Mikrobiyal ve Fungal Çeşitlilik

KavramlarEğitmen HazırlığıÖğrenci Protokolü
0 görüntülenme05:06 dk.
Print Procedure Steps
  1. mikrobiyal koloni yapılarının incelenmesi ul class="lab-items">
  2. Başlamak için, tahsis edilmiş kültür plakalarınızı toplayın ve ardından Parafilmi ve kapağı bunlardan birinden çıkarın.
  3. Üstü açılan plakayı bir diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin ve ardından plakanın her çeyreğindeki tek tek toplulukları gözlemleyin.
  4. Koloniler tanımlandıkça, gözlemlenen koloni özelliklerini tablodaki uygun sütuna doldurun. Tablo 1'i indirmek için buraya tıklayın
  5. Ardından, diğer iki bakteri türünün her biri için gözlemleri tekrarlayın.
  6. Üç bakteri türünüzün Gram boyamasını gerçekleştirmek için, önce üç mikroskop lamının uçlarını her bakteri türünün baş harfleri, baş harfleri ve tarih ile etiketleyin. HİPOTEZLER: Bu deneyde, deneysel hipotez, Gram boyama kullanarak farklı bakteri türlerini ve şekillerini açıklamanın mümkün olduğu ve Gram-pozitif bakterilerin kristal viyole ile mor renkte boyanacağı, Gram-negatif bakterilerin ise safranin karşı boyası nedeniyle pembe görüneceği olabilir. Sıfır hipotezi, tüm bakteri türlerinin her iki lekeyi de eşit şekilde koruyacağı ve boyamanın türlerini veya şekillerini aydınlatmaya yardımcı olmayacağı olabilir.
  7. İlk lekeye başlamak için, kullanım kolaylığı için slayta bir klips takın. Her bakteri yayması için temizlenmiş ve alevle sterilize edilmiş bir aşılama halkası kullandığınızdan emin olmayı unutmayın.
  8. Slaytın ortasına iki döngü dolusu steril damıtılmış su yerleştirin.
  9. Döngüyü tekrar sterilize ettikten sonra, agarın aşılanmamış bir kısmına birkaç kez dokunarak döngüyü soğutun.
  10. Ardından, izole edilmiş bir koloniden az miktarda kültür çıkarın ve slayttaki suyla karıştırın.
  11. Slaytın oda sıcaklığında kurumasını bekleyin ve lekeyi alevden hızlıca geçirerek ısıyla sabitleyin.
  12. Kuruduktan sonra, slayta birkaç damla kristal menekşe pipetleyin ve iki ila üç dakika bekletin.
  13. Doğrudan akışı kaydırağın üst kısmına doğru hedefleyerek kaydırağı damıtılmış suyla dikkatlice durulayın ve suyun yavaşça aşağı akmasına izin verin. Su akışını doğrudan lekeye doğrultmayın.
  14. Ardından, slaytı Gram'ın iyotuyla kaplayın, iki dakika daha bekletin ve ardından damıtılmış suyla nazikçe durulayın.
  15. Leke artık yıkanmayana kadar lamın rengini %95 etanol ile temizleyin.
  16. Hemen, slaytı damıtılmış suyla durulayın. Bu, aşırı renk gidermeyi sınırlayacaktır.
  17. Ardından, birkaç damla safranin karşı boyası ekleyin ve 30 saniye bekletin. Bu, mevcut tüm Gram-negatif hücreleri lekeleyecektir.
  18. Slaytı damıtılmış suyla nazikçe durulayın ve emici kağıtla kurulayın.
  19. Diğer iki slaydı da aynı şekilde boyadıktan sonra (adım 6 – 17), her birini mikroskopla gözlemleyin.
  20. Kaba ayarlamalar yapmak için önce düşük güç hedefi kullanın. İdeal bir kesit bulduğunuzda, daha yüksek büyütme oranlarına geçin.
  21. Daha fazla görüntüleme ve smear'ı orta güç hedefiyle ayarladıktan sonra, daldırma yağını doğrudan smear'a ekleyin. NOT: Yağ, en iyi mikrografları sağlayacak yüksek güç hedefleri için gereklidir.
  22. Şimdi, gözlemlenen bakterileri uygun büyütme dairelerinde çizmek için renkli kalemler kullanın ve gözlemlenen özellikleri uygun sütuna doldurun, bakterinin şeklini ve daha koyu mor boyama ile tanımlanan Gram pozitif mi yoksa pembe boyama ile tanımlanan Gram negatif mi olduğunu not edin. Tablo 2'yi indirmek için buraya tıklayın
  23. Son olarak, diğer iki lekeli bakteri lamı için gözlem, çizim ve karakterizasyonu tekrarlayın.
  24. Mantar Yapılarının İncelenmesi ul class="lab-items">
  25. S. cerevisiae plakasını inkübatörden çıkarın ve bir mikroskop lamı üzerine bir damla su koyun.
  26. Sterilize edilmiş bir aşılama halkası kullanarak, su damlasına bir maya filmi sürün ve slaytın üzerine bir kapak fişi yerleştirin.
  27. Slaytı mikroskop altına en düşük büyütmede yerleştirin, tek tek maya hücrelerini görmek için büyütmeyi yağa daldırma ayarına yükseltin.
  28. Mayanın genel şeklini ve yapısını gözlemleyin ve tomurcuklanarak eşeysiz üreme geçiren hücreleri tanımlayın.
  29. Şimdi, hücreleri uygun büyütme dairelerinde çizin.
  30. Mayayı gözlemlemeyi tamamladığınızda, S. cerevisiae slaytını hazırlanmış bir Ascomycetes apothecium lamı ile değiştirin ve mikroskobu en düşük büyütmeye ayarlayın.
  31. Renkli kalemler kullanarak, asci ve askosporlar da dahil olmak üzere yapıları düşük ve yüksek büyütmelerde çizin.
  32. Son olarak, diseksiyon mikroskobunun altına bir düğme mantarı olan Agaricus bisporus'u yerleştirin ve pileus veya başlık, solungaçlar ve stipe veya sap dahil olmak üzere özellikleri çizin.
  33. Results ul class="lab-items">
  34. Tabloda kaydedilen bakterilerin renklendirmesini kullanarak hangi türlerin Gram-pozitif, hangilerinin Gram-negatif olduğunu belirleyin.
  35. Ardından, hangi bakteri türlerinin basil, coccus veya spirillum olduğunu belirlemek için tabloda kaydedilen şekillere bakın.
  36. Sonra maya hücrelerinin çizimlerini bakteri hücrelerinin çizimleriyle karşılaştırın. NOT: S. cerevisiae gibi Ascomycetes filumundan elde edilen maya, aseksüel olarak çoğalabilir, bu da hücrelerin mikroskop altında tomurcuklanması yoluyla gözlemlenebilir.
  37. Tomurcuklanan maya hücrelerinin gözlemlerini kaydedin. NOT: Ascomycetes ayrıca mitoz ve haploid spor oluşumu yoluyla cinsel olarak çoğalabilir.
  38. Tabloda gözlemlediğiniz spor veya asci oluşumu gözlemlerini kaydedin.
  39. NOT: Basidiomycota filumundaki mantar, yığının altında açıkça gözlemlenebilir solungaçlar sergiler.
  40. Yığının altında solungaç gösteren herhangi bir mantar türünü kaydedin.

Browse More Videos

Mikrobiyal Çeşitlilik