Comités Institucionales de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Montreal (#22053, #22054) aprobaron todos los procedimientos con animales. Consulte la Tabla 1 para obtener una lista de soluciones y su composición y la Tabla de materiales para obtener una lista de materiales , equipos y reactivos utilizados en este protocolo.

1. Aislamiento, cultivo y estimulación de células NK

1. Generar neurona nociceptora intacta (control de camada; Ratones TRPV1 wt::D TA fl/wt) y ablacionados (TRPV1 cre::D TA fl/wt) cruzando ratones con toxina lox-stop-lox-diftérica (DTA fl/^fl

Results

Las células NK se purificaron magnéticamente a partir de esplenocitos de ratones de control de camada (TRPV1 wt: :D TA^{fl / wt}) y estimulados (48 h) con IL-2 e IL-15. Las células NK se cultivaron solas o cocultivadas con neuronas DRG recolectadas de la neurona nociceptora intacta (control de compañero de camada; TRPV1^wt::D TA fl/wt) o ratones ablacionados (TRPV1^cre::D TA^fl/wt). Luego, las células se expusieron al agonista capsaicina TRPV1 (1 μM) o su vehícu.......

Discussion

Davies et ^al.11 encontraron que las neuronas lesionadas regulan al alza la RAE1. A través del contacto célula-célula, las células NK que expresan NKG2D fueron capaces de identificar y eliminar las neuronas RAE1⁺ , que a su vez limitan el dolor crónico¹¹. Dado que las células NK también expresan varios receptores de neuropéptidos, y que esos neuropéptidos son conocidos por sus capacidades inmunomoduladoras, parece cada vez más importante estudiar la inter.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anti-ratón CD16/32	Laboratorio Jackson Nº	cat: 017769
B-27	Laboratorio Jackson	Nº de gato: 009669
Albúmina sérica bovina (BSA) grado de cultivo	World Precision Instruments	Nº de cat: 504167
BV421 anti-ratón NK-1.1	Fisher Scientific	Nº de gato: 12430112
Filtro de células (50 μ m)	Fisher Scientific	Cat n.º: A3160702
Colagenasa IV	Fisher	Scientific Cat n.º: 15140148
Dipteria toxinfl/fl	Fisher	Scientific Cat n.º: SH3057402
Dispasa II	Fisher Scientific	Cat n.º: 13-678-20B
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)	Fisher Scientific	Cat n.º: 07-200-95
EasySep Mouse NK Kit de aislamiento de células	Sigma	Nº de gato: CLS2595
Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)	Sigma	Nº de gato: C0130
FACSAria III	Sigma	Nº de gato: 04942078001
Suero fetal bovino (FBS)	Sigma	Nº de gato: 806552
FITC antiratón NKp46	Sigma	Nº de gato: L2020
Placa de 96 pocillos de fondo plano	Sigma	Nº de cat: 03690
Pipeta Pasteur de vidrio	Sigma	Nº de cat: 470236-274
Factor neurotrófico derivado de líneas celulares gliales (GDNF)	VWR	Nº de cat: 02-0131
Laminina	Cedarlán	Nº de cat: 03-50/31
L-Glutamina	Gibco	Nº de cat: A14867-01
Ratón IL-15 recombinante	Gibco	Nº de cat: 22400-089
Ratón recombinante IL-2	Gibco	Nº de cat: 21103-049
Factor de crecimiento nervioso (NGF)	Life Technologies	Nº de cat: 13257-019
Medios neurobasales	PeproTech	Nº de cat: 450-51-10
PE anti-ratón GM-CSF	PeproTech	Nº de cat: 212-12
Penicilina y Estreptomicina	PeproTech	Nº de cat: 210-15
células madre	Mortles	Nº de cat: 19855
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Biolegend	Nº de gato:	108732 Clon PK136
RPMI 1640 medios	Biolegend	Nº de gato:	137606 Clon 29A1.4
TRPV1Cre	Biolegend	Nº de gato: 505406	Clon MP1-22E9
Pinzas y herramientas de disección.	Biolegend	Nº de cat: 65-0865-14
Placa de 96 pocillos con fondo en U	Biolegend	Nº de gato: 101319
Tinte de viabilidad eFlour-780	Becton Dickinson