Nosiseptör nöronlar ve NK hücreleri aktif olarak enflamatuar bir bağlamda etkileşime girer. Bir ortak kültür yaklaşımı, bu etkileşimi incelemeyi sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Doğal Öldürücü Hücreler ve Nosiseptör Nöronlar Arasındaki Etkileşimi Ortaya Çıkarmak
Bu makalede
Özet
Özet
Somatosensoriyel nöronlar, zararlı uyaranları tespit etmek ve savunma reflekslerini aktive etmek için evrimleşmiştir. İletişim araçlarını paylaşarak, nosiseptör nöronlar ayrıca bağışıklık sisteminin aktivitesini kontrol ederek konakçı savunmasını da ayarlar. Bu sistemler arasındaki iletişim çoğunlukla adaptiftir, homeostazı korumaya yardımcı olur, ayrıca kronik hastalıkların başlangıcına yol açabilir veya teşvik edebilir. Her iki sistem de, birincil ve ikincil lenfoid dokularda ve mukozada bulunan bu tür lokal etkileşime izin vermek için birlikte evrimleşmiştir. Son zamanlarda yapılan çalışmalar, nosiseptörlerin yabancı antijenleri, bağışıklık hücresi kaynaklı sitokinleri ve mikropları doğrudan tespit ettiğini ve bunlara yanıt verdiğini göstermiştir.
Nosiseptör aktivasyonu sadece ağrı aşırı duyarlılığı ve kaşıntı ile sonuçlanmaz, aynı zamanda nosiseptör ateşleme eşiğini düşürür ve nöropeptitlerin lokal salınımına yol açar. Nosiseptörlerin periferik terminalleri tarafından üretilen ve salınan peptitler, lenfositlerin kemotaksisini ve polarizasyonunu bloke edebilir, inflamasyonun lokalizasyonunu, süresini ve tipini kontrol edebilir. Son kanıtlar, duyusal nöronların doğuştan gelen bağışıklık hücreleriyle hücre-hücre teması yoluyla etkileşime girdiğini, örneğin doğal öldürücü (NK) hücreler üzerindeki grup 2D (NKG2D) reseptörlerini kullandığını göstermektedir.
NK hücrelerinin çeşitli nosiseptör tarafından üretilen mediatörler için konyak reseptörlerini eksprese ettiği göz önüne alındığında, nosiseptörlerin NK hücrelerinin aktivitesini kontrol etmek için nöropeptitler kullandıkları düşünülebilir. Burada, bir tabaktaki nosiseptör nöron-NK hücre etkileşimlerini incelemek için bir ko-kültür yöntemi geliştirdik. Bu yaklaşımı kullanarak, lomber nosiseptör nöronların NK hücre sitokin ekspresyonunu azalttığını bulduk. Genel olarak, böyle bir indirgemeci yöntem, tümör innerve edici nöronların NK hücrelerinin antikanser fonksiyonunu nasıl kontrol ettiğini ve NK hücrelerinin yaralı nöronların ortadan kaldırılmasını nasıl kontrol ettiğini incelemek için yararlı olabilir.
Giriş
Duyusal nöronların hücre gövdeleri dorsal kök ganglionlarından (DRG) kaynaklanır. DRG, periferik sinir sisteminde (PNS), omuriliğin dorsal boynuzu ile periferik sinir terminalleri arasında bulunur. DRG nöronlarının psödo-unipolar doğası, hedef dokuyu innerve eden periferik daldan, somatosensoriyel bilgiyi omuriliğe taşıyan merkezi dala bilgi aktarımına izin verir1. Özel iyon kanalı reseptörleri kullanarak, birinci dereceden nöronlar patojenlerin, alerjenlerin ve kirleticilerinoluşturduğu tehditleri algılar 2, bu da katyonların akışına (Na +, Ca2 +) ve bir aksiyon potansiyelinin üretilmesine yol açar....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Université de Montréal'in Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komiteleri (#22053, #22054) tüm hayvan prosedürlerini onayladı. Çözümlerin ve bileşimlerinin listesi için Tablo 1'e ve bu protokolde kullanılan malzemelerin, ekipmanların ve reaktiflerin listesi için Malzeme Tablosu'na bakın.
1. NK hücre izolasyonu, kültürü ve stimülasyonu
- Nosiseptör nöronu bozulmadan üretin (çöp arkadaşı kontrolü; TRPV1wt::D TA fl/wt) ve ablatlanmış (TRPV1 cre::D TA fl/wt) fareler, lox-stop-lox-difteri toksin farelerini (DTA fl/fl) TRPV1cre/wt fareleri ile geç....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
NK hücreleri, çöp arkadaşı kontrolünden (TRPV1 wt: :D TAfl / wt) farelerin plenositlerinden manyetik olarak saflaştırıldı ve IL-2 ve IL-15 ile uyarıldı (48 saat). NK hücreleri daha sonra tek başlarına kültürlendi veya nosiseptör nörondan sağlam bir şekilde toplanan DRG nöronları ile birlikte kültürlendi (çöp arkadaşı kontrolü; TRPV1wt::D TA fl/wt) veya ablatlanmış (TRPV1cre::D TAfl/wt) fareler. Hücreler daha sonra TRPV1 agonisti kapsaisin (1 μM) veya aracı.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Davies ve ark.11 , yaralı nöronların RAE1'i yukarı regüle ettiğini bulmuşlardır. Hücre-hücre teması yoluyla , NKG2D eksprese eden NK hücreleri daha sonra RAE1 + nöronlarını tanımlayabilir ve ortadan kaldırabilir ve bu da kronik ağrıyı sınırlayabilir11. NK hücrelerinin ayrıca çeşitli nöropeptit reseptörlerini de eksprese ettiği ve bu nöropeptitlerin immünomodülatör yetenekleri ile bilindiği göz önüne alındığında, NK hücreleri ve nosiseptör nöronlar arasın.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacağı bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, Araştırma Fonu'nda Yeni Sınırlar (NFRFE201901326), Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri (162211, 461274, 461275), Kanada İnovasyon Vakfı (37439), Kanada Araştırma Başkanı programı (950-231859), Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi (RGPIN-2019-06824) ve Fonds de Recherche du Québec Nature et technologies (253380) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Anti-fare CD16/32 | Jackson Laboratuvarı Kedi | no: 017769 | |
| B-27 | Jackson Laboratuvarı | Kedi no: 009669 | |
| Sığır Serum Albümini (BSA) kültür sınıfı | Dünya Hassas Aletler Kedi | no: 504167 | |
| BV421 anti-fare NK-1.1 | Fisher Scientific Cat | no: 12430112 | |
| Hücre süzgeci (50 & mu; m) | Fisher Bilimsel | Kedi no: A3160702 | |
| Kollajenaz IV | Fisher Bilimsel Kedi | no: 15140148 | |
| Difteria toksinifl/fl | Fisher Bilimsel Kedi | no: SH3057402 | |
| Dispase II | Fisher Scientific | Cat no: 13-678-20B | |
| Dulbecco'nun Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) | Fisher Bilimsel | Kedi no: 07-200-95 | |
| EasySep Fare NK Hücre İzolasyon Kiti | Sigma | Cat no: CLS2595 | |
| Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) | Sigma | Cat no: C0130 | |
| FACSAria III | Sigma Cat | no: 04942078001 | |
| Fetal sığır serumu (FBS) | Sigma | Cat no: 806552 | |
| FITC anti-fare NKp46 | Sigma | Cat no: L2020 | |
| Düz tabanlı 96 oyuklu plaka | Sigma | Cat no: 03690 | |
| Cam Pasteur pipeti | Sigma | Cat no: 470236-274 | |
| Glial hücre hattından türetilmiş nörotrofik faktör (GDNF) | VWR | Cat no: 02-0131 | |
| Laminin | Cedarlane | Cat no: 03-50/31 | |
| L-Glutamin | Gibco | Cat no: A14867-01 | |
| Fare rekombinant IL-15 | Gibco | Cat no: 22400-089 | |
| Fare rekombinant IL-2 | Gibco | Cat no: 21103-049 | |
| Sinir Büyüme Faktörü (NGF) | Life Technologies | Cat no: 13257-019 | |
| Nörobazal media | PeproTech | Cat no: 450-51-10 | |
| PE anti-fare GM-CSF | PeproTech | Cat no: 212-12 | |
| Penisilin ve Streptomisin | PeproTech | Cat no: 210-15 | |
| Havaneli | Kök Hücre Teknolojisi | Kedi no: 19855 | |
| Fosfat Tamponlu Salin (PBS) | Biolegend | Kedi no: 108732 | Klon PK136 RPMI |
| 1640 medya | Biolegend | Kedi no: 137606 | Klon 29A1.4 |
| TRPV1Cre | Biolegend | Kedi no: 505406 | Klon MP1-22E9 |
| Cımbız ve diseksiyon aletleri. | Biolegend | Kedi no: 65-0865-14 | |
| U-Şekilli-dipli 96 oyuklu plaka | Biolegend | Kedi no: 101319 | |
| Canlılık Boyası eFlour-780 | Becton Dickinson |
Kaynaklar
- Berta, T., Qadri, Y., Tan, P. H., Ji, R. R. Targeting dorsal root ganglia and primary sensory neurons for the treatment of chronic pain. Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (7), 695-703 (2017).
- Baral, P., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
