קצב סינון גלומרולרי (GFR) הוא הסמן האידיאלי להערכת תפקוד הכליות. עם זאת, שיטת המדידה הסטנדרטית באמצעות הזרקת אינולין עם ניתוח דם ושתן סדרתי אינה מעשית. מאמר זה מתאר שיטה מעשית למדידת GFR באופן טרנסדרמלי בחזירונים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מדידה טרנסדרמלית של קצב סינון גלומרולרי בחזירונים מאווררים מכנית
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מדידה טרנסדרמלית של קצב סינון גלומרולרי (GFR) שימשה להערכת תפקוד הכליות בבעלי חיים מודעים. טכניקה זו מבוססת היטב מכרסמים כדי ללמוד פגיעה חריפה בכליות ומחלת כליות כרונית. עם זאת, מדידת GFR באמצעות המערכת הטרנסדרמלית לא אומתה בחזירים, מין עם מערכת כליות דומה לבני אדם. לפיכך, חקרנו את ההשפעה של אלח דם על GFR טרנסדרמלי בחזירים ילודים מורדים ומאווררים מכנית. אלח דם פולימיקרוביאלי הושרה על ידי קשירת cecal ונקב (CLP). מערכת מדידת ה-GFR הטרנסדרמלית המורכבת מחיישן פלואורסצנטי ממוזער הוצמדה לעורו המגולח של החזיר כדי לקבוע את המרווח של סיניסטרין מצומד פלואורסצין-איזותיוציאנט (FITC), עוקב GFR מוזרק תוך ורידי. התוצאות שלנו מראות כי לאחר 12 שעות לאחר CLP, קריאטינין בסרום עלה עם ירידה ב- GFR. מחקר זה מדגים, לראשונה, את התועלת של גישת ה- GFR הטרנסדרמלית בקביעת תפקוד הכליות בחזירים מונשמים מכנית, ילודים.
מבוא
הערכה מעשית וכמותית של תפקוד הכליות היא מדידת קצב הסינון הגלומרולרי (GFR), המספרת עד כמה הכליות מסננות דם על סמך עקרון הסילוק1. שיטה מוקדמת יותר למדידת GFR כרוכה בהזרקה תוך ורידית של תרכובות אקסוגניות כגון אינולין או סיניסטרין, ביצוע מדידות סדרתיות של רמות פלזמה/שתן כדי לזהות את הסילוק שלהן 2,3. שיטה זו מסורבלת, ודורשת איסוף סדרתי של דגימות פלזמה ושתן4. חלופה היא מדידה של מוצרים מטבוליים אנדוגניים הסופיים כגון קריאטינין. עם זאת, זה גוזל זמן, ולפעמים, לא מדויק, כפי שהוא לא רק מסונן על ידי glomerulus אלא גם מופרש על ידי tubules 5,6
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הנהלים נכתבו על פי תקנים לאומיים לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של המרכז למדעי הבריאות של אוניברסיטת טנסי (UTHSC).
הערה: חזירונים בקבוצת הניסוי נתונים לקשירת צקאל ולנקב, בעוד שקבוצת הבושה עוברת רק פתיחת הבטן ללא קשירת צקאל או נקב. חזירונים בשתי הקבוצות נשמרים תחת הרדמה במשך 12 שעות לאחר ההליך כדי לאפשר מספיק זמן לאלח דם ופגיעה חריפה בכליות (AKI) כדי להתרחש בקבוצת הניסוי. מדידת GFR טרנסדרמלית תתרחש בשעה 8 שעות לאחר ההליך ובסך הכל 12 שעות.
1. אספקת חזרזיר ודיור
- זהה חוות חזירים מקומית שיכולה לספק חזירונים ילודים בגילאי 3-5 ימים. תזמן....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בחלק זה, אנו מציגים לראשונה, את הנתונים המייצגים מהשימוש ב- GFR טרנסדרמלי בחזירים ילודים. השתמשנו במודל קשירת צקאל ודיקור שהוכח בעבר כמפחית את תפקוד הכליות28. בהתאם לכך, שיערנו כי בחזירי CLP שלנו, צריכה להיות ירידה חריפה ב- GFR המתאים ל- AKI, ויש לזהות זאת במכשיר ה- GFR הטרנסדרמלי כזמן פינוי מוגבר (t1/2), ובכך לאמת את השימוש בו בחזירים. שבעה חזירונים זכרים נכללו, שלושה בושת וארבעה אלח דם. לשתי הקבוצות היו משקלים דומים (איור 3A). כצפוי28
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מאמר זה מתאר צעדים מעשיים לקביעת תפקוד הכליות בחזירים באמצעות צגי GFR טרנסדרמליים ממוזערים ו- FITC-sinistrin במודל של חזיר ילודים מונשם ומורדם. מאמרים קודמים קבעו פרוטוקולי GFR טרנסדרמליים ניסיוניים במכרסמים11,12,14, אך לא קיימים פרוטוקולים בחזירים.
לאחרונה, יש דחף לחקור מודלים חלופיים של בעלי חיים כדי לפתור מחלות בלתי פתירות ולהקל על הנטל של מחלות כליות בבני אדם. למרבה הצער, לרבים מהגישות הללו היו מג.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי מענקי המכונים הלאומיים לבריאות R01 DK120595 ו- R01 DK127625 שהוענקו לד"ר אדביי. תוכן מאמר זה הוא באחריות המחברים בלבד ואינו מייצג בהכרח את העמדות הרשמיות של המכונים הלאומיים לבריאות. תודה לד"ר דניאל שוק-קוש, מנהל האתר ב- MediBeacon GmbH, על עצתו.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אלפא - כלורלוז | סיגמא-אולדריץ' | C0128-25G | משמש לתחזוקת הרדמה |
| משי קלוע שחור 3-0 | התמחויות כירורגיות | SP117 | עניבת משי למתיחה וקשירה של כלי דם |
| מכונת צנטריפוגה AccuSpin 8C | Fischer Scientific | 75-008-821 | משמש לחילוץ פלזמה מדגימת דם מלא |
| צינור אנדוטרכיאלי 3.0 ללא אזיקים | 1109021995 רפואי פרוגרסיבי בינלאומי | מוחדר דרך טרכאוסטומיה | |
| FITC-Sinistrin 1.0 גרם | MediBeacon Inc. | FTCF S001 | אחסן בטמפרטורת החדר והגן מפני אור |
| GEM Premier 3000 מנתח גזי דם | מעבדת מכשור | 5700 | לניתוח גזי דם ליד המיטה |
| כרית חימום בגודל בינוני 20 אינץ' x 29 | ב-Adroit Medical Systems | V029 | מתחבר למשאבת טיפול בחום |
| HTP-משאבת טיפול בחום | Adroit Medical Systems | HTP | מאפשר לך להגדיר טמפרטורה לפי הצורך. |
| IDEXX Catalyst One | IDEXX Laboratories | 89-92525-00 | ניתוח קריאטינין פלזמה |
| קטטר לחץ דם פולשני 3.5Fr | Millar | SPR-524 | מוכנס לעורק הירך |
| סט ניהול IV עם ווסת זרימה | True Care | TCRTCBINF033G | משמש לחיבור שקית נוזלים IV לצנתר ורידים |
| קטמין | Covetrus | 68317 | משמש לאינדוקציה של הרדמה |
| תוכנת ניתוח MediBeacon גרסה 3.0 | MediBeacon Inc. | תוכנה | המשמשת לניתוח נתונים להשגת מחצית חיים של פינוי סיניסטרין ועקומה |
| Millex-GV מסנן מזרק יחידה 0.22 ומיקרו; m | Millipore Sigma | SLGVR33RS | מסנן מזרק להזרקת כלורלוז |
| מאוורר יילודים / תינוקות | Sechrist Millennium | 20409 | מחובר לאספקת אוויר כדי לספק אוורור דרך צינור אנדוטרכיאלי |
| פנוברביטל נתרן + פניטואין נתרן (Euthasol) | Covetrus | 72934 | משמש להמתת חסד |
| רינגר לקטט 500 מ"ל שקית | בקסטר | 2B2323Q | עירוי נוזלי תחזוקה |
| כפפות סטריליות | הנרי שיין | 104-5920 | בשימוש על ידי המפעיל במהלך הניתוח |
| שמלה סטרילית | Halyard Health | 95021 | בשימוש על ידי המפעיל במהלך הניתוח |
| מגבת סטרילית | Medline | 42131704 | משמש כוילון לשמירה על שדה סטרילי בעת הפעלת |
| תפר 3-0 מחט חיתוך הפוכה משי | Ethicon | NC1842168 | משמש לתפירת שכבות דופן הבטן |
| Transdermal Mini GFR Monitor | MediBeacon Inc. | TDM004 | סוללה ומחבר USB כלולים באריזה |
| תיקון דבק צג Transdermal | MediBeacon Inc. | PTC-SM001 | תיקון דבק צדדי כפול לבדיקת GFR |
| סרט טבור 1/8 אינץ' x 20 yds | פישר NC9303017 מדעי | לאבטחת צינור אנדוטרכיאלי | |
| קטטר ורידי בגודל PE/5 | מיקרו צינורות רפואיים | BB31695 | לקנולציה של וריד הירך |
| Xylazine | Covetrus | 61035 | משמש לאינדוקציה של הרדמה |
מקורות
- Pasala, S., Carmody, J. B. How to use... serum creatinine, cystatin C and GFR. Archives of Disease in Childhood Education and Practice Edition. 102 (1), 37-43 (2017).
- Smith, H. W. The Kidney: Structure and Function in Health and Disease. , Oxford Universit....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
