Method Article

Maus Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Kulturen

DOI:

10.3791/772

⸱

May 9th, 2008

 , 
1Institute of Human Genetics and Northeast England Stem Cell Institute, Newcastle University, 2Department of Cell Biology, Neurobiology and Anatomy, Medical College of Wisconsin

In This Article

Summary

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Hier zeigen wir unsere Methode zur Maus epidermalen Neuralleiste Stammzellen (EPI-NCSC) zu isolieren. Technik beinhaltet Mikro-Sezieren Whisker Follikel, die Isolierung des Bulge und Silber reflektiert sie in Gewebekultur. EPI-NCSC beginnen mit Ausbuchtung Explantate auf das Substrat innerhalb von 3 auswandern - 4 Tage.

Abstract

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EPI-NCSC sind Reste der embryonalen Neuralleiste bei einem Erwachsenen Lage, die Wölbung der Haarfollikel. Sie sind multipotente Stammzellen, die die physiologische Eigenschaft auf eine breite Palette von differenzierten Zelltypen, einschließlich Neuronen, Nerven Stützzellen, glatte Muskelzellen, Knochen / Knorpel-Zellen und Melanozyten zu generieren. EPI-NCSC sind leicht zugänglich in der behaarten Haut und kann als hoch reinen Population von Stammzellen isoliert werden. Dieses Video gibt einen detaillierten Protokoll für die Vorbereitung Maus EPI-NCSC Kulturen aus Whisker Follikel. Die Whisker pad einer erwachsenen Maus entfernt wird, und Whisker Follikel zerlegt. Die Follikel sind dann in Längsrichtung und anschließend quer geschnitten oberhalb und unterhalb der Ausbuchtung Region. Die Ausbuchtung wird aus dem Kollagen Kapsel entfernt und in eine Kulturschale. EPI-NCSC beginnen mit der Ausbuchtung Explantate 3 bis 4 Tage später emigrieren.

Protocol

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Dissection of the Bulge von erwachsenen Maus Whisker Follikel

  1. Wir verwenden 10 Wochen bis 6 Monate alten Mäusen. Jüngere Mäusen liefern oft mehr Zellen. Euthanize Maus und tauchen ganze Tier in 1:1-Mischung von betadine (Iodlösung) und Wasserstoffperoxid (erhältlich von der Apotheke) für ca. 3 Minuten.
  2. Squirt gesamte Maus, vor allem das Gesicht, mit 75% Ethanol, und tragen Maus Dissektionsmikroskop in Laminarströmungshaube.
  3. Dissect Schnurrhaarkissen, sorgfältig zu vermeiden Einschneiden Haarzwiebeln, und Pool in HBSS.
  4. Dissect Whisker Follikel und Pool in HBSS bei Raumtemperatur. Tun Sie dies, indem Haut neben Haarfollike....

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Discussion

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Aufgrund ihrer Fähigkeit, wandernde, kann EPI-NCSC als hochreines Population von Stammzellen, die in vitro erweitert werden kann isoliert werden. Da embryonale Reste eines erwachsenen Lage sind EPI-NCSC potenziell attraktive Kandidaten für die zukünftige Zellersatztherapien, Biomedizintechnik und / oder der regenerativen Medizin. Wir haben EPI-NCSC in einem Mausmodell für Rückenmarksverletzungen getestet, wo sie wünschenswerte Merkmale zeigen. Durch Genexpressionsanalysen von LongSAGE (www.ncbi.nlm.nih.gov / geo, Seriennummer GSE4680) haben.......

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Acknowledgements

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Unterstützt durch: USPHS gewähren NS38500, National Institute of Neurological Disorders and Stroke, NIH, USA; Biomedical Technology Alliance von Southeastern Wisconsin, Milwauke, WI, USA; Bryon Riesch Paralysis Foundation, Milwaukee, WI, USA; Fraternal Order of Eagles, Midwest Kapitel , USA, National Spinal Cord Injury Association, Milwaukee Kapitel, USA, North East England Stem Cell Institute, Universität Newcastle, UK.

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References

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  1. Sieber-Blum, M., Grim, M., YF, H. u, Szeder, V. Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle. Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).
  2. Sieber-Blum, M., Grim, M. The adult hair follicle - cradle for pluripotent neural crest stem cells. Birth Defects....

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Epidermal Neural Crest Stem CellsMouse Whisker FolliclesBulge IsolationCollagen Coated PlatesCell Culture ProtocolHair Follicle DissectionStem Cell EmigrationCulture Medium PreparationCell Incubation ConditionsContamination Prevention

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