Mikroorganizmalar, çıplak gözle görülemeyecek kadar küçük canlılar olarak tanımlanır. Ancak onları tipik olarak görmesek de, mikroplar her yerdedir, sindirimimize yardımcı olmak veya yoğurt ve şarap yapmak gibi iyi şeyler yapar, enfeksiyon veya hastalığa neden olmak gibi pek iyi olmayan şeyler yapar.
Enfeksiyonlardan bahsetmişken, 1928'de Alexander Fleming tatilden laboratuvarına döndü ve bakteri kültürü plakalarından birinde garip bir mantar kontaminasyonu fark etti. İlginç bir şekilde, kontaminasyonun hemen etrafındaki bakteri kolonileri yok edilmişti. Bu gözlem, çok daha fazla araştırmaya yol açtı ve sonunda bakteriyel enfeksiyonları tedavi edebilecek penisilin ve diğer antibiyotiklerin geliştirilmesiyle sonuçlandı. Yine de, mikroskobik dünyada yan yana yaşayabilseler de, formlarını ve filogenilerini inceleyerek bakteri ve mantarların çok farklı ve çeşitli organizmalar olduğunu biliyoruz. Bu iki ana grubun tanımlayıcı özelliklerinden bazılarını kısaca gözden geçirelim.
Bakteriler tek hücreli prokaryotlardır, yani çekirdeği olmayan tek hücreli organizmalardır. Tüm bakterilerin bir hücre duvarı vardır, ancak bileşimi ve kalınlığı değişir. Gram pozitif bakteriler, gram boyamada kristal viyole moleküllerini kolayca tutan kalın bir peptidoglikan tabakasına sahip bir hücre duvarına sahiptir. Bununla birlikte, gram negatif bakteriler, bir dış lipopolisakkarit zarı ile çevrili ince bir hücre duvarına sahiptir ve yalnızca kırmızı renkli safranin olan karşı lekeyi tutarlar. Gram boyama, bakteri şekillerinin de gözlemlenmesine izin verir. Yuvarlak bakterilere kok denir. Çubuk şeklindeki bakterilere basil denir. Spiral şekilli bakterilere ise spirilla denir. Ayrıca bakteri kolonileri, koloninin rengi, şekli ve büyüklüğü gibi özellikler kullanılarak çıplak gözle de karakterize edilebilir.
Şimdi mantarlara bir göz atalım. Bakterilerin aksine, mantarlar ökaryottur ve bu nedenle hücrelerinin zara bağlı organelleri ve bir çekirdeği vardır. Genellikle üreme stratejilerine göre gruplara ayrılırlar. Örneğin, kuzugöbeği, penicillium ve yer mantarı içeren Ascomycota veya kese mantarları, ascocarps adı verilen meyve veren gövdelere sahiptir. Kuzugöbeği kuzugöbeği bu yapılarla doldurulur. Bunlara daha yakından bakarsak, asci adı verilen birçok küçük yapı içerirler ve bu da eşeyli üreme sırasında oluşan birçok askosporu içerir. Bununla birlikte, Ascomycota genellikle tomurcuklanarak eşeysiz olarak çoğalır. İnceleyeceğimiz ikinci ana mantar grubu Basidiomycota veya kulüp mantarlarıdır. Ormandaki yenilebilir ve zehirli mantarların çoğu aslında Basidiomycota'nın üreme yapılarıdır. Bu grupta, mantar kapağı olarak adlandırdığımız şey teknik olarak basidiokarp olarak bilinir. Solungaçlı mantarlarda, basidiocarp altındaki solungaçlar, basidia olarak bilinen küçük yapılarla kaplıdır ve bunlar, cinsel üreme sırasında basidiosporlar, mikroskobik üreme sporları üretir. Bu sporlar tipik olarak birçok bitki tohumuna benzer şekilde rüzgarla dağılır. Burada, birkaç ana bakteri ve mantar grubunu ve onları tanımlayan özellikleri çok basitleştirilmiş bir şekilde inceledik. Bununla birlikte, birçok tahmine göre bir trilyondan fazla olan çok sayıda mikrobiyal tür nedeniyle, bilim adamları genellikle DNA'larının incelenmesi de dahil olmak üzere ek yöntemler kullanarak bunları tanımlar ve gruplandırır.
Bu laboratuvarda, gram boyama kullanarak farklı bakteri türlerini tanımlayacak ve koloni özelliklerini inceleyeceksiniz. Üreme yapılarını belirlemek için mantar türlerini de inceleyeceksiniz.
Ardından, diğer iki bakteri türünün her biri için gözlemleri tekrarlayın.
Üç bakteri türünüzün Gram boyamasını gerçekleştirmek için, önce üç mikroskop lamının uçlarını her bakteri türünün baş harfleri, baş harfleri ve tarih ile etiketleyin. HİPOTEZLER: Bu deneyde, deneysel hipotez, Gram boyama kullanarak farklı bakteri türlerini ve şekillerini açıklamanın mümkün olduğu ve Gram-pozitif bakterilerin kristal viyole ile mor renkte boyanacağı, Gram-negatif bakterilerin ise safranin karşı boyası nedeniyle pembe görüneceği olabilir. Sıfır hipotezi, tüm bakteri türlerinin her iki lekeyi de eşit şekilde koruyacağı ve boyamanın türlerini veya şekillerini aydınlatmaya yardımcı olmayacağı olabilir.
İlk lekeye başlamak için, kullanım kolaylığı için slayta bir klips takın. Her bakteri yayması için temizlenmiş ve alevle sterilize edilmiş bir aşılama halkası kullandığınızdan emin olmayı unutmayın.
Slaytın ortasına iki döngü dolusu steril damıtılmış su yerleştirin.
Döngüyü tekrar sterilize ettikten sonra, agarın aşılanmamış bir kısmına birkaç kez dokunarak döngüyü soğutun.
Ardından, izole edilmiş bir koloniden az miktarda kültür çıkarın ve slayttaki suyla karıştırın.
Slaytın oda sıcaklığında kurumasını bekleyin ve lekeyi alevden hızlıca geçirerek ısıyla sabitleyin.
Kuruduktan sonra, slayta birkaç damla kristal menekşe pipetleyin ve iki ila üç dakika bekletin.
Doğrudan akışı kaydırağın üst kısmına doğru hedefleyerek kaydırağı damıtılmış suyla dikkatlice durulayın ve suyun yavaşça aşağı akmasına izin verin. Su akışını doğrudan lekeye doğrultmayın.
Ardından, slaytı Gram'ın iyotuyla kaplayın, iki dakika daha bekletin ve ardından damıtılmış suyla nazikçe durulayın.
Leke artık yıkanmayana kadar lamın rengini %95 etanol ile temizleyin.
Hemen, slaytı damıtılmış suyla durulayın. Bu, aşırı renk gidermeyi sınırlayacaktır.
Ardından, birkaç damla safranin karşı boyası ekleyin ve 30 saniye bekletin. Bu, mevcut tüm Gram-negatif hücreleri lekeleyecektir.
Slaytı damıtılmış suyla nazikçe durulayın ve emici kağıtla kurulayın.
Diğer iki slaydı da aynı şekilde boyadıktan sonra (adım 6 – 17), her birini mikroskopla gözlemleyin.
Kaba ayarlamalar yapmak için önce düşük güç hedefi kullanın. İdeal bir kesit bulduğunuzda, daha yüksek büyütme oranlarına geçin.
Daha fazla görüntüleme ve smear'ı orta güç hedefiyle ayarladıktan sonra, daldırma yağını doğrudan smear'a ekleyin. NOT: Yağ, en iyi mikrografları sağlayacak yüksek güç hedefleri için gereklidir.
Şimdi, gözlemlenen bakterileri uygun büyütme dairelerinde çizmek için renkli kalemler kullanın ve gözlemlenen özellikleri uygun sütuna doldurun, bakterinin şeklini ve daha koyu mor boyama ile tanımlanan Gram pozitif mi yoksa pembe boyama ile tanımlanan Gram negatif mi olduğunu not edin. Tablo 2'yi indirmek için buraya tıklayın
Son olarak, diğer iki lekeli bakteri lamı için gözlem, çizim ve karakterizasyonu tekrarlayın.
Mantar Yapılarının İncelenmesi
ul class="lab-items">
S. cerevisiae plakasını inkübatörden çıkarın ve bir mikroskop lamı üzerine bir damla su koyun.
Sterilize edilmiş bir aşılama halkası kullanarak, su damlasına bir maya filmi sürün ve slaytın üzerine bir kapak fişi yerleştirin.
Slaytı mikroskop altına en düşük büyütmede yerleştirin, tek tek maya hücrelerini görmek için büyütmeyi yağa daldırma ayarına yükseltin.
Mayanın genel şeklini ve yapısını gözlemleyin ve tomurcuklanarak eşeysiz üreme geçiren hücreleri tanımlayın.
Şimdi, hücreleri uygun büyütme dairelerinde çizin.
Mayayı gözlemlemeyi tamamladığınızda, S. cerevisiae slaytını hazırlanmış bir Ascomycetes apothecium lamı ile değiştirin ve mikroskobu en düşük büyütmeye ayarlayın.
Renkli kalemler kullanarak, asci ve askosporlar da dahil olmak üzere yapıları düşük ve yüksek büyütmelerde çizin.
Son olarak, diseksiyon mikroskobunun altına bir düğme mantarı olan Agaricus bisporus'u yerleştirin ve pileus veya başlık, solungaçlar ve stipe veya sap dahil olmak üzere özellikleri çizin.
Results
ul class="lab-items">
Tabloda kaydedilen bakterilerin renklendirmesini kullanarak hangi türlerin Gram-pozitif, hangilerinin Gram-negatif olduğunu belirleyin.
Ardından, hangi bakteri türlerinin basil, coccus veya spirillum olduğunu belirlemek için tabloda kaydedilen şekillere bakın.
Sonra maya hücrelerinin çizimlerini bakteri hücrelerinin çizimleriyle karşılaştırın. NOT: S. cerevisiae gibi Ascomycetes filumundan elde edilen maya, aseksüel olarak çoğalabilir, bu da hücrelerin mikroskop altında tomurcuklanması yoluyla gözlemlenebilir.
Tomurcuklanan maya hücrelerinin gözlemlerini kaydedin. NOT: Ascomycetes ayrıca mitoz ve haploid spor oluşumu yoluyla cinsel olarak çoğalabilir.
Tabloda gözlemlediğiniz spor veya asci oluşumu gözlemlerini kaydedin.
NOT: Basidiomycota filumundaki mantar, yığının altında açıkça gözlemlenebilir solungaçlar sergiler.
Yığının altında solungaç gösteren herhangi bir mantar türünü kaydedin.