Etiquetado de las células madre con tintes fluorescentes para la detección no invasiva con imágenes ópticas
Summary
Este video muestra las técnicas para el etiquetado de las células madre embrionarias y células madre mesenquimales con tintes fluorescentes. Esta técnica se puede utilizar para un seguimiento in vivo de las células madre trasplantadas con técnicas de imagen óptico y de las correlaciones histopatológico con microscopía de fluorescencia.
Abstract
Obtención de imágenes ópticas (OI) es una herramienta fácil, rápida y económica para monitorización in vivo de las nuevas terapias con células madre basado. La técnica se basa en el etiquetado ex vivo de células madre con un tinte fluorescente, la inyección intravenosa posterior de las células marcadas y la visualización de su acumulación en órganos específicos o patologías. La técnica presentada demuestra la forma en que la etiqueta de células madre mesenquimales (hMSC) por simple incubación con el colorante fluorescente lipofílicas DID (C67H103CIN2O3S) y la forma en que la etiqueta de células madre embrionarias (células madre) con la FDA aprobó el colorante fluorescente verde de indocianina (ICG). El mecanismo de captación es a través de la adhesión y difusión del colorante lypophilic a través de la bicapa de fosfolípidos de membrana celular. El etiquetado de eficiencia suele mejorar si se incuban las células con el colorante en el medio libre de suero en lugar de incubación en el suero que contienen los medios de comunicación. Además, la adición del sulfato de protamina agente de transfección mejora significativamente la absorción del agente de contraste.
Protocol
Discussion
La osteogénesis imperfecta es una técnica relativamente nueva de imágenes, basado en la detección de la fluorescencia. La osteogénesis imperfecta es más sensible que las técnicas de imagen radiotrazador basado en, pero no se asocia con cualquier exposición a la irradiación. OI es un medio eficaz de seguimiento de las células de forma no invasiva y repetitiva, lo que ofrece información para la migración de células al sitio de destino. Una de las principales limitaciones de la técnica es la penetración en el tejido limitado de …
Acknowledgements
Este proyecto fue financiado por una subvención Leon J. SEMILLA Thal del Instituto de Medicina Regenerativa de California. Tobias Henning fue financiado por una beca de investigación de la Asociación Alemana de Investigación (DFG, el Excmo 4578/1-2). Queremos reconocer y agradecer Meneses Juanito por sus consejos sobre la cultura de células madre embrionarias humanas.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Indocyanine Green (IR-125) | Reagent | Fisher Scientific | AC41254-1000 | |
| DMSO | Reagent | Sigma | D-2650 | |
| D-MEM High Glucose | Reagent | Sigma | D5648 | |
| Gelatin | Reagent | Sigma | G1890 | Dilute to final concentration of 0.1% in PBS |
| PBS, Mg and Ca free | Reagent | GIBCO | 14190-144 | |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Reagent | Invitrogen | 25300-120 | |
| Trypsin-EDTA 0.25% | Reagent | Invitrogen | 25200-114 | |
| FCS, characterized | Reagent | Hyclone | SH30071.03 | |
| Cell Strainer (40 μm Nylon) | Reagent | BD Falcon | 352340 | |
| DiD | Reagent | Molecular Probes | V-22887 | |
| Knockout DMEM | Reagent | GIBCO | 10829018 | |
| Knockout Serum Replacer | Reagent | GIBCO | 10828028 | |
| b-Mercaptoethanol | Reagent | Sigma | 7522 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | GIBCO | 11140050 | |
| FGF-2 | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Glutamine 200mM | Reagent | GIBCO | 25030081 | |
| Penicillin/Streptomycin | Reagent | GIBCO | 15140-122 | |
| Protamine Sulfate | Reagent | American Pharmaceutical Partners Inc. |
References
- Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Metz, S., Piontek, G., Settles, M., Pichler, B., Heinzmann, U., Weinmann, H. J., Schlegel, J., Link, T. M., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. Stem cell tracking with Gadophrin-2 — a bifunctional contrast agent for MR imaging, optical imaging and fluorescence microscopy. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 31, 1312-1321 (2004).
- Simon, G. H., Daldrup-Link, H. E., Kau, J., Metz, S., Schlegel, J., Piontek, G., Saborowski, O., Demos, S., Duyster, J., Pichler, B. J. Optical imaging of experimental arthritis using allogeneic leukocytes labeled with a near-infrared fluorescent probe. Eur J Nucl Med & Mol Imaging. 33, 998-1006 (2006).
- Sutton, E., Henning, T., Pichler, B., Bremer, C., Daldrup-Link, H. E. Cell Tracking with Optical imaging. Eur Radiol. 2, 350-357 (2003).
- Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging. Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).
