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Cancer Research

ध्वनिक माइक्रोडिवाइस के आधार पर सेल और न्यूक्लियस की संपीड़न क्षमता का मापन

Published: July 14, 2022 doi: 10.3791/64225
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Sino-French Institute of Nuclear Engineering and Technology, Sun Yat-sen University

Summary

यहां ध्वनिक माइक्रोडिवाइस के आधार पर सेल या नाभिक संपीड़न को मापने के लिए एक तेज़ और गैर-विनाशकारी प्रणाली बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया गया है। उपकला-मेसेनकाइमल संक्रमण या आयनीकरण विकिरण के बाद ट्यूमर कोशिकाओं के यांत्रिक गुणों में परिवर्तन की जांच की गई, जो वैज्ञानिक अनुसंधान और नैदानिक अभ्यास में इस पद्धति की अनुप्रयोग संभावना का प्रदर्शन करती है।

Abstract

सेल यांत्रिकी ट्यूमर मेटास्टेसिस, कोशिकाओं के घातक परिवर्तन और रेडियोसंवेदनशीलता में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इन प्रक्रियाओं के दौरान, कोशिकाओं के यांत्रिक गुणों का अध्ययन करना अक्सर चुनौतीपूर्ण होता है। संपीड़न या स्ट्रेचिंग जैसे संपर्क के आधार पर पारंपरिक माप विधियां सेल क्षति का कारण बनती हैं, माप सटीकता और बाद की सेल संस्कृति को प्रभावित करती हैं। अनुयायी अवस्था में माप भी सटीकता को प्रभावित कर सकता है, खासकर विकिरण के बाद क्योंकि आयनीकरण विकिरण कोशिकाओं को समतल करेगा और आसंजन को बढ़ाएगा। यहां, ध्वनिक द्रव्य विधि पर आधारित एक सेल यांत्रिकी माप प्रणाली विकसित की गई है। ध्वनिक बल की कार्रवाई के तहत सेल गति प्रक्षेपवक्र को रिकॉर्ड करके सेल संपीड़ितता प्राप्त की जा सकती है, जो निलंबित अवस्था में तेज और गैर-विनाशकारी माप का एहसास कर सकती है। यह पेपर चिप डिजाइन, नमूना तैयारी, प्रक्षेपवक्र रिकॉर्डिंग, पैरामीटर निष्कर्षण और विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल को विस्तार से रिपोर्ट करता है। इस विधि के आधार पर विभिन्न प्रकार के ट्यूमर कोशिकाओं की संपीड़न क्षमता को मापा गया था। नाभिक की संपीड़ितता का मापन पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक की अनुनाद आवृत्ति और माइक्रोचैनल की चौड़ाई को समायोजित करके भी प्राप्त किया गया था। इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रयोगों के आणविक स्तर के सत्यापन के साथ संयुक्त, मेसेनकाइमल संक्रमण (ईएमटी) के लिए दवा-प्रेरित उपकला से पहले और बाद में सेल संपीड़ितता की तुलना की गई थी। इसके अलावा, विभिन्न खुराक के साथ एक्स-रे विकिरण के बाद सेल संपीड़ितता का परिवर्तन सामने आया था। इस पत्र में प्रस्तावित सेल यांत्रिकी माप विधि सार्वभौमिक और लचीली है और वैज्ञानिक अनुसंधान और नैदानिक अभ्यास में व्यापक अनुप्रयोग संभावनाएं हैं।

Introduction

सेल यांत्रिक गुण ट्यूमर मेटास्टेसिस, कोशिकाओं के घातक परिवर्तन और रेडियोसेंसिटिविटी 1,2 में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। उपरोक्त प्रक्रिया में सेल यांत्रिक गुणों की भूमिका की गहन समझ हासिल करने के लिए, सेलुलर यांत्रिकी का सटीक माप महत्वपूर्ण है, और माप को बाद की संस्कृति और विश्लेषण के लिए कोशिकाओं को नुकसान नहीं पहुंचाना चाहिए। माप प्रक्रिया जितनी जल्दी हो सके होनी चाहिए, अन्यथा सेल व्यवहार्यता प्रभावित हो सकती है यदि कोशिकाओं को लंबे समय तक खेती के माहौल से हटा दिया जाता है।

मौजूदा सेल यांत्रिकी माप विधियों को कुछ सीमाओं का सामना करना पड़ता है। कुछ विधियां, जैसे चुंबकीय घुमा साइटोमेट्री, चुंबकीय चिमटी और कण-ट्रैकिंग माइक्रोरियोलॉजी, कोशिकाओं 3,4,5 में कणों की शुरूआत के कारण सेल क्षति का कारण बनती हैं। परमाणु बल माइक्रोस्कोप (एएफएम), माइक्रोपिपेट आकांक्षा, सूक्ष्म कसना और समानांतर-प्लेट तकनीक जैसे कोशिकाओं के संपर्क से मापने वाले तरीके भी सेल क्षति के लिए प्रवण होते हैं और थ्रूपुट 6,7,8 को बढ़ाना मुश्किल होता है। इसके अलावा, आयनीकरण विकिरण कोशिकाओं को समतल करेगा और उनके आसंजन को बढ़ाएगा9; इसलिए निलंबन में पूरे सेल यांत्रिकी को मापना आवश्यक है।

उपरोक्त चुनौतियों के जवाब में, ध्वनिक द्रव्य विधि 10,11,12,13,14 पर आधारित एक सेल यांत्रिकी माप प्रणाली विकसित की गई है। चैनल की चौड़ाई ध्वनिक आधा तरंग दैर्ध्य से मेल खाती है, इस प्रकार माइक्रोचैनल की मध्य रेखा पर एक स्थायी तरंग नोड बनाती है। ध्वनिक विकिरण बल की कार्रवाई के तहत, कोशिकाएं या मानक मोती ध्वनिक दबाव नोड में जा सकते हैं। चूंकि मानक मोतियों (आकार, घनत्व और संपीड़न) के भौतिक गुणज्ञात हैं, ध्वनिक ऊर्जा घनत्व निर्धारित किया जा सकता है। फिर, ध्वनिक क्षेत्र में कोशिकाओं के गति प्रक्षेपवक्र को रिकॉर्ड करके सेल संपीड़ितता प्राप्त की जा सकती है। निलंबन अवस्था में कोशिकाओं के गैर-विनाशकारी उच्च-थ्रूपुट माप को प्राप्त किया जा सकता है। यह पेपर माइक्रोफ्लुइडिक चिप के डिजाइन, सिस्टम की स्थापना और माप चरणों का परिचय देगा। विधि की सटीकता को सत्यापित करने के लिए विभिन्न प्रकार की ट्यूमर कोशिकाओं का मापन किया गया है। इस पद्धति के अनुप्रयोग दायरे को पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक की अनुनाद आवृत्ति और माइक्रोचैनल की चौड़ाई को समायोजित करके उपकोशिकीय संरचनाओं (जैसे नाभिक) तक बढ़ाया गया था। इसके अलावा, विभिन्न खुराक के साथ दवा-प्रेरित ईएमटी या एक्स-रे विकिरण के बाद सेल संपीड़न में परिवर्तन की जांच की गई थी। परिणाम जैव रासायनिक परिवर्तनों और सेलुलर यांत्रिक गुणों के बीच सहसंबंध का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में इस पद्धति की व्यापक प्रयोज्यता को प्रदर्शित करते हैं।

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Protocol

1. ध्वनिक माइक्रोडिवाइस का निर्माण और असेंबली

  1. माइक्रोफ्लुइडिक चिप का निर्माण।
    1. चित्रा 1 में दिखाए गए अनुसार केवल एक इनलेट और आउटलेट के साथ एक एकल-चैनल चिप डिज़ाइन करें। कोशिकाओं को मापने के लिए, माइक्रोचैनल के आयताकार क्रॉस-सेक्शन को 740 μm चौड़ा और 100 μm गहरा रखें। सेल नाभिक को मापने के लिए, माइक्रोचैनल की चौड़ाई और गहराई को क्रमशः 250 μm और 100 μm में बदलें।
    2. प्रतिक्रियाशील आयन नक़्क़ाशी के माध्यम से सिलिकॉन वेफर पर माइक्रोचैनल तैयार करें। एनोडिक बॉन्डिंग15 द्वारा पारदर्शी गर्मी प्रतिरोधी ग्लास के टुकड़े के साथ माइक्रोचैनल के शीर्ष को सील करें। 10 मिनट के लिए एक अल्ट्रासोनिक क्लीनर के साथ चिप्स धो लें। बाद में उपयोग के लिए उन्हें 50 डिग्री सेल्सियस पर सुखाने ओवन में सुखाएं।
  2. पॉलीडिमिथाइलसिलोक्सेन (पीडीएमएस) ब्लॉक बनाएं।
    1. 100 मिमी (व्यास में) ग्लास डिश में 30 मिलीलीटर प्री-पॉलिमर जोड़ें। एक सिरिंज के साथ पूर्व बहुलक के लिए इलाज एजेंट के 3 मिलीलीटर जोड़ें।
      नोट: इलाज एजेंट और पूर्व बहुलक की मात्रा अनुपात 1: 10 है।
    2. लगभग 10 मिनट के लिए एक ग्लास रॉड के साथ पीडीएमएस प्री-पॉलिमर और इलाज एजेंट को सख्ती से मिलाएं। समाधान में छोटे और समान रूप से अलग हवा के बुलबुले की तलाश करें, जो इंगित करता है कि पीडीएमएस प्री-पॉलिमर और इलाज एजेंट अच्छी तरह से मिश्रित हैं।
    3. ग्लास डिश को वैक्यूम डिसिकेटर में रखें और 15-25 एस के लिए खाली करें। इस प्रक्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि मिश्रण में हवा के बुलबुले न हों।
    4. मिश्रण को ठीक करने की अनुमति देने के लिए 1 घंटे के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर एक सुखाने ओवन सेट में ग्लास डिश रखें। इनक्यूबेशन के बाद, पीडीएमएस को लगभग 1.2 सेमी लंबा और 1 सेमी चौड़ा उपयुक्त आकार के ब्लॉक में काटने के लिए एक स्केलपेल का उपयोग करें।
      नोट: पीडीएमएस ब्लॉक की लंबाई चिप की चौड़ाई के अनुरूप है, और चौड़ाई को यह सुनिश्चित करने के लिए चुना जाता है कि चिप पर दो पीडीएमएस ब्लॉक का पालन करते समय पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक के लिए बीच में पर्याप्त जगह है।
  3. पीडीएमएस ब्लॉक को चिप से बांधें।
    1. 1 मिमी व्यास खोखली सुई के साथ इनलेट और आउटलेट बंदरगाहों के लिए पीडीएमएस ब्लॉक में पंच छेद। 1 मिनट के लिए प्लाज्मा क्लीनर में पीडीएमएस ब्लॉक और चिप (बैक साइड अप) रखें।
    2. चिप इनलेट और आउटलेट के साथ पीडीएमएस ब्लॉक पर छेद संरेखित करें। धीरे-धीरे पीडीएमएस ब्लॉक को 15 एस के लिए चिप पर दबाएं। इससे पीडीएमएस ब्लॉक और चिप की सतह के बीच संबंध होना चाहिए।
  4. पॉलीटेट्राफ्लोरोएथिलीन (पीटीएफई) कैथेटर को चिप (चित्रा 2 बी) से कनेक्ट करें।
    1. 0.8 मिमी के आंतरिक व्यास और 10 सेमी की लंबाई के साथ पीटीएफई कैथेटर के दो टुकड़े काटें। 0.7 मिमी के आंतरिक व्यास और 1.5 सेमी की लंबाई के साथ एक एल आकार में 90 ° तक स्टेनलेस स्टील की सुई को मोड़ें। इसे कैथेटर के एक छोर से कनेक्ट करें। सुइयों के साथ ऐसे दो कैथेटर तैयार करें।
    2. पीडीएमएस ब्लॉक के छेद में स्टेनलेस स्टील सुइयों डालें। इनलेट के लिए, एक सिरिंज के लिए एक कनेक्टर के रूप में कैथेटर के दूसरे छोर पर एक 19 जी वितरण सुई कनेक्ट करें।
    3. उपरोक्त चरणों को पूरा करने के बाद, समग्र चैनल की जकड़न का परीक्षण करने के लिए विआयनीकृत पानी इंजेक्ट करें। पानी के लिए अभेद्य का मतलब एक अच्छी मुहर है।
  5. पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक असेंबली (चित्रा 2 सी)
    1. 5 मिमी की चौड़ाई के साथ चार स्ट्रिप्स में 2 सेमी के व्यास के साथ पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक शीट को काटने के लिए एक हीरे के तार कटर का उपयोग करें।
    2. सुनिश्चित करें कि पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक की गुंजयमान आवृत्ति चिप माइक्रोचैनल की चौड़ाई से मेल खाती है। 740 μm और 250 μm चौड़े माइक्रोचैनल के लिए, क्रमशः 1 मेगाहर्ट्ज और 3 मेगाहर्ट्ज की अनुनाद आवृत्तियों के साथ पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक का उपयोग करें।
    3. एक छोर पर पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक के दोनों किनारों पर वेल्ड तार।
    4. साइनोएक्रिलेट गोंद के साथ चिप के पीछे के बीच में पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक को गोंद करें।
    5. गोंद को समान रूप से फैलाने के लिए, पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक पर गोंद की एक बूंद रखें, गोंद को टूथपिक के साथ चिकना करें और अतिरिक्त गोंद को हटा दें। फिर, जल्दी से इसे चिप पर दबाएं और लगभग 1 मिनट तक दबाना जारी रखें। सुनिश्चित करें कि पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक और चिप दृढ़ता से बंधे हुए हैं और समान रूप से संपर्क किए गए हैं।
  6. माइक्रोडिवाइस माउंट (चित्रा 2 डी)।
    1. पीडीएमएस का एक टुकड़ा (लगभग 1.5 सेमी लंबा और 1 सेमी चौड़ा) माइक्रोडिवाइस के आधार के रूप में काटें। डबल-पक्षीय टेप का उपयोग करके, आधार के एक तरफ इनलेट और आउटलेट पीडीएमएस ब्लॉक में चिपकाएं, और दूसरी तरफ एक पारदर्शी ग्लास स्लाइड पर। चिप को एक फोकल प्लेन में रखने के लिए माइक्रोस्कोप चरण में पूरे माइक्रोडिवाइस को ठीक करें।

2. नमूना तैयारी

  1. पॉलीस्टाइनिन मानक कण समाधान की तैयारी।
    1. पॉलीस्टाइनिन कण (व्यास में 6 μm) समाधान (2.1 x 108 कण / एमएल) के 0.05 मिलीलीटर फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के 10 मिलीलीटर जोड़ें और अच्छी तरह से मिलाएं।
      नोट: ध्वनिक ऊर्जा घनत्व के परिवर्तन के कारण माप त्रुटि को कम करने के लिए, पॉलीस्टाइनिन कण समाधान अंशांकन के रूप में प्रत्येक प्रयोग में नमूना समाधान के साथ मिलाया गया था।
  2. सेल निलंबन की तैयारी।
    1. पीबीएस के साथ 90% संगम (~ 5 x 10 5 कोशिकाओं) पर अनुयायीकोशिकाओं (जैसे, एमसीएफ 7, एमडीए-एमबी -231, एचसीटी 116) को धो लें। कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस) पर 1-2 मिनट के लिए 500 μL 0.25% ट्रिप्सिन (1x) जोड़ें। ट्रिप्सिन निकालें, 1 एमएल पूर्ण माध्यम जोड़ें और पाइपिंग द्वारा एक सेल निलंबन बनाएं।
    2. 5 मिनट के लिए 100 एक्स जी पर सेल निलंबन अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला निकालें और सेल निलंबन प्राप्त करने के लिए पीबीएस के 0.5-1 एमएल में पुन: निलंबित करें। कोशिकाओं को हेमोसाइटोमीटर के साथ गिना जाता था और एकाग्रता लगभग 3-5 x 105 कोशिकाओं /
  3. कोशिका नाभिक निलंबन की तैयारी
    1. चरण 2.2 को पूरा करें। फिर, सतह पर तैरनेवाला निकालें और साइटोप्लाज्मिक प्रोटीन निष्कर्षण अभिकर्मक ए (1% पीएमएसएफ के साथ पूरक) प्रति 20 μL सेल गोली (लगभग 5 मिलियन कोशिकाओं) के 200 μL जोड़ें और अच्छी तरह से मिलाएं।
    2. 5 एस के लिए 220 एक्स जी पर उपरोक्त मिश्रण भंवर, और फिर 10 मिनट के लिए बर्फ स्नान पर रखें। इनक्यूबेशन के बाद, समाधान में साइटोप्लाज्मिक प्रोटीन निष्कर्षण अभिकर्मक बी के 10 μL जोड़ें।
    3. 5 एस के लिए 220 एक्स जी पर भंवर। 1 मिनट के लिए बर्फ स्नान पर रखें और 5 एस के लिए 220 एक्स जी पर फिर से भंवर रखें। फिर, अंत में 4 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए 1,000 एक्स जी पर अपकेंद्रित्र।
      नोट: साइटोप्लाज्मिक प्रोटीन निष्कर्षण अभिकर्मकों ए और बी की मात्रा अनुपात 20: 1 है।
    4. सतह पर तैरनेवाला निकालें और पीबीएस के 1 मिलीलीटर में गोली को फिर से निलंबित करें। फिर, 4 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 1,000 एक्स जी पर अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला निकालें और सेल नाभिक निलंबन के रूप में पीबीएस के 100 μL में पुन: निलंबित।
    5. उपरोक्त सेल नाभिक निलंबन में ट्रिपैन ब्लू जोड़ें और 4 मिनट के लिए कमरे के तापमान (25 डिग्री सेल्सियस) पर दाग दें। नाभिक निलंबन के लिए ट्रिपैन नीले समाधान का आयतन अनुपात 1: 1 है। एक 10x उद्देश्य के साथ उल्टे माइक्रोस्कोप के तहत नाभिक की संख्या की गणना करें।
      नोट: माइक्रोस्कोप के तहत सेल नाभिक को स्पष्ट रूप से पहचानने के लिए, ट्रिपैन ब्लू धुंधला आवश्यक है। ट्रिपैन ब्लू समाधान प्रभावी धुंधला के लिए उपयोग करने से पहले 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में होना चाहिए।
    6. एमएल की एकाग्रता के लिए पीबीएस बफर के साथ उपरोक्तसेल नाभिक निलंबन को पतला करें। एक 70 μm छलनी के माध्यम से सेल नाभिक निलंबन फ़िल्टर करें।

3. कोशिका और नाभिक की संपीड़ितता को मापना

  1. माप प्रणाली सेट करें (चित्रा 3)
    1. माइक्रोस्कोप के प्रकाश स्रोत को चालू करें और कैमरा सॉफ़्टवेयर खोलें। माइक्रोचैनल की मध्य स्थिति, यानी, पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक की स्थिति को खोजने के लिए 4x उद्देश्य का उपयोग करें।
    2. तारों को कनेक्ट करें और उन्हें क्रमशः पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक पर सिग्नल जनरेटर आउटपुट के सकारात्मक और नकारात्मक टर्मिनलों से वेल्ड करें।
    3. सिरिंज को माइक्रोइंजेक्शन पंप पर रखें और इसे इनलेट कैथेटर से कनेक्ट करें। माइक्रोचैनल से बहने वाले तरल पदार्थ को पकड़ने के लिए आउटलेट कैथेटर के अंत में एक छोटा कंटेनर रखें।
  2. माप पैरामीटर निर्धारित करें
    1. सिरिंज के साथ पॉलीस्टाइनिन कण समाधान की आकांक्षा करें और इसे चिप माइक्रोचैनल में इंजेक्ट करें। सटीक माप सुनिश्चित करने के लिए चिप माइक्रोचैनल में हवा के बुलबुले से बचें। सुनिश्चित करें कि चिप माइक्रोचैनल में कणों को समान रूप से वितरित किया जाता है।
      नोट: माप प्रवाह या सिरिंज पंप के बिना आयोजित किया जा सकता है। यदि आवश्यक हो, तो माइक्रोइंजेक्शन पंप की प्रवाह दर को उचित मूल्य पर सेट किया जाना चाहिए। यहां, प्रवाह दर की सीमा 0-20 μL / घंटा है।
    2. सिग्नल जनरेटर के आउटपुट को 1 मेगाहर्ट्ज (सेल न्यूक्लियस माप के लिए 3 मेगाहर्ट्ज) और 10 वी के पीक-टू-पीक वोल्टेज (वीपीपी) की आवृत्ति के साथ साइन सिग्नल पर सेट करें।
    3. सिग्नल की आवृत्ति को ठीक करें जब तक कि यह नहीं देखा जाता है कि कण माइक्रोचैनल की मध्य रेखा की ओर बढ़ते हैं और मिडलाइन (चित्रा 4) तक पहुंचने के बाद मिडलाइन के साथ आगे की गति में रहते हैं।
      नोट: मिडलाइन की ओर बढ़ने वाले कणों की गति वोल्टेज आयाम द्वारा निर्धारित की जाती है, जिसे 5 वीपीपी और 20 वीपीपी के बीच समायोजित किया जा सकता है।
  3. कोशिकाओं और नाभिक को मापें
    1. 1: 1 के अनुपात में मानक कण समाधान के साथ 1 एमएल सेल या नाभिक निलंबन मिलाएं और इसे सिरिंज के साथ माइक्रोचैनल में इंजेक्ट करें।
    2. सीसीडी कैमरे के साथ रिकॉर्डिंग शुरू करें जब कोशिकाएं या नाभिक दृश्य के क्षेत्र में प्रवेश करते हैं। फिर, सिग्नल जनरेटर चालू करें। कोशिकाओं या नाभिक के मध्य रेखा तक पहुंचने पर रिकॉर्डिंग बंद करें।
    3. बाद में उपयोग के लिए अनुक्रम में विआयनीकृत पानी, 75% अल्कोहल और विआयनीकृत पानी के साथ माइक्रोचैनल कुल्ला।

4. डाटा प्रोसेसिंग

  1. कण या सेल प्रक्षेपवक्र मानचित्र।
    1. कैप्चर किए गए वीडियो को इमेजजे सॉफ़्टवेयर में आयात करें: फ़ाइल > खोलें> फ़ोल्डर का चयन करें। ब्याज की एक सेल और उसके आसन्न कण (चित्रा 5) लेने के लिए इमेजजे सॉफ्टवेयर के टूलबार में दीर्घवृत्त आकार पर क्लिक करें।
    2. जैसा कि चित्रा 5 में दिखाया गया है, विश्लेषण के रूप में इमेजजे सॉफ्टवेयर में प्रीसेट माप पैरामीटर → सेट माप →क्षेत्र, केंद्रक, प्रदर्शन लेबल।
    3. फ्रेम लेना जहां लक्ष्य सेल या कण प्रारंभ फ्रेम के रूप में अनुदैर्ध्य विस्थापन से गुजरता है; प्रत्येक फ्रेम में सेल या कण की पिक्सेल स्थिति और आकार रिकॉर्ड करें जब तक कि यह माइक्रोचैनल की मध्य रेखा तक न पहुंच जाए। स्प्रेडशीट फ़ाइल के रूप में डेटा निर्यात करें और ब्याज की सभी कोशिकाओं के लिए प्रक्षेपवक्र प्राप्त होने तक चरण को दोहराएं।
  2. परिवर्तन और सुधार का समन्वय करें।
    1. (0, वाई 1), (0, वाई 2), (एक्स 3, वाई 3), (एक्स 4, वाई 4) के रूप में देखने के इस क्षेत्र में माइक्रोचैनल के चार कोनों के पिक्सेल निर्देशांक रिकॉर्ड करें। यहाँ x3 = x4।
    2. प्रत्येक माप बिंदु (xi, yi) के लिए, निम्नलिखित सूत्रों का उपयोग करके रोटेशन सुधार के बाद नए समन्वय (xi', yi') की गणना करें:
      Equation 1
      Equation 2
      Equation 3
    3. पिक्सेल निर्देशांक को वास्तविक आकार निर्देशांक में कनवर्ट करें. वास्तविक निर्देशांक अनुपात से पिक्सेल निर्देशांक गुणा करके प्राप्त किया जा सकता है। अनुपात माइक्रोचैनल की पिक्सेल चौड़ाई (एच) से विभाजित माइक्रोचैनल की वास्तविक चौड़ाई थी।
    4. अंतिम गति प्रक्षेपवक्र डेटा के लिए चरण 4.1 में प्राप्त कोशिकाओं और कणों के पिक्सेल निर्देशांक को बदलें और सही करें। सभी निर्देशांक निचले-बाएं कोने के निर्देशांक को घटाते हैं, अर्थात्, (0, वाई 2)। वीडियो की फ्रेम दर 40 फ्रेम प्रति सेकंड है, इसलिए कण आंदोलन के समय को प्राप्त करने के लिए प्रत्येक समन्वय के अनुरूप फ्रेम की संख्या को 0.025 एस से गुणा करें, जिससे समय के साथ वाई दिशा में स्थिति का परिवर्तन प्राप्त हो सके।
  3. ध्वनिक ऊर्जा घनत्व (चित्रा 6 ए, बी) की गणना करें।
    1. वाई दिशा में कोशिका या कण की गति ध्वनिक बल एफएसी और हाइड्रोडायनामिक बल एफडी द्वारा संचालित होती है। निम्नलिखित सूत्रों का उपयोग करके गति प्रक्षेपवक्र की गणना करें:
      Equation 4(1)
      Equation 5(2)
      Equation 6(3)
      जहां आर और डी कोशिका या कण की त्रिज्या और व्यास हैं, ρ और β घनत्व और संपीड़न हैं, ν वेग वेक्टर है। सबस्क्रिप्ट सी और एफ क्रमशः सेल और तरल पदार्थ को दर्शाते हैं। डी निकटतम ध्वनिक दबाव नोड से दूरी है, μ द्रव की गतिशील चिपचिपाहट है, क तरंग संख्या है, और ई ध्वनिक ऊर्जा घनत्व है।
      नोट: एमसीएफ 7, एचसीटी 116, ए 54 9 और सेल नाभिक का घनत्व क्रमशः 1068 किलोग्राम / मीटर3, 1077 किलोग्राम / मीटर3, 1073 किलोग्राम / मीटर3, और 1155 किलोग्राम / मीटर3 था, क्रमशः 12,16,17।
    2. चरण 4.3.1 में वर्णित सूत्रों के अनुसार, परिमित अंतर विधि के साथ ध्वनिक क्षेत्र के तहत मानक कण प्रक्षेपवक्र के लिए संख्यात्मक समाधान प्राप्त करने के लिए मैटलैब सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें।
    3. पूर्व निर्धारित ध्वनिक क्षेत्र सीमा के भीतर, ध्वनिक ऊर्जा घनत्व को बदलें और मानक कण के लिए संख्यात्मक समाधान (चरण 4.3.2 में प्राप्त) और मापा गति प्रक्षेपवक्र (चरण 4.2 में प्राप्त) फिट करें। फिटिंग मतलब वर्ग त्रुटि के अनुसार सबसे अच्छा फिटिंग परिणाम का चयन करें। यहां प्राप्त ध्वनिक ऊर्जा घनत्व का उपयोग सेल संपीड़न की बाद की गणना के लिए एक पैरामीटर के रूप में किया जाता है।
  4. सेल संपीड़न (चित्रा 6 सी, डी) की गणना करें।
    1. चरण 4.3.3 में प्राप्त मूल्य के लिए ध्वनिक ऊर्जा घनत्व सेट करें।
    2. चरण 4.3.1 में वर्णित सूत्रों के अनुसार, परिमित अंतर विधि के साथ ध्वनिक क्षेत्र के तहत सेल प्रक्षेपवक्र के लिए संख्यात्मक समाधान प्राप्त करने के लिए मैटलैब सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें।
    3. चरण 4.3.3 के समान, पूर्व निर्धारित संपीड़न सीमा के भीतर, संपीड़ितता को बदलें और संख्यात्मक समाधान (चरण 4.4.2 में प्राप्त) और सेल के लिए मापा गति प्रक्षेपवक्र (चरण 4.2 में प्राप्त) फिट करें। मापा सेल संपीड़ितता के रूप में सबसे अच्छा फिटिंग परिणाम के लिए इसी संपीड़ितता गुणांक का उपयोग करें।

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Representative Results

यहां, काम ने ध्वनिक माइक्रोडिवाइस के आधार पर एक तेज़ और गैर-विनाशकारी सेल संपीड़ितता मापने की प्रणाली के निर्माण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया और विभिन्न स्थितियों के तहत सेल और नाभिक को मापने के लिए इसके फायदे का प्रदर्शन किया। चित्रा 1 माइक्रोफ्लुइडिक चैनल के योजनाबद्ध को दर्शाता है। ध्वनिक माइक्रोडिवाइस के घटकों और असेंबली को चित्र 2 में दिखाया गया है। चित्रा 3 माप प्रणाली के सेटअप से पता चलता है। ध्वनिक क्षेत्र बल की कार्रवाई के तहत, कोशिकाएं और कण माइक्रोचैनल की मध्य रेखा की ओर बढ़ेंगे, जैसा कि चित्रा 4 ए में दिखाया गया है। कोशिकाओं या कणों के आकार और स्थिति का मापन चित्रा 5 में दिखाया गया है। फिटिंग द्वारा ऊर्जा घनत्व और सेल संपीड़न की गणना चित्रा 6 में दिखाया गया है। सेलुलर ऑर्गेनेल के लिए इस उपकरण के आवेदन दायरे का विस्तार करने के लिए, विशेष रूप से नाभिक, उच्च शुद्धता और बरकरार नाभिक कोशिकाओं (चित्रा 7 ए) से अलग किए गए थे। पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक की अनुनाद आवृत्ति और तदनुसार माइक्रोचैनल की चौड़ाई को समायोजित करके, नाभिक की गति प्रक्षेपवक्र प्राप्त की गई थी (चित्रा 4 बी) और नाभिक संपीड़न का माप (चित्रा 7 बी) प्राप्त किया गया था।

इस प्रणाली के आधार पर, विभिन्न प्रकार की कैंसर कोशिकाओं की संपीड़ितता को मापा गया और तुलना की गई (चित्रा 8 ए)। इसके अलावा, विभिन्न खुराक के साथ दवा-प्रेरित ईएमटी या एक्स-रे विकिरण के बाद सेल संपीड़ितता में परिवर्तन की जांच की गई (चित्रा 8 बी, सी)। ईएमटी प्रेरण के लिए, विकास कारक जैसे विकास कारक बीटा (टीजीएफβ), एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर (ईजीएफ), और बेसिक फाइब्रोब्लास्ट ग्रोथ फैक्टर (बीएफजीएफ) का उपयोग किया गया था। विकिरण के लिए, खुराक की दर 153 एमयू / मिनट थी, और उपयोग की जाने वाली खुराक 1, 2, 4 और 8 जीवाई थी। ये परिणाम जैव रासायनिक परिवर्तनों और सेलुलर यांत्रिक गुणों के बीच सहसंबंध का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में इस पद्धति की व्यापक प्रयोज्यता को प्रदर्शित करते हैं। सबसे महत्वपूर्ण बात, यह विधि एक गैर-विनाश माप थी। मापा कोशिकाओं को एक सेल संस्कृति पकवान में एकत्र और वरीयता दी गई थी, और यह पाया गया कि संस्कृति के 48 घंटे के बाद अनुपचारित समूह की तुलना में सेल प्रसार और व्यवहार्यता में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था, जैसा कि चित्रा 9 में दिखाया गया है, यह दर्शाता है कि माप का सेल प्रसार और अस्तित्व पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है।

Figure 1
चित्रा 1: चिप माइक्रोचैनल का योजनाबद्ध आरेख। यह छवि एक एकल इनलेट और आउटलेट के साथ चिप माइक्रोचैनल की संरचना और आयाम दिखाती है। इकाई मिमी है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: ध्वनिक माइक्रोडिवाइस के लिए असेंबली फोटो( ए) चिप के फ्रंट और बैक फोटो। (बी) यह छवि संलग्न 19 जी वितरण सुई और स्टेनलेस स्टील सुई के साथ इनलेट पीटीएफई कैथेटर दिखाती है। (सी) यह छवि वेल्डेड तारों के साथ पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक दिखाती है। (डी) यह छवि फिक्सिंग के लिए आधार के साथ ध्वनिक माइक्रोडिवाइस की असेंबली दिखाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: सेल संपीड़ितता मापने प्रणाली का सेटअप। यह छवि सिग्नल जनरेटर, सिरिंज पंपर, ध्वनिक माइक्रोडिवाइस, माइक्रोस्कोप और सीसीडी कैमरा से युक्त मापप्रणाली के सेटअप को दर्शाती है। इस आंकड़े को10 से संशोधित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: कोशिकाओं और नाभिक की गति। यह आंकड़ा ध्वनिक क्षेत्र बल की कार्रवाई के तहत माइक्रोचैनल की मध्य रेखा पर कोशिकाओं (ए) और सेल नाभिक (बी) की गति को दर्शाता है। स्केल बार = 250 μm. कृपया इस आकृति का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: इमेजजे सॉफ्टवेयर का उपयोग करके सेल या कण के आकार और स्थिति का मापन। यह आंकड़ा इमेजजे सॉफ्टवेयर में क्षेत्र और केंद्रक जैसे मापदंडों को प्राप्त करने के लिए बटन क्लिक दिखाता है। माइक्रोचैनल के चार कोनों के पिक्सेल निर्देशांक (0, वाई 1), (0, वाई 2), (एक्स 3, वाई 3), (एक्स 4, वाई 4) के रूप में दर्ज किए गए थे। पिक्सेल चौड़ाई को एच के रूप में दर्शाया गया था कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्रा 6: फिटिंग द्वारा ऊर्जा घनत्व और सेल संपीड़न की गणना। (ए) विभिन्न ऊर्जा घनत्वों पर वर्ग त्रुटि (एलएस) मूल्यों का मतलब है। ध्वनिक ऊर्जा घनत्व सर्वोत्तम फिटिंग परिणाम से प्राप्त किया गया था। ऊर्जा घनत्व की इकाई J/m3 है। (बी) यह आंकड़ा संख्यात्मक समाधान की फिटिंग और कण के लिए मापा गति प्रक्षेपवक्र को दर्शाता है। (सी) विभिन्न सेल संपीड़न पर माध्य वर्ग त्रुटि (एलएस) मान। सेल संपीड़ितता सबसे अच्छा फिटिंग परिणाम से प्राप्त किया गया था। (डी) यह आंकड़ा संख्यात्मक समाधान की फिटिंग और सेल के लिए मापा गति प्रक्षेपवक्र को दर्शाता है। सेल संपीड़न की इकाई 10-10 पीए -1 है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 7
चित्रा 7: नाभिक निष्कर्षण और संपीड़ितता माप( ए) यह छवि 40x उद्देश्य के साथ देखे गए ए 549 कोशिकाओं से निकाले गए सेल नाभिक को दिखाती है। स्केल बार = 20 μm. (B) यह छवि A549 कोशिकाओं (N = 38) और उनके नाभिक (N = 45) की मापा संपीड़ितता तुलना दिखाती है। सेल संपीड़न की इकाई 10-10 पीए -1 है। बॉक्स की लंबाई मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करती है। महत्व का आकलन करने के लिए छात्र के टी-टेस्ट और ची-स्क्वायर विश्लेषण का उपयोग किया गया था। ** पी 0.01 <। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 8
चित्रा 8: दवा-प्रेरित ईएमटी या एक्स-रे विकिरण के बाद विभिन्न प्रकार की कैंसर कोशिकाओं और कोशिकाओं की संपीड़ितता। (ए) विभिन्न प्रकार की कैंसर कोशिकाओं की कोशिका संपीड़नशीलता। एचसीटी 116 (एन = 36), ए 549 (एन = 68), और एमडीए-एमबी -231 (एन = 32) क्रमशः कोलोरेक्टल कार्सिनोमा, फेफड़े एडेनोकार्सिनोमा और स्तन एडेनोकार्सिनोमा की कोशिका रेखाएं थीं। (बी) ईएमटी के प्रेरण से पहले और बाद में एमसीएफ 7 और ए 54 9 की सेल संपीड़ितता। (सी) विभिन्न खुराक के साथ विकिरण के बाद 3 घंटे में मापा सेल संपीड़ितता। सेल संपीड़न की इकाई 10-10 पीए -1 है। बॉक्सप्लॉट की अंतिम पट्टियाँ क्रमशः 10% और 90% मूल्यों का प्रतिनिधित्व करती हैं। बॉक्स की लंबाई मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करती है। मध्य क्षैतिज रेखा माध्यिका मान का प्रतिनिधित्व करती है। एनएस का अर्थ है कोई सांख्यिकीय महत्व नहीं। महत्व का आकलन करने के लिए छात्र के टी-टेस्ट और ची-स्क्वायर विश्लेषण का उपयोग किया गया था। * पी < 0.05, ** पी < 0.01। इस आंकड़े का एक हिस्सा18,19 से संशोधित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 9
चित्रा 9: संपीड़ितता माप के बाद सेल प्रसार और व्यवहार्यता। यह आंकड़ा संपीड़ितता माप के बाद ए 549 सेल प्रसार (ए) और व्यवहार्यता (बी) दिखाता है। नियंत्रण समूह अनुपचारित कोशिकाएं हैं। परीक्षण समूह संपीड़ितता माप के बाद 48 घंटे के लिए उगाई जाने वाली कोशिकाएं हैं। प्रत्येक प्रयोग में कम से कम तीन प्रतिकृतियां होती हैं। सेल व्यवहार्यता के लिए, कम से कम 300 कोशिकाओं की गिनती की गई थी। महत्व का आकलन करने के लिए छात्र के टी-टेस्ट और ची-स्क्वायर विश्लेषण का उपयोग किया गया था। एनएस सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं इंगित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

आमतौर पर इस्तेमाल सेल यांत्रिकी माप विधियां एएफएम, माइक्रोपिपेट आकांक्षा, माइक्रोफ्लुइडिक्स विधियां, समानांतर-प्लेट तकनीक, ऑप्टिकल चिमटी, ऑप्टिकल स्ट्रेचर और ध्वनिक विधियांहैं। माइक्रोफ्लुइडिक्स विधियां तीन दृष्टिकोणों के साथ काम कर सकती हैं: सूक्ष्म कसना, विस्तारित प्रवाह और कतरनी प्रवाह। उनमें से, ऑप्टिकल स्ट्रेचर, ऑप्टिकल चिमटी, ध्वनिक तरीके, विस्तारक प्रवाह और कतरनी प्रवाह दृष्टिकोण गैर-संपर्क माप हैं। संपर्क माप के विपरीत, गैर-संपर्क माप प्रभावी रूप से संपर्क या स्थानीय विरूपण के कारण सेल क्षति समस्या से बच सकते हैं। ऑप्टिकल चिमटी माप पर्यावरण के प्रति बहुत संवेदनशील हैं21. ऑप्टिकल स्थितियों में गड़बड़ी माप परिणामों में महत्वपूर्ण अंतर पैदा कर सकती है, और माप के दौरान उच्च लेजर शक्ति भी सेल क्षति का कारण बन सकती है। इसके अलावा, ऑप्टिकल स्ट्रेचर और ऑप्टिकल चिमटी में आमतौर पर कम थ्रूपुट20,22 होता है। एक्सटेंशनल फ्लो और कतरनी प्रवाह जैसे माइक्रोफ्लुइडिक्स विधियां सीधे ट्यूमर कोशिकाओं के माइक्रोमैकेनिक्स को माप नहीं सकतीहैं 23. अन्य तरीकों की तुलना में, ध्वनिक विधियों में सेल यांत्रिकी के माप में गैर-विनाशकारी, उच्च-थ्रूपुट और व्यापक प्रयोज्यता के फायदे हैं।

इस पेपर में डिज़ाइन किए गए ध्वनिक माइक्रोडिवाइस पर आधारित माप विधि गैर-संपर्क ध्वनिक विकिरण बल का उपयोग करती है, और सबसे बड़ा लाभ यह है कि यह कोशिकाओं को नुकसान नहीं पहुंचाता है, जिसकी पुष्टि यहां दिखाए गए प्रयोगात्मक परिणामों (चित्रा 9) द्वारा की गई थी। इस विधि का एक और लाभ उच्च थ्रूपुट है, जिसे सेल एकाग्रता को बदलकर समायोजित किया जा सकता है। वर्तमान में, बाद के डेटा विश्लेषण की सटीकता सुनिश्चित करने के आधार पर लगभग 50-70 कोशिकाओं / मिनट की माप गति प्राप्त की जा सकती है। क्योंकि कोशिकाओं को निलंबन में मापा जाता है, गैर-अनुयायी कोशिकाओं का माप भी प्राप्त किया जा सकता है, जो इसके आवेदन के दायरे का विस्तार करता है। इसके अलावा, विकिरण के बाद सेल संपीड़ितता का माप इस पेपर में हासिल किया गया था, और सेल संपीड़ितता और विकिरण खुराक के बीच संबंध प्रकट किया गया था (चित्रा 8)। इसके अलावा, विभिन्न कठोरता के साथ कोशिकाओं या नाभिक की माप को पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक की अनुनाद आवृत्ति और माइक्रोचैनल की चौड़ाई को समायोजित करके भी अनुकूलित किया जा सकता है। जैसा कि चित्रा 7 में दिखाया गया है, नाभिक की संपीड़न क्षमता का माप प्राप्त किया गया था।

यहां, माइक्रोफ्लुइडिक चैनल की लंबाई और चौड़ाई के साथ केवल कोशिकाओं की गति पर विचार किया गया था। कोशिकाओं को निलंबन में माना जाता था क्योंकि कोशिकाओं का घनत्व तरल पदार्थ के करीब होता है। यदि नीचे के साथ सेल निपटान या घर्षण था, तो यह बाद के प्रक्षेपवक्र फिटिंग प्रक्रिया में पाया जाएगा। इस तरह के डेटा को खत्म कर दिया जाएगा। प्रस्तावित विधि को मान्य करने के लिए, विभिन्न व्यास (6 μm और 10 μm) के साथ दो प्रकार के पॉलीस्टाइनिन मोतियों का परीक्षण किया गया था। 6 μm व्यास वाले मोतियों को नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। 10 μm व्यास के साथ मोतियों की संपीड़ितता 2.37 ± 0.11 x 10-10 Pa-1 के रूप में प्राप्त की गई थी, जो एक अन्य शोध 15,24 में रिपोर्ट किए गए मूल्य (2.1-2.4 x 10-10 Pa-1) के अनुरूप थी।

इस पद्धति के आधार पर, कोशिकाओं और नाभिक की संपीड़ितता को मापा गया था। चूंकि नाभिक मैकेनोसेंसिंग और मैकेनोट्रांसडक्शन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, नाभिक के यांत्रिक गुणों का माप बेहतर ढंग से समझने में मदद कर सकता है कि वे बाहरी उत्तेजना का जवाब कैसे देते हैं जैसे कि आयनीकरण विकिरण-प्रेरित डीएनए क्षति (चित्रा 8)। इसके अलावा, प्रयोगों से पता चला है कि सेल संपीड़ितता ईएमटी प्रक्रिया (चित्रा 8) की निगरानी के लिए एक नए संकेतक के रूप में काम कर सकती है, जो कैंसर निदान में इसके आवेदन की संभावनाओं को दिखाती है। चूंकि ध्वनिक विकिरण बल सेल आकार, सेल घनत्व और संपीड़न से संबंधित है, इसलिए इस विधि का उपयोग सेल अलगाव के लिए भी किया जा सकता है जैसे कि परिसंचारी ट्यूमर कोशिकाओं (सीटीसी) या रक्त के नमूने से उनके समूहों को अलग करना। सीटीसी और उनके क्लस्टर मेटास्टैटिक ट्यूमर की शुरुआती पहचान और रेडियोथेरेपी प्रभावकारिता25,26 की निगरानी में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इसलिए, इस पद्धति में कैंसर की प्रारंभिक स्क्रीनिंग और प्रभावकारिता मूल्यांकन में महान नैदानिक अनुप्रयोग संभावनाएं हैं।

यह ध्यान देने योग्य है कि इस विधि के माप को प्रभावित करने वाला महत्वपूर्ण कारक माइक्रोचैनल की चौड़ाई के साथ गुंजयमान आवृत्ति का मिलान है, जिसके परिणामस्वरूप माइक्रोचैनल की मध्य रेखा पर एक स्थायी तरंग नोड की उपस्थिति होती है। इसी समय, पीजोइलेक्ट्रिक सिरेमिक के चिपकाने पर ध्यान दिया जाना चाहिए। इसके अलावा, कोशिकाओं या कणों के प्रक्षेपवक्र को सटीक रूप से पहचानने और ट्रैक करने और आसंजन के कारण सेल एकत्रीकरण की समस्या से बचने के लिए, थ्रूपुट बहुत अधिक नहीं होना चाहिए। अन्य मापदंडों (जैसे सेल आकार, सेल घनत्व, आदि) में परिवर्तन संपीड़ितता के माप को कैसे प्रभावित करते हैं, पिछले काम18 में अध्ययन किया गया है। इसके अलावा, सेल नाभिक को मापते समय, उनकी कोमलता के कारण, उन्हें माइक्रोचैनल की मध्य रेखा पर सुचारू रूप से स्थानांतरित करने के लिए एक बड़े ध्वनिक विकिरण ड्राइविंग बल की आवश्यकता होती है, इस प्रकार प्रक्षेपवक्र को सटीक रूप से कैप्चर करने के लिए एक तेज़ कैमरे की आवश्यकता होती है।

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Disclosures

लेखकों के पास कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हित या हितों के अन्य संघर्ष नहीं हैं।

Acknowledgments

इस अध्ययन को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 12075330 और U1932165) और गुआंग्डोंग प्रांत, चीन के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 2020A151515010270) द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.25% trypsin(1x) GIBCO 15050-065
502 glue Evo-bond cyanoacrylate glue
A549 ATCC CCL-185 lung adenocarcinoma
Cytonucleoprotein and cytoplasmic protein extraction kit Beyotime P0027 Contains cytoplasmic protein extraction reagents A and B
Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM)  corning 10-013-CVRC
Fetal Bovine Srum(FBS) AUSGENEX FBS500-S
HCT116 ATCC CCL247 colorectal carcinoma
Heat-resistant glass Pyrex
Leibovitz’s L-15 medium  GIBCO 11415-064
MCF-7 ATCC HTB-22  breast Adenocarcinoma
MDA-MB-231 ATCC HTB-26  breast Adenocarcinoma
Minimum Essential Medium (MEM) corning 10-010-CV
Penicillin-Streptomycin GIBCO 15140-122
Phosphate buffer corning 21-040-cvc
PMSF Beyotime ST506 100mM
Polybead Polystyrene Red Dyed Microsphere  polysciences 15714 The diameter of microshpere is 6.00µm
propidium iodide(PI) Sigma-Aldrich P4170
SYLGARD 184Silicone ELASTOMER Dow-Corning 1673921 Contains prepolymers and curing agents
Trypan Blue Beyotime C0011

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References

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कैंसर अनुसंधान अंक 185
ध्वनिक माइक्रोडिवाइस के आधार पर सेल और न्यूक्लियस की संपीड़न क्षमता का मापन
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Fu, Q., Zhang, Y., Huang, T., Liu,… More

Fu, Q., Zhang, Y., Huang, T., Liu, Y. Measurement of the Compressibility of Cell and Nucleus Based on Acoustofluidic Microdevice. J. Vis. Exp. (185), e64225, doi:10.3791/64225 (2022).

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