Method Article

Мышиная гетеротопическая трансплантация шейки матки с использованием сосудистых манжет

DOI:

10.3791/64089

⸱

June 23rd, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Washington University School of Medicine, 2Department of Surgery, The University of Maryland, 3Department of Pathology & Immunology, Washington University School of Medicine, 4Department of Medicine, Washington University School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мышиные модели трансплантации сердца представляют собой ценные исследовательские инструменты для изучения трансплантационной иммунологии. Настоящий протокол детализирует гетеротопную трансплантацию шейного отдела сердца мыши, которая включает в себя размещение манжет на общей сонной артерии реципиента и стволе легочной артерии донора, чтобы обеспечить ламинарный кровоток.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мышиные модели трансплантации сердца часто используются для изучения травмы ишемии-реперфузии, врожденных и адаптивных иммунных реакций после трансплантации и влияния иммуномодулирующей терапии на отторжение трансплантата. Гетеротопическая трансплантация шейного сердца у мышей была впервые описана в 1991 году с использованием ушных анастомозов и впоследствии модифицирована, чтобы включить методы манжеты. Это изменение позволило улучшить показатели успеха, и с тех пор было опубликовано несколько докладов, в которых предлагалось дальнейшее техническое усовершенствование. Тем не менее, перевод в более широкое использование остается ограниченным из-за технических трудностей, связанных с анастомозами трансплантата, которые требуют точности для достижения адекватной длины и калибра манжет, чтобы избежать сосудистого анастомотического скручивания или чрезмерного напряжения, что может привести к повреждению трансплантата. Настоящий протокол описывает модифицированный метод выполнения гетеротопной трансплантации шейного сердца у мышей, который включает размещение манжеты на общей сонной артерии реципиента и легочной артерии донора в соответствии с направлением кровотока.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Abbott et al. опубликовали1 первое описание гетеротопной трансплантации брюшного сердца у крыс в 1964 году. Эти хирургические методы были усовершенствованы и упрощены Оно и др. в 1969 году2. Corry et al. впервые описали метод гетеротопной абдоминальной трансплантации сердца у мышей в 1973 году; подобно ранее сообщенным моделям крыс, это включало приживление в брюшную полость хозяина с реваскуляризацией путем сквозных анастомозов легочной артерии донора и восходящей аорты к нижней полой вене реципиента и брюшной аорте, соответственно3. Гетеротопическая трансплантация шейного сердца у крыс была опис....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры обращения с животными были проведены в соответствии с руководящими принципами NIH по уходу и использованию лабораторных животных и одобрены Комитетом по изучению животных в Медицинской школе Вашингтонского университета. Сердца мышей C57BL/6 (B6) и BALB/c (весом 20-25 г) пересаживали реципиентам B6 соответствующего пола (в возрасте 6-8 недель). Мыши были получены из коммерческих источников (см. Таблицу материалов). Сингенные трансплантации были выполнены для оценки клеточных реакций, связанных с травмой ишемии-реперфузии, и аллогенные трансплантации были выполнены для исследования иммунных механизмов, участвующих в толерантности и отторже....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта модель гетеротопной трансплантации шейки матки мыши была использована для выполнения более 1000 трансплантаций в нашей лаборатории с выживаемостью около 97%. Показатель успеха немного выше, чем в предыдущих отчетах с использованием других методов трансплантации сердца шейки матки у мышей 10,11,20. Это потенциально может быть связано с более крупной манжетой 20 Г, помещенной на легочную артерию донора, чтобы обеспечить достат.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Используя эту технику, гетеротопическая трансплантация шейного отдела сердца мыши может быть выполнена менее чем за 40 минут опытным микрохирургом и примерно за 60 минут микрохирургом начального уровня. В то время как трансплантация шейного сердца была изучена на многочисленных животных моделях, мышиная модель остается золотым стандартом из-за нескольких четко определенных генетических штаммов, возможностей генетического изменения и доступности многочисленных реагентов, включая моноклональные антитела24.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DK поддерживается грантами Национальных институтов здравоохранения 1P01AI116501, R01HL094601, R01HL151078, грантом Veterans Administration Merit Review 1I01BX002730 и Фондом для Barnes-Jewish Hospital.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
6-0 плетеные шелковые галстукиHenry Schein Inc7718729
0,75% провидон йозиновый скрабPriority Care IncNDC 57319-327-0
10-0 нейлоновый шовSurgical Specialties CorporationAK-0106
655-нм нецелевой Q-dotsInvitrogenQ21021MP
70% этанолPharmco Products Inc111000140
8-0 плетеные шелковые галстукиHenry Schein Inc1005597
щипцы AdsonFine Science Tools Inc91127-12
BALB/c и C57BL/6 мышей (6-8 недель)Jackson Laboratories
Биполярный коагуляторValleylab IncSurgII-20, E6008/E6008B
Карпрофен (Римадил) для инъекцийTranspharm35844
Карпрофен (Римадил) пероральная жевательная таблеткаTranspharm38995/37919
Изготовленный на заказ микроскоп 2P с программным обеспечением для сбора данных ImageWarpA& B Software
Dumont No. 5 щипцыFine Science Tools Inc11251-20
Пружинные ножницы в стиле Fine Vannas FineScience Tools Inc15000-03
GraphPad Prism 5.0Sun Microsystems Inc.
Иглодержатель HalseyFine Science Tools Inc91201-13
Зажим Halsted-Mosquito с изогнутым наконечникомFine Science Tools Inc91309-12
Гарвардский аппарат искусственной вентиляции легких для мышей модель 687Гарвардский аппаратMA1 55-0001
Раствор гепарина (100 Ед/мл)Abraxis Pharmaceutical Products504031
ImarisBitplane
Кетамин (50 мг/кг)Wyeth206205-01
Микроскоп— Leica Wild M651 × 6– Увеличение 40Leica Microsystems
Moria сверхтонкие пружинные ножницыFine Science Tools Inc15396-00
Изофлурановый испаритель ОгайоParkland ScientificV3000i
QdotsThermoFisher1604036
S& T SuperGrip Щипцы с наклонным наконечникомFine Science Tools Inc00649-11
S& T SuperGrip Щипцы с прямым наконечникомFine Science Tools Inc00632-11
Стерильный нормальный физиологический раствор (0,9% (масс./об.) хлорид натрияHospira IncNDC 0409-4888-20
Стерильные ватные палочки (конические мини-аппликаторы с хлопковым наконечником 3 дюйма)Puritan Medical Company LLC823-WC
Surflow 20 калибр 1/4-дюймовый тефлоновый ангиокатетерTerumo Medical CorporationSR-OX2032CA
Тефлоновый ангиокатетер Surflow 24 калибра 3/4 дюймаTerumo Medical CorporationR-OX2419CA
ThermoCare Small Animal Intensive System (настройки восстановления 3 л/мин O2, 80 °; C, влажность 40%)Thermocare Inc
VetBondSanta Cruz Biotechnology SC361931NC0846393
ксилазин (10 мг/кг)Lloyd Laboratories139-236

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. A technique for heart transplantation in the rat. The Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).
  2. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. The Journal of Thoracic and Card....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cervical Cardiac TransplantationVascular Cuff TechniqueMurine Heart TransplantIschemia Reperfusion InjuryGraft RejectionImmune Response TransplantationPulmonary Artery CuffCommon Carotid ArteryAnastomosis TechniqueTwo Photon Imaging

Related Articles