루시페라제 기반 리포터 유전자 분석과 함께 막 Biogenesis 유학

요약

여기, 우리는 Promega에서 듀얼 GloTM 루시페라제 분석 시스템을 사용 루시페라제 기반 리포터 유전자 접근 방식과 phagocytosis 유발 유전자 발현의 변화를 공부하고 절차를 설명합니다.

초록

멤브레인 biogenesis 동안 다른 지질 합성 경로의 조정을 연구하기 위해 그것은 멤브레인 biogenesis 빠르게하고 inducible 방식에서 발생하는 실험 시스템을 작동하는 데 유용합니다. 우리는 세포가 빠르게 입자 engulfment 동안 자료를 배치로 손실 막 풀을 보충 막 lipids를 종합으로 라텍스 구슬의 phagocytosis가 이러한 목적을 위해 실용적인 것으로 나타났습니다. 여기, 우리는 Promega에서 듀얼 글로 루시페라제 분석 시스템을 사용 루시페라제 기반 리포터 유전자 접근 방식과 phagocytosis 유발 유전자 발현의 변화를 공부하고 절차를 설명합니다.

프로토콜

세포 배양

1. 인간의 배아 신장 293 (HEK293) 세포의 재고 문화가 항생제의 칵테일 (페니실린의 ML 당 100 단위 및 100 μg와 보충 Dulbecco의 수정된 이글의 중간 (DMEM)으로 구성된 '매체'에 10 cm 문화 요리에 재배 당 스트렙토 마이신 황산의 ML)와 10 % 태아 소 혈청 (FBS).
2. 실험 세포를 설정하려면, 매체가 해제 빨려이며, 세포는 인산 5 ML로 두 번 씻어하는 것은 생리 (PBS) 솔루션을 버퍼.
3. PBS 그런 다음 제거하고 0.25 %의 트립신을 포함하는 솔루션 0.6 ML로 대체됩니다.
4. 세포 분리하기 시작했다 때까지 요리는 37 ˚ C 약 2 분 incubated입니다.
5. 매체의 5.5 ML은이 트립신을 중화에 추가되고 세포는 hemocytometer로 계산됩니다.
6. 전지는 ML 당 320,000 세포에 희석하고 polylysine - 코팅 96 - 웰 플레이트 문화에 잘 당 0.1 ML에 적절하고 있습니다.
7. 37 조직 문화의 인큐베이터로 접시를 놓고 ˚ C 8.8 %의 CO2를 포함하는 분위기와 24 시간을위한 성장.

Transfections