Cette vidéo montre comment faire pousser des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sur les cellules de fibroblastes de souris embryonnaires d'alimentation (MEF).
Abstract
Cette vidéo montre comment faire pousser des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sur les cellules de fibroblastes de souris embryonnaires d'alimentation (MEF).
Protocol
Fractionnement cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) plaqué sur des fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) Habituellement une plaque de CSEh confluentes peut être divisé 1:06-1:10, en fonction de la lignée de CSEh particulier. La plaque de répartition ne deviennent confluents nouveau 5-7 jours après la séparation. Deux jours avant de se séparer, gélatiniser plaques en utilisant une solution à 0,1% de gélatine. Pour une plaque de 6 puits, ajouter 2 ml dans c…
Discussion
Cette vidéo montre comment faire pousser des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) sur les cellules de fibroblastes de souris embryonnaires d'alimentation (MEF). Dans la dernière étape avant le placage, quand les CSEh sont remises en suspension, ils devraient être à peu près la taille des colonies et des formes identiques. Soigneusement pipette la suspension de CSEh haut et en bas à quelques reprises de faire des colonies plus petites et plus uniformes, mais pas tant que les cellules uniques ou très petites colonies son…
Acknowledgements
Embryonnaires humaines études de cellules souches dans le laboratoire Teitell sont soutenus par un California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Subvention de démarrage RS1-00313. Nous remercions les membres du grand centre de médecine régénérative et de recherche sur les cellules souches à l'UCLA, en particulier le Dr Clark Amander, le Dr Jerome Zack, et des membres de l'UCLA large souches Facilité Institut noyau cellulaire pour leur soutien de nos études.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.Science . 282, 1145-1147 (1998).
Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.Nature Biotechnology . 19, 971-974 (2001).
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs. J. Vis. Exp. (16), e722, doi:10.3791/722 (2008).