Arabellek

Kaynak: Smaa Koraym, Johns Hopkins Üniversitesi, MD, ABD

1. Çözümlerin HazırlanmasıExpand

   Burada, çiftler halinde çalışan 10 öğrenci için laboratuvar hazırlığını gösteriyoruz, biraz fazlalık ile. Lütfen miktarları gerektiği gibi ayarlayın.

   • Bu laboratuvar deneyine hazırlanmak için laboratuvar önlüğü, kimyasal sıçrama gözlüğü ve eldiven dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipmanı giyin. Bu laboratuvar için tüm çözeltiler kimyasal bir davlumbazda hazırlanmalıdır.
   • 100 mL'lik 1 M NaOH çözeltisi hazırlayın. not: NaOH güçlü bir şekilde aşındırıcıdır, bu nedenle onu kullanırken dikkatli olun.
   • 4 g katı NaOH ölçün ve 125 mL'lik bir Erlenmeyer şişesine dökün. Ardından, şişeye 50 mL deiyonize su ekleyin. NaOH'yi çözmek için karışımı bir karıştırma plakası üzerinde karıştırın.
   • 100 mL'lik bir polietilen şişeyi '1 M NaOH' olarak etiketleyin. NaOH çözündüğünde ve çözelti homojen göründüğünde, 50 mL daha deiyonize su ekleyin. Ardından, karıştırma çubuğunu alın ve çözeltiyi etiketli şişeye aktarın. Kapaklı şişeyi eğitmen başlığının arkasına yerleştirin.
   • Deiyonize suda 10 mL 0.56 mM nötr kırmızı çözelti hazırlayın. 1.6172 mg nötr kırmızıyı 10 mL'lik hacimsel bir şişeye ölçün.
   • Şişeyi yaklaşık 2/3 oranında deiyonize su ile doldurmak için bir pipet kullanın. Şişeyi plastik parafin filmle örtün ve karışımı nötr kırmızı eriyene kadar çalkalayın. Ardından filmi çıkarın ve şişeyi işaretli çizgiye kadar doldurun. Şişeye bir mikro karıştırma çubuğu yerleştirin ve çözeltiyi homojen görünene kadar karıştırın.
   • 20 mL'lik bir şişeyi '0,56 mM nötr kırmızı' olarak etiketleyin ve çözeltiyi şişeye aktarın. Şişeyi kapatın ve buzdolabında saklayın.
   • 198 mg protein tartarak başlayarak, aynı şekilde 10 mL 0.66 mM riboflavin bağlayıcı protein çözeltisi hazırlayın. Solüsyonu etiketli 20 mL'lik bir şişeye aktarın ve solüsyonu buzdolabında saklayın.
   • Bir dizi arabellek hazırlayın veya edinin. Burada, örnek olarak 1 M NaOH ile ayarlanmış 100 mL 50 mM pH 6.5 monosodyum fosfat tamponunun hazırlanmasını inceleyeceğiz.
   • 0.5995 g susuz monosodyum fosfatı 125 mL'lik bir Erlenmeyer şişesine ölçün. Şişeye 80 mL deiyonize su ekleyin ve karışımı karıştırmaya başlayın.
   • Karışım karışırken bir dijital pH metreyi açın ve kalibre edin.
   • Tuz çözüldüğünde ve çözelti homojen göründüğünde, pH sensörünü tampona sıkıştırın ve okumanın stabilize olmasını bekleyin.
   • 1 M NaOH çözeltisinin oda sıcaklığına soğuduğunu onaylayın. Ardından, tampon pH 6.5'e ulaşana kadar pH'ın stabilize olmasını sağlamak için karıştırma tamponu çözeltisine yavaşça NaOH ekleyin. Bu sadece 1 veya 2 mL NaOH alabilir. Ardından karıştırma motorunu kapatın, pH probunu durulayın ve karıştırma çubuğunu geri alın.
   • pH ayarlı tamponu temiz bir 100 mL hacimsel şişeye dökün ve çözeltiyi deiyonize su ile 100 mL işaretine getirin. Şişeyi plastik parafin film ile kapatın ve çözelti homojen görünene kadar ters çevirin.
   • Temiz bir 125 mL polietilen şişeyi '50 mM monosodyum fosfat tampon pH 6.5' olarak etiketleyin. Çözeltiyi şişeye aktarın ve kapatın. Arabelleği eğitmen başlığında saklayın.
   • pH'ı ayarlamak için uygun şekilde 1 M NaOH veya 2 M HCl kullanarak benzer şekilde ek tamponlar hazırlayın. Kabaca aynı iyonik kuvveti elde etmek için tampon konsantrasyonlarını gerektiği gibi değiştirin.
   • Bittiğinde, 1 M NaOH'yi aşındırıcı bir dolapta saklayın, cam malzemeleri ve ekipmanı standart prosedürlerinizi kullanarak temizleyin ve tek kullanımlık malzemeleri laboratuvar çöpüne atın.
2. Laboratuvarın HazırlanmasıExpand
   • Analitik terazi alanına bir susuz monosodyum fosfat kabı getirin ve yeterli miktarda tartım kağıdı, laboratuvar mendili ve temiz spatula olduğundan emin olun.
   • Her laboratuvar istasyonunda aşağıdaki laboratuvar ekipmanlarını ve cam malzemeleri belirleyin (öğrencilerin çiftler halinde çalışmasını öneririz):

     1 Karıştırma plakası

     Termometre kelepçeli 1 laboratuvar standı

     1 pH metre

     1 El tipi spektrofotometre

     2 Kalibrasyon tamponları

     2 adet 400 mL'lik beher

     2 adet 100 mL beher

     1 adet 25 mL beher

     1 adet 50 mL dereceli silindir

     2 adet 10 mL dereceli silindir

     1 Küçük saat camı

     1 Manyetik karıştırma çubuğu

     1 Huni

     1 Forseps

     1 Plastik yıkama şişesi

     1 adet 250 veya 500 mL kapaklı polietilen şişe

     1 rulo laboratuvar bandı

     2 Plastik pipet

     1 Etiketleme kalemi

     1 Kutu laboratuvar mendili

     1 1 mL uçlu mikropipet

     1 200 μL uçlu mikropipet

     10 adet 1,5 mL kapaklı küvet

   • Herkesin kolayca erişebilmesi için ek tek kullanımlık plastik pipetler belirleyin.
   • Tamponları içeren etiketli şişeleri veya şişeleri merkezi bir alana yerleştirin.
   • Her tampon için 1 mL'lik bir mikropipet etiketleyin ve mikropipetleri bir kutu pipet ucuyla birlikte karşılık gelen tamponlarla birlikte yerleştirin.
   • Nötr kırmızı ve protein çözeltilerini porsiyonlara ayırın. Üç adet 5 mL'lik test tüpünü 'nötr kırmızı' ve üç adet 5 mL'lik test tüpünü 'riboflavin bağlayıcı protein' olarak etiketleyin. Daha sonra, nötr kırmızı çözelti ve riboflavin bağlayıcı protein şişelerini buzdolabından alın ve uygun şekilde etiketlenmiş test tüplerine yaklaşık 2 mL nötr kırmızı çözelti ve 2 mL riboflavin bağlayıcı protein çözeltisi yerleştirin.
   • Öğrenci gruplarının test tüplerini paylaşabilmesi için nötr kırmızı ve protein solüsyonlarını belirleyin.