In dit protocol werd de endotheelbarrièrefunctie van de submandibulaire klier (SMG) geëvalueerd door verschillende moleculair gewogen fluorescerende tracers in vivo in de hoekaders van proefdiermodellen te injecteren onder een laserscanmicroscoop met twee fotonen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
In vivo Vasculaire permeabiliteitsdetectie bij submandibulaire klier van muizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Speeksel speelt een belangrijke rol in de mond- en algehele gezondheid. De intacte endotheelbarrièrefunctie van bloedvaten maakt speekselsecretie mogelijk, terwijl de disfunctie van de endotheelbarrière gerelateerd is aan veel secretoire stoornissen van de speekselklier. Het huidige protocol beschrijft een in vivo paracellulaire permeabiliteitsdetectiemethode om de functie van endotheel tight junctions (TJ's) in submandibulaire klieren van muizen (SMG) te evalueren. Ten eerste werden fluorescentie-gelabelde dextrans met verschillende molecuulgewichten (4 kDa, 40 kDa of 70 kDa) geïnjecteerd in de hoekaders van muizen. Daarna werd de eenzijdige SMG ontleed en bevestigd in de aangepaste houder onder een laserscanmicroscoop met twee fotonen en vervolgens werden beelden vastgelegd voor bloedvaten, acini en kanalen. Met behulp van deze methode werd de real-time dynamische lekkage van de tracers van verschillende grootte uit bloedvaten naar de basale zijden van de acini en zelfs over de acinaire epithelia in de kanalen gecontroleerd om de verandering van de endotheelbarrièrefunctie onder fysiologische of pathofysiologische omstandigheden te evalueren.
Inleiding
Verschillende speekselklieren produceren speeksel, dat voornamelijk fungeert als de eerste verdedigingslinie tegen infecties en de spijsvertering helpt, waardoor het een essentiële rol speelt in de mond- en algehele gezondheid1. Bloedtoevoer is cruciaal voor speekselkliersecretie, omdat het constant water, elektrolyten en moleculen levert die het primaire speeksel vormen. Endotheelbarrièrefunctie, gereguleerd door het tight junction (TJ) -complex, beperkt strikt en delicaat de permeatie van haarvaten, die zeer doorlaatbaar zijn voor water, opgeloste stoffen, eiwitten en zelfs cellen die van de circulerende bloedvaten naar de speekselklierweefse....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimentele procedures werden goedgekeurd door de Ethische Commissie voor Dieronderzoek, Peking University Health Science Center, en voldeden aan de Gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren (NIH-publicatie nr. 85-23, herzien 1996). Mannelijke wild-type (WT) muizen in de leeftijdsgroep van 8-10 weken werden gebruikt voor de huidige studie. De proefdieren werden zorgvuldig behandeld om hun pijn en ongemak te minimaliseren.
1. Procedures voor dieren
- Bereid en dien de anesthetica en tracers voor en dien ze toe.
- Handhaaf steriele omstandigheden gedurende het onderzoek en steriliseer de instr....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Volgens het protocol werd de unilaterale SMG bevestigd aan een op maat gemaakte houder en werd de klier zo ver mogelijk van het muizenlichaam gehouden om te voorkomen dat ademhaling bewegingsartefacten veroorzaakte. De snelle stroom van de rode bloedcellen (zwarte stippen) in bloedvaten werd waargenomen onder de microscoop. Na het vinden van het weefselveld onder een oculaire lens, moet men overschakelen om de microscoopsoftware te manipuleren. In de controlegroep bestonden beide tracers in de bloedvaten van de muis SMG........
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het behoud en de regulatie van de endotheelbarrièrefunctie zijn essentieel voor vasculaire homeostase. Endotheelcellen en hun intercellulaire juncties spelen een cruciale rol bij het handhaven en beheersen van de vasculaire integriteit12. De schuifkracht van de bloedstroom, groeifactoren en ontstekingsfactoren kunnen veranderingen in de vasculaire permeabiliteit veroorzaken en dus deelnemen aan het optreden en de ontwikkeling van systemische ziekten zoals hypertensie, diabetes en auto-immuunziekte.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Deze studie werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (subsidies 31972908, 81991500, 81991502, 81771093 en 81974151) en de Beijing Natural Science Foundation (subsidie 7202082).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 2-foton microscoop (TCS-SP8 DIVE) | Leica, Duitsland | ||
| 4 kDa FITC-gelabeld dextran | Sigma Aldrich | 46944 | |
| 70 kDa rodamine B-gelabeld dextran | Sigma Aldrich | R9379 | |
| Blunt weefselscheidingsnikkel | Bejinghuabo Company | NZW28 | |
| Depilatiecrème | Veet | ||
| Sterile wegwerpspuit | Zhiyu Company | 1 mL | |
| Image J-software | National Institutes of Health | ||
| Insulinspuiten | Becton, Dickinson and Company | 0253316 | 1 mL |
| Leica Application Suite X-software | Leica Microsystems | ||
| Microbuisjes | Axygen | MCT-150-C | 1.5 mL |
| Fosfaatbufferoplossing 1x | Servicebio | G4207-500 | |
| Weefselschaar | Bejinghuabo Company | M286-05 | |
| Tribromoethanol | JITIAN Bio | JT0781 |
Referenties
- Carpenter, G. H. The secretion, components, and properties of saliva. Annual Review of Food Science and Technology. 4, 267-276 (2013).
- Garrett, J. R. The proper role of nerves in salivary secretion: A review. Journal of Dental Research.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
