本方案描述了原子力显微镜与纳米级红外光谱技术的应用，用于评估光热型纳米级红外光谱在三维多聚合物样品表征中的性能。
本文内容
摘要
摘要
多相聚合物体系包含局部区域，其尺寸可从几十纳米到数微米不等。通常采用红外光谱法评估其组成，该方法可提供被测体积内各种材料的平均指纹信息。然而，该方法无法揭示材料中各相排列的具体细节。此外，两个聚合物相之间的界面区域（通常处于纳米尺度范围）也难以表征。光热纳米红外光谱技术利用原子力显微镜（AFM）的高灵敏探针，监测材料在红外光激发下的局部响应。尽管该技术适用于探测小尺度特征（例如在洁净金表面上的单个蛋白质），但对三维多组分材料的表征仍具有挑战性。这主要是因为受激光在样品上的聚焦情况以及聚合物组分热学性质的影响，发生光热膨胀的材料体积相对较大，远超过AFM针尖所探测的纳米尺度区域。本文以聚苯乙烯（PS）微球和聚乙烯醇（PVA）薄膜为例，评估光热纳米红外光谱在表面分析中的空间响应范围，并研究PS在PVA薄膜中不同位置对纳米红外成像结果的影响，同时获取相应的光谱数据。最后，针对含有嵌入式聚合物结构的复杂体系的表征需求，展望了光热纳米红外光谱技术未来的发展方向。
引言
原子力显微镜（AFM）已成为以纳米级分辨率成像和表征多种样品形貌的必备工具1,2,3。通过测量AFM悬臂因尖端与样品表面相互作用而产生的偏转，已发展出用于局部刚度测量和针尖-样品粘附力的纳米级功能成像方法4,5。对于软凝聚态物质和聚合物分析，探索局部区域纳米力学和纳米化学性质的AFM测量备受关注6,7,8。在纳米级红外（nanoIR）光谱技术出现之前，通常对AFM针尖进行化学修饰，以通过AFM力曲线判断不同区域的存在，并推断针尖-样品相互作用的本质。例如，该方法曾被用于揭示经环己烷处理的聚苯乙烯-嵌段-聚（丙烯酸叔丁酯）嵌段共聚物薄膜表面微区在低于50 nm尺度下的转变行为9。
将红外（IR）光与原子力显微镜（AFM）相结合，已对高分子科学领域产生了重大影响6。传统的红外光谱法是一种广泛用于研究聚合物材料化学结构的技术10,11，但由于待测区域尺寸远小于用于探测样品的红外光束尺寸，该方法无法提供关于各个相态及界面行为的信息。这一问题同样存在于红外显微光谱中，因其受限于光学衍射极限6。此类测量对红外光激发的整个区域内的信号进行平均；而探测区域内纳米尺度相态所产生的信号，要么在后期处理中呈现出需要解卷积的复杂谱图特征，要么因信号强度低于可检测水平而丢失。因此，开发具备纳米级空间分辨率和高红外灵敏度的工具，对于探索复杂介质中的纳米级化学特征至关重要。
为实现纳米红外（nanoIR）光谱技术，已开发出多种方案：最初采用金属原子力显微镜（AFM）探针作为纳米天线12,13，而近期则利用AFM悬臂检测样品在红外光照下产生的光热膨胀变化12,14,15。该方法使用脉冲式可调谐红外光源，将其调谐至被测材料的某一吸收峰，使样品吸收辐射并发生光热膨胀。此技术特别适用于有机物和聚合物材料。脉冲激发使AFM悬臂在与样品表面接触时能够检测到以振荡形式表现的信号。通过监测系统在频率谱中某一接触共振模式的振幅随光照波长的变化，即可获得AFM探针下方材料的nanoIR吸收光谱15。nanoIR成像与光谱的空间分辨率受到材料光热膨胀多种效应的限制。研究表明，采用接触模式AFM的光热nanoIR光谱技术可实现优于50 nm空间分辨率的材料振动吸收光谱测量14，近期工作已成功检测到α-突触核蛋白的单体与二聚体16,17。然而，针对不同构型下异质聚合物材料的nanoIR测量性能，尤其是有限尺寸吸光体嵌入多种聚合物薄膜内部的情况，其定量研究仍较为有限。
本文旨在构建一种具有已知尺寸嵌入特征的聚合物组装体，用于评估纳米红外（nanoIR）在表面分析过程中光热膨胀的灵敏度及空间分辨率。该实验方案涵盖了在硅基底上制备聚乙烯醇（PVA）聚合物薄膜，以及将三维聚苯乙烯（PS）微球放置于PVA薄膜表面或嵌入其中，从而形成模型体系。文中描述了纳米红外成像与光谱测量方法，用于评估同一PS微球位于PVA薄膜表面或下方时所产生的信号，并分析微球位置对纳米红外信号的影响。同时讨论了评估纳米红外图谱中微球空间占位范围的方法，并考虑了多个参数的影响。
方案
1. 制备聚乙烯醇（PVA）溶液
- 称取水和聚乙烯醇（PVA）聚合物颗粒（见材料表），按重量比配制10 mL、20% PVA的水溶液。
- 将水置于玻璃器皿中，用加热板加热至100 °C。
- 将PVA聚合物颗粒加入加热后的水中，放入磁力搅拌子。
- 将温度调低至80 °C，持续搅拌直至PVA完全溶解。
- 用盖子覆盖玻璃器皿顶部，防止污染。
- 待PVA完全溶解后，将20% PVA溶液转移至合适的储存容器中，室温保存。
2. 准备聚乙烯醇（PVA）包被的硅（Si）晶片
- 将硅（Si）晶圆（参见材料表）切割成约 10 × 10 mm2 的正方形。
- 使用异丙醇清洗 Si 基底，并使其自然干燥。
- 将清洁的 Si 晶圆放置在旋涂仪的卡盘上（参见材料表）。
- 在 Si 基底中心滴加约 10 µL 的 PVA 溶液，尽量避免产生气泡。
- 以每分钟 1,500 转（rpm）的速度旋涂 30 秒，在 Si 基底上形成均匀的 PVA 薄膜。
注意：指定的液体体积和旋涂参数可在基底表面形成一层厚度均匀的 PVA 膜，该厚度足以防止在旋涂完成后至下一步将 PS 微球转移至 PVA 表面期间薄膜过快干燥。
- 从旋涂仪上取下样品，并将其放入洁净的样品容器中，以防止在转移 PS 微球前受到污染。
3. 将聚苯乙烯微珠放置到PVA包被的表面
- 使用异丙醇清洁硅基底，然后使其干燥。
- 用移液器将1 µL悬浮于水中的聚苯乙烯（PS）微球滴加到基底中心位置。
- 将样品置于含有膨润土干燥剂的储存容器中，使水分自然蒸发。
注意：此步骤通过减少湿度暴露来保护样品。 - 将涂有聚乙烯醇（PVA）的基底（步骤2.4）和带有干燥PS微球的基底（步骤3.3）置于光学显微镜下观察。根据微球尺寸大小，可使用简易双目镜或需更高光学放大倍数进行观察。
- 使用超细镊子轻轻松动微球（参见材料表）。用细毛画笔收集少量松散的微球，并轻轻敲击画笔毛，使微球落入新鲜涂覆PVA的晶圆表面。多次扫动可使微球逐渐聚集在画笔毛中。轻敲画笔毛顶端，扰动PS微球粉末，使其释放到具有黏性的PVA表面。
注意：必须使用高质量且洁净的画笔，以避免纤维或污染物释放到PVA薄膜表面。此步骤操作需迅速，以防PVA完全干燥。 - 重复此步骤，直至通过光学显微镜检查确认单个PS微球已牢固附着于PVA表面。
- 将样品存放在洁净容器中，使其完全干燥。
注意：在进行后续分析之前，应确保样品充分冷却并完全干燥。可通过原子力显微镜（AFM）高度测量或表面轮廓仪测量评估连续PVA薄膜的厚度。
4. 原子力显微镜表征样品的加载
注意：所述方案基于 nanoIR2（见材料表）平台的标准操作程序，但应根据所用的原子力显微镜（AFM）型号进行相应调整。
- 使用金属原子力显微镜（AFM）载盘和粘性固定片，将聚乙烯醇（PVA）和聚苯乙烯（PS）微球样品固定在AFM载物台上，确保样品牢固地附着在样品支架上。
- 将nanoIR探针（例如FORTGG）安装到AFM探针支架上。
注意：AFM悬臂梁长225 µm，宽27 µm，厚2.7 µm，针尖半径小于10 nm。悬臂两侧均镀有45 nm厚的金膜，以限制其对样品上表面红外照射的响应（参见材料表）。进行nanoIR光谱测量时，建议使用此前储存在无聚二甲基硅氧烷（PDMS）环境中的悬臂。 - 通过调节激光对准旋钮（激光位置的x和y方向调节，以及探测器位置的垂直调节），将读出激光对准悬臂梁的自由端。
- 最大化探测器的SUM信号。
- 旋转偏转调节旋钮，调整探测器位置，使激光对准AFM读出系统的位置敏感探测器中心，对应垂直偏转信号约为~0 V。
- 点击AFM“探针”控制面板中的加载图标。
- 按照向导界面中的提示操作。使用调焦箭头确定nanoIR悬臂的焦平面。使用XY位移控制将悬臂置于屏幕中央（与白色十字对齐）。
- 接着，点击调焦箭头，找到样品表面的焦平面。
- 利用系统的光学视图和XY位移控制，将悬臂针尖定位至目标微球上方，然后点击下一步。
- 在“接近”界面中，将“standoff”设置为50 µm，然后点击仅接近。
- 启动接触程序，使针尖接近样品表面以进行成像。
5. 对多聚合物样品进行形貌与纳米红外成像
- 在标准“接触模式”下获取形貌图像。当设定好悬臂相对于聚苯乙烯微球的位置后，点击 AFM “Probe” 控制面板中的 engage 图标以启动逼近过程。本研究中全程采用 0.2 V 的偏转差作为 engage 设定点，对应的作用力约为 100 nN。
在 AFM “Scan” 控制面板中，将 扫描速率 设为 0.8 Hz，设定用于成像的 扫描尺寸（高度和宽度），以及 每行点数和每幅图像的行数（本实验中使用 512 × 512）。点击 Scan 以获取形貌图像。
注：通过测定悬臂与蓝宝石基底相互作用时获得的偏转-距离曲线的斜率，确定偏转灵敏度（单位为 nm/V），从而完成悬臂的校准18（补充图 1A）。悬臂刚度通过热调谐法19确定（补充图 1B），即对悬臂共振峰进行洛伦兹函数拟合。悬臂刚度（单位为 N/m）依据能量均分定理
计算得出，其中 KB 为玻尔兹曼常数，T 为温度（T = 295 K），P 为通过对热调谐数据的洛伦兹拟合积分得到的悬臂热涨落功率谱面积20。 - 进行 nanoIR 测量时，将 AFM 探针定位至从形貌图像中识别出的目标特征位置。
- 在 nanoIR 控制面板中选择 调谐叉 图标，以确定悬臂的接触共振频率。设定一个能激发材料发生光热膨胀的照射波数。设定激光脉冲频率的扫描范围，并设定 nanoIR 激光的占空比。在“Laser Pulse Tune Window”中选择 Acquire 。
- 通过将标记线（绿色垂直线）置于第二个接触共振峰的峰值处，选择探针-样品系统的第二阶接触共振模式用于 nanoIR 测量。
注：接触共振模式的选择可能因悬臂类型和样品不同而有所变化。 - 点击 Optimize ，以将红外激光焦点区域中心与悬臂针尖位置对齐。对准过程在选定的红外照射波数下进行，该波数对应所探测材料的吸收带。悬臂应位于激光光斑的中心（补充图 2）。
注：不同波数下的对准效果可能因激光器型号不同而有所差异。 - 采集红外激光照射的背景信号。该步骤包括在选定的脉冲频率下，测量红外量子级联激光器（QCL）在发射波长范围内的输出（补充图 3）。此步骤对 nanoIR 光谱的背景校正至关重要。
- 通过设定波数范围（本实验中 起始 和 终止 分别设为 1,530 cm-1 和 1,800 cm-1）、步长（2 cm-1）以及测量所用的 平均次数，采集 nanoIR 光谱。通过对测得的光热振幅除以衰减后的背景信号进行光谱背景校正，其中背景信号为第 5.2.4 步采集的背景乘以测量时选定的激光功率百分比。
- 进行 nanoIR 成像时，选择用于成像的 感兴趣区域 。
- 在“Laser Pulse Tune Window”中（通过点击 调谐叉 图标进入），启用 锁相环（PLL）自动调谐 。
- 在通用控制面板中调整最小和最大频率，使扫描范围以第二阶共振模式为中心。
- 在 PLL 控制面板中点击 zero 以将相位归零，然后在“Laser Pulse Tune window”中点击 OK 。
- 在 nanoIR 控制面板中，勾选 启用 IR 成像 复选框。
- 在“Imaging View”控制面板中，选择 高度 （成像视图 1）、振幅 2（成像视图 2）和 相位 2（成像视图 3），以获取样品的形貌和化学图像。将采集方向设为 Trace （或 Retrace）。通常需要进行 Line 线性拟合以观察正在采集的样品形貌图像。拟合捕捉模式应设为 无。
注：扫描偏好设置，如采集方向或所用色彩调色板，可根据需要进行调整。 - 在 AFM “Scan” 控制面板中，选择 Scan 图标。
- 为保存图像，在“Capture”控制面板中选择 立即 或 帧结束图标。
- 导出数据时，右键点击数据列表中的图像或光谱文件名，选择 导出 ，并选择要导出的文件格式。将文件保存至目标计算机文件夹中。
结果
将聚苯乙烯（PS，(C8H8)n）微球沉积在洁净的硅（Si）基底上（图1A）以及聚乙烯醇（PVA，(CH2CHOH)n）上（图1B、C）。由于微球在硅基底上的附着力较差，无法对该样品进行接触模式下的纳米红外（nanoIR）成像。因此，在nanoIR的光学视图下，将镀金的原子力显微镜（AFM）探针以接触模式置于PS微球顶部，施加的力约为100 nN（图2A）。将脉冲红外激光器设定为在1,730 cm-1处激发样品，因为PS和PVA在此波数下均预期有吸收。通过扫描激光脉冲频率，确定悬臂的接触共振频率，用于nanoIR光谱测量。在接触共振频率下脉冲激发时，监测悬臂的响应以确定振荡幅度（图2B）。随后，通过监测接触共振幅度随照射波数的变化，从1,530至1,800 cm-1、以2 cm-1为步长构建nanoIR光谱（图2C）。在此范围内（图3A，插图），光谱显示出两个红外吸收带，分别位于1,600 cm-1和1,730 cm-1，对应于PS中苯基的主要伸缩振动模式以及环伸缩振动的子集21。将nanoIR光谱与PS的远场傅里叶变换红外（FTIR）光谱进行比较，证实了1,600 cm-1处芳香振动模式的存在（图3A）。然而，注意到FTIR和nanoIR光谱中相对强度I1600/I1730存在显著差异，其值分别为2.9和0.9。这归因于nanoIR光谱的检测机制，该机制监测的是聚合物的光热膨胀而非像FTIR光谱那样监测其吸光度。对于PS而言，这意味着在1,730 cm-1处激发芳香子带时产生更强的光热膨胀。PVA的nanoIR光谱与FTIR光谱表现出更好的一致性，其主要吸收带位于约1,730 cm-1（图3B）。尽管在不含C=O基团的纯PVA中不应出现该吸收带，但先前的研究表明，该吸收带的存在可归因于PVA制备过程中残留的乙酸酯所引入的羰基官能团（水解率约为80%-90%）22。在本研究中，1,730 cm-1处存在吸收带适合用于评估PS与PVA同时吸收时的相互影响。
利用纳米红外光谱选择用于化学成像的照射波数，以表征沉积在聚乙烯醇（PVA）表面的聚苯乙烯（PS）微球（图4A-C）以及被PVA包覆的PS微球（图4D-F）。通过系统PLL接触共振频率追踪功能，确保每个像素点的振幅测量值对应于接触共振峰的最大振幅15（图2C）。在探针尖端分别与PVA和PS接触时测量悬臂梁的接触共振，以确定合适的PLL频率追踪范围。
首先在 1,600 cm-1 处获取了 NanoIR 图像，该波数对应于 PS 为主要吸收组分的情形（图 4Ai；Di）。尽管在两种情况下均对一个 5 µm 的 PS 微球进行了成像，但当探针直接与 PS 微球接触时，与探针接触覆盖在 PS 微球顶部的薄 PVA 涂层时相比，该波长下记录的光热膨胀振幅存在差异。当微球被 PVA 层覆盖时，在微球上方检测到的光热膨胀增幅显著更小，通过表面轮廓仪估算该 PVA 层厚度约为 ~1.8 µm（补充图 4）。在所用激光功率下（1.47%，对应于 1,600 cm-1 处约 3.4 mW，1,730 cm-1 处约 3.8 mW）（补充表 1），直径约 13 µm 的区域表现出比远离 PS 微球的纯非吸收性 PVA 层上记录的信号高出约 2 nm 的微弱振幅增加。该振幅增加的空间范围远比 PS 微球位于 PVA 薄膜上方时更宽（图 4A），后者光热膨胀信号虽呈不对称分布，但仍局限在快速扫描方向约 6 µm 宽、慢速扫描方向约 8 µm 长的区域内。该区域内振幅读数最高可达纯 PVA 层光热膨胀信号以上 12.1 nm。当在 1,730 cm-1 处照射样品时，PS 和 PVA 的光热膨胀振幅均高于 1,600 cm-1 时的值。对于暴露的 PS 微球（图 4Ci），微球顶部的光热膨胀最大，最高值达 26.5 nm。强光热响应区域延伸至 图 4Ai 中观察到的微球投影范围之外数微米。PVA 也因激发而发生膨胀，但振幅较低，即远离 PS 微球处记录的值约为 7.6 nm。值得注意的是，PS 微球左侧的响应始终最强。对于包埋的微球（图 4F），信号更为对称，但微球上方的光热膨胀振幅仅比 PVA 高出约 2.3 nm。在此情况下，通过 AFM 探针扫描表面测绘确定，在受 PS 加热影响的 10–13 µm 范围区域内，记录到约 13.6 nm 的稳定光热振幅。在 1,620 cm-1 处进行测定时未检测到任何信号，这与 PS 和 PVA 在该光谱区域无显著红外吸收峰的现象一致。
接下来，将采集于覆盖有聚苯乙烯（PS）微球顶部的纳米红外（nanoIR）光谱与聚乙烯醇（PVA）进行比较（图5A）。在覆盖区域，PS在1,600 cm-1处的信号显著低于未覆盖微球的情况。尽管该谱带贡献较弱，但对信号的进一步分析证实，增加激光功率会导致I1600/I1730比值升高（图5B、C）。结果表明，较高的激光功率对应更大的穿透深度，如图5B所示。这反过来影响了在不同激光功率下采集的纳米红外图像。在约20 mW的较高功率下，材料的光热振幅始终低于较低激光功率下的振幅。此外，光谱中的噪声水平升高，提示材料可能存在一定程度的不稳定性，可能源于聚合物温度的上升。
图1：PS微球的沉积。 5 µm PS微球的扫描电子显微镜（SEM）图像：(A)沉积在原始硅基底上，(B)沉积在PVA薄膜上，以及(C)被PVA覆盖。比例尺 = 1 µm。 请点击此处查看该图的放大版本。
图 2：纳米红外成像与光谱技术原理示意图。（A）脉冲红外激光被准直并聚焦于金属原子力显微镜（AFM）探针尖端与样品的接触点。悬臂梁测量材料因吸收红外光而产生的光热响应。在悬臂梁两侧镀有金层，以降低其在测量过程中产生的光热和声学效应，避免对样品的纳米红外测量造成干扰。（B）位置敏感探测器监测悬臂梁在时域 [S(t)] 和频域 [S(ω)] 中的偏转信号。通过锁相放大器测量确定悬臂梁的接触共振模式。成像过程中采用第二阶接触共振进行PLL跟踪。测量的是第二阶接触共振模式的振幅 Acr2。（C）通过监测振幅 Acr2 随照射波数变化所获得的纳米红外光谱。纳米红外图像则是通过监测振幅 Acr2 随探针在样品表面位置变化而获得。请点击此处查看该图的高清版本。
图3：PS和PVA的红外光谱。（A）PS的FTIR光谱。红色框标示出使用纳米红外光谱技术研究的谱段范围。相应的纳米红外PS光谱见插图。（B）PVA的FTIR光谱。红色框标示出使用纳米红外光谱技术研究的谱段范围。相应的纳米红外PVA光谱见插图。请点击此处查看该图的放大版本。
图 4纳米红外成像 PS微球（A-C) 沉积在PVA表面的D-F) 以插图所示方式嵌入PVA中。在（Ai,Di) 1,600 cm-1, (Bi,Ei) 1,620 cm-1，以及（Ci,Fi) 1,730 cm-1 叠加在3D形貌图上。沿白色虚线提取的相应形貌和nanoIR曲线分别显示在对应的图（ii）中。比例尺 = 5 µm. 请点击此处以查看此图的放大版本。
图 5：AFM 探针与涂覆有 PVA 的 PS 微球接触时采集的 NanoIR 光谱。（A）在激光功率分别为 p1 = 1.47%、p2 = 2.48%、p3 = 5.20% 和 p4 = 11% 时采集的 NanoIR 光谱。激光功率随波长变化，每种情况均通过衰减背景校正进行修正。（B）示意图展示激光功率对采集信号强度的影响。（C）I1600/I1730 比值随激光功率的变化关系。请点击此处查看该图的放大版本。
补充图1：nanoIR悬臂梁的校准。 （A）在蓝宝石基底上获得的偏转-距离曲线。回撤曲线的斜率提供了用于计算弹簧常数的悬臂梁偏转灵敏度。（B）通过热调谐法测定的悬臂梁共振频率，用于计算弹簧常数。 请点击此处下载该文件。
补充图2：红外激光光斑。 悬臂在与样品表面接触时的振幅随红外激光位置的变化而记录。通过移动反射镜来调节红外激光的准直。设置反射镜的位置，使聚焦体积的中心（红色区域）与悬臂的位置（白色十字的中心）对齐。请点击此处下载该文件。
补充图3：激光输出功率（单位：mW）随波数的变化关系。 采用标准红外探测器，在对应于nanoIR测量设置的脉冲频率下，以2 cm-1为步长，测量QCL激光器在1,530 cm-1至1,800 cm-1范围内的输出功率。请点击此处下载该文件。
补充图4：通过激光共聚焦表面轮廓仪测量的PVA厚度。 请点击此处下载该文件。
补充表 1：每个波数对应的激光功率（毫瓦）。 请点击此处下载该文件。
讨论
原子力显微镜（AFM）结合纳米红外光谱技术可利用接触模式下的悬臂和脉冲可调谐红外光源提供纳米级化学信息。诸如在聚合物材料体积内嵌入具有有限尺寸的吸收体等模型体系，对于深入理解成像形成机制以及评估仪器性能具有重要意义。针对本文所展示的聚苯乙烯（PS）/聚乙烯醇（PVA）体系，通过优化实验条件实现了聚苯乙烯微球稳定地位于PVA薄膜表面之上或之下。研究发现，在将涂覆有薄膜的硅基底从旋涂仪中取出后立即沉积聚苯乙烯微球，可获得更好的附着效果。PVA层的黏度可能影响微球相对于PVA薄膜表面的位置。将样品在约200 °C下加热约15分钟，可使微球更深入地嵌入薄膜中。
由于PS微球的尺寸较大（此处为5 µm），可利用nanoIR系统内置的光学显微镜快速将悬臂探针尖端与微球中心对齐。尽管在PVA中的PS微球和微泡在光学上难以区分，但通过nanoIR分析可以确认样品的组成。虽然当PS微球被其他聚合物覆盖时，1,600 cm-1处的红外吸收峰贡献可能较弱（如图5所示），但在探针接触PVA覆盖层的情况下，提高激光功率可增强直接位于微球上方所采集的nanoIR指纹图谱中PS在1,600 cm-1处的信号贡献。预计直径更小的PS微球将更难通过光学显微镜定位，并且在nanoIR光谱中产生的信号也更弱。在这种情况下，应考虑在PVA顶层涂覆前，先对PS微球进行AFM成像和nanoIR测量，同时对样品进行标记，以确保已知嵌入式PS微球的位置。尽管存在上述可预见的挑战，但这种构建模型体系的方法具有成本低廉且易于实现的优点。可通过微球的形貌轮廓来估计其位置，但在评估成像特征的直径时，应考虑所谓的探针针尖效应。
关于数据采集与分析，本研究中使用nanoIR获得的数据揭示了在使用较软的nanoIR悬臂梁以及增加激光功率时，针尖-样品相互作用存在若干意外的不稳定性。尽管形貌图像稳定，但使用较软悬臂梁（k < 0.4 N/m）采集的nanoIR图像在受红外光激发的PS微球附近始终表现出不稳定性。本研究记录的PS和PVA的nanoIR光谱与相应本体聚合物通常报道的FTIR光谱吻合良好21,22。在1,600 cm-1（仅PS）和1,730 cm-1（PS和PVA）处的两个明显吸收峰为比较激发表面下单一微球吸收体效应提供了方法。图4所示的nanoIR图像表明，当PS微球暴露时，微球附近的信号较强，但当PVA薄膜覆盖微球时，信号显著减弱。然而，结果表明，即使微球位于表面以下超过1 µm处，在1,600 cm-1和1,730 cm-1激发条件下，仍可在nanoIR图中检测到该微球。在这两种情况下，悬臂梁检测到的振幅在微球正上方直接增加约2 nm。尽管振幅较低，但在1,600 cm-1激发时，该膨胀的信号范围宽度约为13 µm，远大于微球的直径，证实热量从PS吸收体扩散至PVA。这种焦耳膨胀可能影响nanoIR在异质材料上的空间分辨率，若吸收体更接近表面，则影响更为显著。样品在1,730 cm-1处的更大响应与图5所示的nanoIR光谱一致，表明1,600 cm-1处吸收峰的贡献远弱于1,730 cm-1处。
当前方法存在一些局限性。在将微珠置于PVA表面下方的同时，仍无法避免模型系统表面出现明显的形貌凸起。事实上，可能需要非常厚的涂层，导致微珠在纳米红外（nanoIR）光谱检测中变得无法识别。微珠的埋藏深度既难以精确控制，也难以准确表征，这将导致难以提供足够的信息用于建模，以准确反映该模型系统的实际情况。要更全面地理解亚表面吸收体的尺寸和深度对表面测得的nanoIR信号的影响，需要更精确地调控微珠的尺寸和位置。此外，在真实的复杂系统中，可能存在多个具有不同尺寸、位置和成分的亚表面吸收体，它们会相互干扰测量结果，而本模型并未描述此类情况。
尽管如此，测量结果证实，从多聚合物样品的信号生成中获取纳米红外（nanoIR）表征的相关信息仍有诸多值得探索之处。应进一步优化样品制备方案，以可控地改变聚苯乙烯（PS）微球在聚乙烯醇（PVA）基质中的埋藏深度，从而更全面地分析亚表面吸收体对PVA表面光热膨胀行为的影响。此外，还可改变实验中所用聚合物的组合，以探究热导率、热膨胀系数及力学性能对异质材料纳米红外测量性能的作用。该方法为深入理解纳米红外光谱与成像中样品的行为提供了有前景的途径，并有望进一步推动对仪器穿透深度、空间分辨率及灵敏度的量化分析。鉴于新型成像模式（如多频纳米红外15,23）的出现，而这些模式所获取信息的本质以及激励参数对仪器性能的影响仍不明确，这一研究方向尤为重要。为了加深对所采集数据的理解，将实验方法与多物理场建模相结合将至关重要24。通过研究不同尺寸的埋藏结构并调节其在表面下的位置，将有助于构建更为全面的理论模型。这反过来将推动纳米红外光谱技术向真实世界中异质性和三维材料的应用迈进。
披露
作者无任何利益冲突需要披露。
致谢
本工作由美国国家科学基金会（NSF CHE-1847830）资助。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 10|0 2200 Golden Taklon 圆头刷 | Zem | ||
| 5357-8NM 镊子 | Pelco | ||
| 粘性标签 | Ted Pella | 16079 | |
| AFM 金属样品盘 | Ted Pella | 16208 | |
| 双目显微镜 | AmScope | ||
| 用于 nanoIR 测量的悬臂梁 | AppNano | FORTGG | |
| 细胞培养皿 | Greiner bio-one GmbH | ||
| 干燥器 | |||
| 浮动式光学平台 | Newport | RS 4000 | |
| 加热板 | VWR | ||
| 异丙醇 | |||
| 吸水纸（Kimwipes） | KIMTECH | ||
| 磁力搅拌子 | |||
| 基于聚苯乙烯的微粒，粒径：5 µm | SIGMA-ALDRICH | 79633 | |
| nanoIR2 显微镜 | Bruker | 接触模式 NanoIR2 | |
| 氮气罐 | Airgas | ||
| 培养皿 | Greiner bio-one GmbH | ||
| 聚乙烯醇 | SIGMA-ALDRICH | 363170 | 该聚合物的水解度仅为87%-89%，这解释了在1730 cm-1处存在残余C=O峰的现象 |
| 量子级联激光器 | Daylight Solutions | 波数范围：1550-1800 cm-1 | |
| 硅晶圆 | MEMC St. Peters | #901319343000 | |
| 旋涂仪 | Oscilla |
参考文献
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