Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों में एट्रियल फाइब्रिलेशन संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए ट्रांसओसोफेगल एट्रियल पेसिंग का उपयोग करते समय प्रयोगात्मक मापदंडों के अनुकूलन का वर्णन करता है।
Abstract
एट्रियल फाइब्रिलेशन (एएफ) के लिए आनुवंशिक और अधिग्रहित जोखिम कारकों के माउस मॉडल एएफ के आणविक निर्धारकों की जांच में मूल्यवान साबित हुए हैं। प्रोग्राम्ड इलेक्ट्रिकल उत्तेजना को जीवित रहने की प्रक्रिया के रूप में ट्रांससोफेगल एट्रियल पेसिंग का उपयोग करके किया जा सकता है, इस प्रकार एक ही जानवर में सीरियल परीक्षण को सक्षम किया जा सकता है। हालांकि, कई पेसिंग प्रोटोकॉल मौजूद हैं, जो प्रजनन क्षमता को जटिल बनाता है। वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य अध्ययनों के बीच प्रजनन क्षमता में सुधार के लिए मॉडल-विशिष्ट प्रयोगात्मक मापदंडों को विकसित करने के लिए एक मानकीकृत रणनीति प्रदान करना है। प्रारंभिक अध्ययन जांच के तहत विशिष्ट मॉडल के लिए प्रयोगात्मक तरीकों को अनुकूलित करने के लिए किया जाता है, जिसमें अध्ययन के समय उम्र, लिंग और पेसिंग प्रोटोकॉल के पैरामीटर (जैसे, पेसिंग का तरीका और एएफ संवेदनशीलता की परिभाषा) शामिल हैं। महत्वपूर्ण रूप से, उच्च उत्तेजना ऊर्जा से बचने के लिए सावधानी बरती जाती है, क्योंकि यह अनजाने में पैरासिम्पेथेटिक सक्रियण के साथ गैंग्लियनिक प्लेक्सी की उत्तेजना का कारण बन सकता है, जो पेसिंग के दौरान अतिरंजित एट्रियोवेंट्रिकुलर (एवी) ब्लॉक द्वारा प्रकट होता है और अक्सर कृत्रिम एएफ प्रेरण से जुड़ा होता है। इस जटिलता का प्रदर्शन करने वाले जानवरों को विश्लेषण से बाहर रखा जाना चाहिए।
Introduction
एट्रियल फाइब्रिलेशन (एएफ) कई अधिग्रहित और आनुवंशिक जोखिम कारकों के लिए एक अंतिम सामान्य मार्ग का प्रतिनिधित्व करता है। एएफ सब्सट्रेट के पैथोफिजियोलॉजिकल तंत्र की जांच करने वाले अध्ययनों के लिए, माउस मॉडल आनुवंशिक हेरफेर की आसानी और इस तथ्य को देखते हुए फायदेमंद हैं कि, सामान्य तौर पर, वे विभिन्न नैदानिक फेनोटाइप 1,2,3 के लिए मनुष्यों में देखी गई एएफ संवेदनशीलता को पुन: पेश करते हैं। हालांकि, चूहों में शायद ही कभी सहज एएफ4 विकसित होता है, जिससे उत्तेजक एट्रियल पेसिंग अध्ययनों के उपयोग की आवश्यकता होती है।
प्रोग्राम्ड इलेक्ट्रिकल स्टिमुलेशन (पीईएस) को इंट्राकार्डियक5 या ट्रांससोफेगल6 पेसिंग का उपयोग करके मुराइन एट्रियल इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी और एएफ संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। जबकि ट्रांससोफेगल दृष्टिकोण एक जीवित रहने की प्रक्रिया के रूप में विशेष रूप से फायदेमंद है, इसका उपयोग कई प्रकाशित प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल 7,8 और परिवर्तनशीलता के स्रोतों से जटिल है जो प्रजनन क्षमता में बाधा डालसकते हैं। इसके अलावा, सीमित रिपोर्ट किए गए प्रोटोकॉल तुलना एक उपयुक्त पेसिंग प्रोटोकॉल का चयन करना चुनौतीपूर्ण बनाती है।
वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य प्रजनन क्षमता बढ़ाने के लिए मुराइन एएफ संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए मॉडल-विशिष्ट ट्रांसोफेजियल पीईएस विधियों को विकसित करने के लिए एक व्यवस्थित रणनीति का उपयोग करना है। महत्वपूर्ण रूप से, प्रारंभिक पायलट अध्ययन उम्र, लिंग और पेसिंग मोड परिवर्तनशीलता के लिए लेखांकन करके पेसिंग प्रोटोकॉल को अनुकूलित करने के लिए किए जाते हैं, जिसमें पेसिंग को अनजाने पैरासिम्पेथेटिक उत्तेजना को कम करने के लिए डिज़ाइन किया गया है जोपरिणामों को भ्रमित कर सकता है।
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Protocol
इस प्रक्रिया को वेंडरबिल्ट संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड के अनुरूप है। प्रोटोकॉल कोआनुवंशिक 9 और एएफ संवेदनशीलता केअधिग्रहित 10 (जैसे, उच्च रक्तचाप) माउस मॉडल दोनों का उपयोग करके विकसित किया गया था। ऑपरेटर को अध्ययन के तहत माउस के फेनोटाइप से अंधा कर दिया गया था।
1. पशु चयन
- आनुवंशिक मॉडल के लिए, एएफ संवेदनशीलता की इष्टतम अवधि निर्धारित करने के लिए चूहों को द्विसाप्ताहिक (यानी, हर दूसरे सप्ताह) एट्रियल पेसिंग के अधीन करें (चरण 6 देखें)।
- 8 सप्ताह की उम्र में द्विसाप्ताहिक पेसिंग शुरू करें। परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए नियंत्रण के रूप में जंगली प्रकार के कूड़े का उपयोग करें। दोनों लिंगों का अध्ययन करें, क्योंकि कोई एएफ फेनोटाइप9 विकसित नहीं कर सकता है।
- अधिग्रहित मॉडल के लिए, चूहों को शारीरिक परिपक्वता (~ 12 सप्ताह की आयु) प्राप्त करने के बाद पेसिंग का संचालन करें। जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, दोनों लिंगों का अध्ययन करें।
- इन प्रारंभिक अध्ययनों के दौरान, इष्टतम पेसिंग मोड निर्धारित करने के लिए बर्स्ट पेसिंग8 (एक निश्चित पेसिंग चक्र लंबाई [सीएल] का उपयोग करके) और ह्रास पेसिंग7 (उत्तरोत्तर छोटे पेसिंग सीएल के साथ) दोनों का प्रदर्शन करें। प्रत्येक प्रक्रिया को न्यूनतम 24 घंटे से अलग करें।
नोट: जैसा कि चूहों की बढ़ती संख्या का अध्ययन किया जाता है, इष्टतम आयु, लिंग और पेसिंग मोड निर्धारित करने के लिए संचित डेटा की समीक्षा करें जो एएफ अतिसंवेदनशील चूहों में एएफ को बढ़ावा देता है लेकिन नियंत्रण नहीं करता है।- एएफ संवेदनशीलता की कई परिभाषाओं का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण करें (उदाहरण के लिए, एएफ एपिसोड8 की संख्या, कुल एएफ अवधि9, एएफ घटना4, और निरंतर एएफ घटना, जिसे आमतौर पर 10 एस11 या 15 एस12 के रूप में परिभाषित किया जाता है, और यहां तक कि 5 मिनट13,14 तक) क्योंकि कुछ मॉडल एक के लिए एएफ फेनोटाइप प्रदर्शित कर सकते हैं लेकिन सभी परिभाषाएं9 नहीं।
नोट: एएफ एपिसोड और एएफ संवेदनशीलता की परिभाषा प्रकाशितअध्ययनों 4,7 के बीच भिन्न होती है। एएफ एपिसोड8 को आमतौर पर कम से कम 1 के लिए होने वाली अनियमित अनियमित वेंट्रिकुलर प्रतिक्रिया के साथ तेजी से एट्रियल गतिविधि के रूप में परिभाषित किया जाता है (चित्रा 1)। एएफ के अलावा, एट्रियल पेसिंग भी नियमित या अनियमित वेंट्रिकुलर प्रतिक्रिया के साथ एट्रियल फड़फड़ाहट को प्रेरित कर सकता है।
- एएफ संवेदनशीलता की कई परिभाषाओं का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण करें (उदाहरण के लिए, एएफ एपिसोड8 की संख्या, कुल एएफ अवधि9, एएफ घटना4, और निरंतर एएफ घटना, जिसे आमतौर पर 10 एस11 या 15 एस12 के रूप में परिभाषित किया जाता है, और यहां तक कि 5 मिनट13,14 तक) क्योंकि कुछ मॉडल एक के लिए एएफ फेनोटाइप प्रदर्शित कर सकते हैं लेकिन सभी परिभाषाएं9 नहीं।
- अतिरिक्त चूहों पर बाद के अध्ययनों के लिए अनुकूलित मॉडल-विशिष्ट मापदंडों और एएफ संवेदनशीलता की परिभाषा का उपयोग करें।
2. पशु तैयारी
- 100% ऑक्सीजन के 1 एल /मिनट में 3% आइसोफ्लुरेन ( सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करके एक प्रेरण कक्ष में माउस को एनेस्थेटाइज करें।
नोट: आइसोफ्लुरेन हानिकारक है। यह त्वचा या आंख को परेशान कर सकता है और अन्य केंद्रीय तंत्रिका तंत्र विषाक्तताओं के बीच चक्कर आना, थकान और सिरदर्द पैदा कर सकता है। एक उपयुक्त स्कैवेंजिंग विधि (जैसे, सक्रिय कार्बन कनस्तर) के साथ एक अच्छी तरह से हवादार क्षेत्र में उपयोग करें। - पेडल रिफ्लेक्स के नुकसान के बाद, माउस को एक हीटिंग पैड पर एक लापरवाह स्थिति में रखें जो शरीर के तापमान को लगभग 37 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखने के लिए डिज़ाइन किया गया है, जिसमें पिछले अंगों को पैड की सतह पर टैप किया गया है।
- सूखने से रोकने के लिए आंखों पर स्नेहन आंखों का मलहम लागू करें।
- माउस की नाक पर सुरक्षित रूप से एक एनेस्थेटिक मास्क रखें। 100% ऑक्सीजन के 1 एल / मिनट में 1% आइसोफ्लुरेन का उपयोग करके संज्ञाहरण का रखरखाव शुरू करें। सुनिश्चित करें कि नाक अवरोध से मुक्त हैं क्योंकि चूहे नाक से राहत देने के लिए बाध्य हैं।
- फोरलिम्ब्स में जैविक एम्पलीफायर और डेटा अधिग्रहण हार्डवेयर से जुड़े 27 जी ईसीजी सुई इलेक्ट्रोड ( सामग्री की तालिका देखें) के चमड़े के नीचे प्लेसमेंट द्वारा सतह इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईसीजी, लीड आई) प्राप्त करें। बाएं पिछले अंग में सुई इलेक्ट्रोड रखकर सिग्नल को पीस लें।
3. कैथेटर प्लेसमेंट
- संक्षेप में माउस से आइसोफ्लुरेन मास्क हटा दें।
- अन्नप्रणाली में एक उत्तेजक और उत्तेजना आइसोलेटर ( सामग्री की तालिका देखें) से जुड़ा 2-एफ ऑक्टापोलर इलेक्ट्रोड कैथेटर (इलेक्ट्रोड चौड़ाई और रिक्ति = 0.5 मिमी) डालें (चित्र 2)।
- एक गहराई में डालें जो मुंह (गर्दन के विस्तारित के साथ) से xiphoid उपास्थि के ठीक ऊपर की दूरी का अनुमान लगाता है।
- माउस के नथुने पर आइसोफ्लुरेन मास्क को फिर से रखें।
- विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके ईसीजी लीड I की निरंतर रिकॉर्डिंग के साथ डेटा अधिग्रहण शुरू करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
- उत्तेजना आइसोलेटर मोड को द्विध्रुवी में समायोजित करें। उत्तेजना के दौरान इलेक्ट्रोड की सबसे दूरस्थ जोड़ी का उपयोग करें।
- पकड़ने में सक्षम होने के लिए अन्नप्रणाली के भीतर कैथेटर को ठीक से रखें। ऐसा करने के लिए, साइनस सीएल की तुलना में थोड़ा कम सीएल पर 2 एमएस की पल्स चौड़ाई के साथ 1.5 एमए उत्तेजना लागू करें (उदाहरण के लिए, यदि साइनस सीएल 120 एमएस है तो 100 एमएस के सीएल का उपयोग करें)। कैथेटर को तब तक सावधानीपूर्वक रखें जब तक कि लगातार एट्रियल कैप्चर प्राप्त न हो जाए।
4. दहलीज निर्धारण
- एट्रियल डायस्टोलिक कैप्चर थ्रेशोल्ड (टीएच) निर्धारित करने के लिए, एट्रियल कैप्चर के लिए उपयोग किए जाने वाले सीएल में 2 एमएस की पल्स चौड़ाई के साथ 1.5 एमए पर पेसिंग शुरू करें। एट्रियल कैप्चर के नुकसान तक उत्तेजना आयाम को 0.05 एमए वृद्धि तक कम करें, बाद में कैप्चर तक वृद्धि के साथ।
नोट: सबसे कम आयाम जिस पर लगातार एट्रियल कैप्चर प्राप्त किया जाता है वह एट्रियल टीएच है। उच्च उत्तेजना आयामों पर पैरासिम्पेथेटिक उत्तेजना के लिए चिंता के कारण, जो कृत्रिम एएफ प्रेरण9 के साथ पेसिंग के दौरान अत्यधिक एवी ब्लॉक द्वारा परिलक्षित होता है, अधिकतम स्वीकार्य टीएच 0.75 एमए है। यदि आवश्यक हो, तो टीएच ≤0.75 एमए प्राप्त करने के लिए कैथेटर को फिर से स्थापित करें। - उत्तेजना आयाम को दो बार टीएच में समायोजित करें।
5. इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल गुणों का निर्धारण
- एएफ प्रेरण15 के लिए तेजी से एट्रियल पेसिंग से पहले साइनस नोड रिकवरी टाइम (एसएनआरटी), वेंकेबैक चक्र लंबाई (डब्ल्यूसीएल), और एट्रियोवेंट्रिकुलर प्रभावी दुर्दम्य अवधि (एवीईआरपी) सहित इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल मापदंडों को मापें।
6. एट्रियल अतालता संवेदनशीलता
- प्रारंभिक अध्ययनों (चरण 1.1.-1.4.) से निर्धारित विभिन्न सीएल पर बर्स्ट पेसिंग या ह्रास पेसिंग का उपयोग करके 2 एमएस की पल्स चौड़ाई के साथ दो बार टीएच पर पेसिंग करें।
- बर्स्ट पेसिंग के लिए, 15 सेकंड के लिए 50 एमएस की प्रारंभिक सीएल पर गति होती है, जिसके बाद की ट्रेनें 40 एमएस, 30 एमएस, 25 एमएस, 20 एमएस और 15 एमएस 8,10 के सीएल पर होती हैं। प्रत्येक पेसिंग ट्रेन के बाद 30 सेकंड के लिए पेसिंग रोकें ताकि आगे बढ़ने से पहले वसूली की अनुमति मिल सके। यदि एएफ एक पेसिंग ट्रेन के बाद होता है, तो बाद में पेसिंग के साथ आगे बढ़ने से पहले समाप्ति के बाद 30 सेकंड तक प्रतीक्षा करें।
- घटती पेसिंग के लिए, 40 एमएस के सीएल पर गति करें और 20 एमएस7 पर समाप्ति तक सीएल को हर 2 सेकंड में 2 एमएस तक कम करें। पेसिंग ट्रेनों को तीन प्रतियों में या17 में निष्पादित करें, जिसमें प्रत्येक ट्रेन के बाद वसूली के लिए 30 सेकंड का ठहराव होता है। जैसा कि ऊपर बताया गया है, यदि एएफ विकसित होता है, तो आगे बढ़ने से पहले समाप्ति के बाद 30 सेकंड तक प्रतीक्षा करें।
नोट: प्रारंभिक प्रयोगों (यानी, चरण 1.1.-1.5.) के दौरान प्रोटोकॉल मापदंडों को अनुकूलित करते समय, पांच ट्रेनों के साथ ह्रासात्मक पेसिंग करें। यह निर्धारित करने के लिए एक पोस्ट हॉक विश्लेषण करें कि क्या तीन या पांच ट्रेनें सबसे बड़ी संवेदनशीलता प्रदान करती हैं। - अंतिम पेसिंग ट्रेन के बाद या एएफ के 10 मिनट के एपिसोड के बाद, जो भी पहले आता है, साइनस ताल के 30 सेकंड पर प्रक्रिया समाप्त करें।
7. पोस्ट-प्रक्रिया
- डेटा अधिग्रहण बंद करें।
- धीरे से कैथेटर और ईसीजी इलेक्ट्रोड हटा दें।
- एनेस्थीसिया बंद करो।
- एनेस्थेटाइज्ड माउस को एक पिंजरे में रखें और वसूली सुनिश्चित करने के लिए 10 मिनट के लिए निरीक्षण करें।
- डेटा फ़ाइल सहेजें. सीरियल परीक्षण के मामले में, पेसिंग प्रक्रिया को दोहराने से पहले न्यूनतम 24 घंटे तक प्रतीक्षा करें।
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Representative Results
ट्रांसओसोफेगल एट्रियल पेसिंग अध्ययन एसएनआरटी और एवीआरपी, साथ ही एएफ संवेदनशीलता6 (चित्रा 1) का निर्धारण करके एसए और एवी नोड्स के इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल गुणों का आकलन करते हैं। ईसीजी रिकॉर्डिंग पी तरंग अवधि, पीआर अंतराल, क्यूआरएस अवधि और क्यूटी / क्यूटीसी अंतराल के माप को सक्षम बनाता है। तेजी से एट्रियल पेसिंग के दौरान ईसीजी की निरंतर रिकॉर्डिंग एएफ भेद्यता के निम्नलिखित माप प्रदान कर सकती है: अध्ययन के दौरान प्रेरित एपिसोड की संख्या, एपिसोड की संचयी और औसत अवधि, और निरंतर एएफ एपिसोड की संख्या। पेसिंग के दौरान अत्यधिक एवी ब्लॉक के एपिसोड पेसिंग-प्रेरित पैरासिम्पेथेटिक उत्तेजना (चित्रा 3) की अवधि का प्रदर्शन करसकते हैं, यह दर्शाता है कि संबंधित एएफ मॉडल के पैथोफिज़ियोलॉजी के बजाय इस घटना की एक कलाकृति है।
चित्रा 1: एट्रियल पेसिंग के प्रतिनिधि परिणाम। सतह ईसीजी रिकॉर्डिंग तेजी से एट्रियल पेसिंग के बाद (ए) साइनस ताल और (बी) एट्रियल फाइब्रिलेशन को दर्शाती है। पेसिंग दर वेंकेबैक सीएल से अधिक है, जिसके परिणामस्वरूप पेसिंग के दौरान 1: 1 एवी नोडल चालन का नुकसान होता है। बेसलाइन आर्टिफैक्ट माउस श्वसन से संबंधित है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 2: ट्रांससोफेगल कैथेटर का दृश्य प्रतिनिधित्व और गैंग्लियनिक प्लेक्सी से इसकी निकटता। (ए) 2-एफ ऑक्टापोलर कैथेटर को दर्शाती एक तस्वीर। (बी) कैथेटर की पश्चवर्ती बाएं एट्रियल गैंग्लियनिक प्लेक्सी से निकटता का चित्रण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3: तेजी से एट्रियल पेसिंग के दौरान अत्यधिक एवी ब्लॉक के प्रतिनिधि परिणाम। सतह ईसीजी रिकॉर्डिंग (ए) और (बी) अत्यधिक एवी ब्लॉक के साथ एट्रियल गति लय का प्रदर्शन करती है जो एट्रियल पेसिंग के दौरान हो सकती है, विशेष रूप से उच्च उत्तेजना तीव्रता के साथ पेसिंग के दौरान और छोटे सीएल पर। लाल तीर क्यूआरएस कॉम्प्लेक्स को दर्शाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
ट्रांसओसोफेगल एट्रियल पेसिंग न केवल एक ही जानवर में सीरियल अध्ययन की अनुमति देता है, बल्कि इसकी अवधि आमतौर पर इंट्राकार्डियक अध्ययन (~ 20 मिनट) से कम होती है, इस प्रकार एनेस्थेटिक उपयोग और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल मापदंडों पर इसके प्रभाव को कम करती है।
प्रत्येक व्यक्तिगत माउस मॉडल के लिए शुरू में विधियों को अनुकूलित करना महत्वपूर्ण है। उम्र बढ़ने से सामान्य चूहों18,19 में एएफ इंड्यूसिबिलिटी बढ़ जाती है, और व्यक्तिगत आनुवंशिक मॉडल सीमित अवधि में एएफ इंड्यूसिबिलिटी का प्रदर्शन कर सकते हैं। हर दूसरे सप्ताह पायलट अध्ययन करने से एक आयु विंडो निर्धारित की जा सकती है जिसके दौरान एएफ फेनोटाइप माउस इंड्यूसेबल होता है लेकिन नियंत्रित चूहे नहीं होते हैं। सेक्स एक निर्धारण कारक हो सकता है, क्योंकि एक या दोनों लिंग इंड्यूसेबल एएफ9 प्रदर्शित कर सकते हैं। इसके अलावा, विशिष्ट चूहे केवल एक प्रकार के पेसिंग मोड के जवाब में एएफ संवेदनशीलता दिखा सकते हैं, जबकि अन्य एक अलग मोड या कई मोड9 के लिए एएफ संवेदनशीलता प्रदर्शित करते हैं।
तेजी से एट्रियल पेसिंग के दौरान, चूहों को अत्यधिक एवी ब्लॉक का अनुभव हो सकता है जो अक्सर एएफ प्रेरण के साथ संयोग होता है। यह घटना पीछे के बाएं आलिंद पर स्थित गैंग्लियनिक प्लेक्सी की अनजाने उत्तेजना के कारण होती है, जिसके परिणामस्वरूप पैरासिम्पेथेटिक सक्रियण9 होता है। महत्वपूर्ण एवी ब्लॉक को वेंट्रिकुलर ब्रैडीकार्डिया के रूप में परिभाषित किया गया है जो एकल पेसिंग ट्रेन के ≥10% तक रहता है और उच्च उत्तेजना तीव्रता और शॉर्ट पेसिंग सीएल के साथ पेसिंग करते समय सबसे अधिक बार सामना किया जाता है। इस प्रकार की अतालता प्रेरण नियंत्रित चूहों में एएफ की घटनाओं को बढ़ाता है और एक प्रयोगात्मक समूह के भीतर अधिक अतालता परिवर्तनशीलता का कारण बनता है। इन दूषित विशेषताओं को देखते हुए, इन स्थितियों के तहत एएफ का अनुभव करने वाले जानवरों को विश्लेषण से बाहर रखा जाना चाहिए।
टीएच ≤0.75 एमए के बावजूद पेसिंग के दौरान गहरा एवी ब्लॉक होना चाहिए, पेसिंग आयाम को 1.5x TH7 तक कम करना उचित है। इसके अलावा, यदि प्रारंभिक प्रयोगों के दौरान एएफ फेनोटाइप नहीं देखा जाता है, तो 10 एमएस को सबसे कम पेसिंग सीएल16 के रूप में उपयोग करने का प्रयास करना संभव है। यदि अधिग्रहित मॉडल के लिए 12 सप्ताह की उम्र में एएफ फेनोटाइप नहीं देखा जाता है, तो बढ़ते फेनोटाइप परिपक्वता20 के प्रभावों का पता लगाने के लिए द्विसाप्ताहिक प्रारंभिक अध्ययनों पर विचार करें।
इस दृष्टिकोण की एक सीमा आइसोफ्लुरेन संज्ञाहरण का उपयोग है। आइसोफ्लुरेन को स्वायत्त फ़ंक्शन21 को दबाने के लिए जाना जाता है, और अपेक्षाकृत कम जोखिम के बावजूद इस प्रभाव से इनकार नहीं किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल चूहों में ट्रांससोफेगल पीईएस विधियों को विकसित करने के लिए एक अनुकूलित रणनीति की पहली विस्तृत रिपोर्ट का प्रतिनिधित्व करता है। जबकि यह अध्ययन एएफ संवेदनशीलता पर केंद्रित है, इस प्रोटोकॉल के भविष्य के अनुप्रयोगों का उपयोग वेंट्रिकुलर अतालता22,23 का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
चित्र 2 BioRender.com के साथ बनाया गया था। इस काम को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (एचएल096844 और एचएल 133127) में नेशनल हार्ट, लंग और ब्लड इंस्टीट्यूट से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था; अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (2160035, 18एसएफआरएन 34230125 और 903918 [एमबीएम]); और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ (यूएल 1 टीआर 000445) के एडवांसिंग ट्रांसलेशनल साइंसेज के लिए राष्ट्रीय केंद्र।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 27 G ECG electrodes | ADInstruments | MLA1204 | |
| 2-F octapolar electrode catheter | NuMED | CIBercath | |
| Activated carbon canister | VetEquip | 931401 | |
| Analysis software | ADInstruments | LabChart v8.1.13 | |
| Biological amplifier | ADInstruments | FE231 | |
| Data acquisition hardware | ADInstruments | PowerLab 26T | |
| Eye ointment | MWI Veterinary | NC1886507 | |
| Heating pad | Braintree Scientific | DPIP | |
| Isoflurane | Piramal | 66794-017-25 | |
| Stimulator | Bloom Associates | DTU-210 | |
| Stimulus Isolator | World Precision Instruments | Model A365 |
References
- Sumitomo, N., et al. Association of atrial arrhythmia and sinus node dysfunction in patients with catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia. Circulation Journal. 71 (10), 1606-1609 (2007).
- Fukui, A., et al. Role of leptin signaling in the pathogenesis of angiotensin II-mediated atrial fibrosis and fibrillation. Circulation: Arrhythmia and Electrophysiology. 6 (2), 402-409 (2013).
- Schutter, D., et al. Animal models of atrial fibrillation. Circulation Research. 127 (1), 91-110 (2020).
- Li, N., et al. Ryanodine receptor-mediated calcium leak drives progressive development of an atrial fibrillation substrate in a transgenic mouse model. Circulation. 129 (12), 1276-1285 (2014).
- Wakimoto, H., et al. Induction of atrial tachycardia and fibrillation in the mouse heart. Cardiovascular Research. 50 (3), 463-473 (2001).
- Schrickel, J. W., et al. Induction of atrial fibrillation in mice by rapid transesophageal atrial pacing. Basic Research in Cardiology. 97 (6), 452-460 (2002).
- Verheule, S., et al. Increased vulnerability to atrial fibrillation in transgenic mice with selective atrial fibrosis caused by overexpression of TGF-beta1. Circulation Research. 94 (11), 1458-1465 (2004).
- Faggioni, M., et al. Suppression of spontaneous ca elevations prevents atrial fibrillation in calsequestrin 2-null hearts. Circulation: Arrhythmia and Electrophysiology. 7 (2), 313-320 (2014).
- Murphy, M. B., et al. Optimizing transesophageal atrial pacing in mice to detect atrial fibrillation. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 332 (1), 36-43 (2022).
- Prinsen, J. K., et al. Highly reactive isolevuglandins promote atrial fibrillation caused by hypertension. JACC: Basic to Translational Science. 5 (6), 602-615 (2020).
- Aschar-Sobbi, R., et al. Increased atrial arrhythmia susceptibility induced by intense endurance exercise in mice requires TNFα. Nature Communications. 6, 6018 (2015).
- Bruegmann, T., et al. Optogenetic termination of atrial fibrillation in mice. Cardiovascular Research. 114 (5), 713-723 (2017).
- Matsushita, N., et al. IL-1β plays an important role in pressure overload-induced atrial fibrillation in mice. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 42 (4), 543-546 (2019).
- Sato, S., et al. Cardiac overexpression of perilipin 2 induces atrial steatosis, connexin 43 remodeling, and atrial fibrillation in aged mice. American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. 317 (6), 1193-1204 (2019).
- Li, N., Wehrens, X. H. T. Programmed electrical stimulation in mice. Journal of Visualized Experiments. (39), e1730 (2010).
- Yao, C., et al. Enhanced cardiomyocyte NLRP3 inflammasome signaling promotes atrial fibrillation. Circulation. 138 (20), 2227-2242 (2018).
- Purohit, A., et al. Oxidized Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II triggers atrial fibrillation. Circulation. 128 (16), 1748-1757 (2013).
- Jansen, H. J., et al. Atrial fibrillation in aging and frail mice. Circulation: Arrhythmia and Electrophysiology. 14 (9), 01077 (2021).
- Luo, T., et al. Characterization of atrial histopathological and electrophysiological changes in a mouse model of aging. International Journal of Molecular Medicine. 31 (1), 138-146 (2013).
- McCauley, M. D., et al. Ion channel and structural remodeling in obesity-mediated atrial fibrillation. Circulation: Arrhythmia and Electrophysiology. 13 (8), 00896 (2020).
- Kato, M., et al. Spectral analysis of heart rate variability during isoflurane anesthesia. Anesthesiology. 77 (4), 669-674 (1992).
- Schmeckpeper, J., et al. Abstract 11402: Targeting RyR2 to suppress ventricular arrhythmias and improve left ventricular function in chronic ischemic heart disease. Circulation. 144, Suppl_1 11402 (2021).
- Kim, K., et al. Abstract B-PO01-017: RyR2 hyperactivity promotes susceptibility to ventricular tachycardia in structural heart disease. Heart Rhythm. 18, Suppl_8 57 (2021).
