In-vitro Mutajenez

- [Anlatıcı] Bilim insanları hayvanlarda, genellikle farelerde bir geni inaktif hâle getirerek ya da çıkararak genin işlevi hakkında bilgi edinebilirler, genellikle tasarlanmış bir DNA parçası olan bir hedefleme vektörüyle değiştirirler. Hedefleme vektörünün, gen önce ve sonrasındaki dizilerle homolog, aynı olan dizileri vardır. Genelde ortada neomisin direnci geni NeoR gibi bir pozitif işaretleyicisi bulunur, bir ucunda da timidin kinaz geni TK gibi bir negatif işaretleyicisi bulunur.

Embriyonik kök hücrelere sokulduğunda homolog rekombinasyon yoluyla genin yerini alır, bu süreç benzer dizili DNA parçaları arasında doğal gerçekleşir. Genin doğru değiştirildiği yerlerde pozitif işaretleyici varken negatif işaretleyici olmaz, bu da kültürde tanınmalarını sağlar. Daha sonra bu hücreler fare embriyosuna enjekte edilir ve dişi rahmine yerleştirilir.

Sonuçta ortaya çıkan farede normal hücrelerle bir kromozomda atılmış genleri olan hücreler bir arada bulunur. Daha sonra bu fareler çiftleştirilerek tüm hücrelerinde homozigot olarak atılmış gen taşıyan nakavt fareler elde edilir.