İnce Tabaka Kromatografisi

Kaynak: Lara Al Hariri ve Ahmed Basabrain, Massachusetts Amherst Üniversitesi, MA, ABD

1. Mobil Faz Bileşiminin Bileşik Ayırma Üzerindeki EtkileriExpand

   Laboratuvarın bu bölümünde, bileşiğin her bir çözücüde kat ettiği mesafeyi ölçerek saf heksan ve% 60 heksan ve% 40 etil asetat karışımının fenol, benzoik asit ve bütil fenil eteri ne kadar iyi ayırabildiğini karşılaştırmak için TLC'yi kullanacaksınız.

   • Laboratuvara başlamadan önce laboratuvar önlüğü, koruyucu gözlük ve nitril eldiven giyin. Not: Heksan ve etil asetat hem uçucu, hem toksik hem de yanıcıdır, bu nedenle onlarla her zaman çeker ocakta çalışın. Üzerlerinde solvent oluşursa eldivenlerinizi değiştirin, çünkü hekzan ve etil asetat nitril eldivenlere dakikalar içinde nüfuz edecektir.
   • Şimdi bir kağıt havlu alın ve tezgahın üzerine koyun. Plakanın en sonunda cımbız kullanarak bir TLC plakasını dikkatlice alın. not: Silika jele zarar vermemek veya kirletmemek için TLC plakalarını daima kenarlarından veya en üstten cımbızla tutun.
   • Silika jelde talaş veya çizik olup olmadığına bakın ve gerekirse yeni bir plaka alın. Sadece bir ucunda biraz ufalanma varsa sorun değil, çünkü bu üst kısım olabilir.
   • Tabağı çeker ocakınızdaki kağıt havlunun üzerine yerleştirin ve yanına bir metrik cetvel koyun. Silika jel üzerinde plakanın üst kısmından ~ 1 cm uzakta nazikçe küçük bir işaret yapmak için bir grafit kalem kullanın. İşaretin üzerindeki plakaya '100' yazın.
   • Ardından, plakayı her iki tarafta alttan 1 cm yukarıda nazikçe işaretleyin. Başlangıç çizgisini oluşturmak için alt işaretler arasında dikkatlice düz bir çizgi çizin.
   • Ardından, dış işaretler plakanın kenarlarından en az 0,5 cm uzakta olacak şekilde başlangıç çizgisine eşit aralıklı 3 küçük işaret ekleyin. not: Silika jelin burada zarar görmemesi önemlidir, bu nedenle kalemle çizerseniz yeni bir tabak hazırlayın.
   • Şimdi, laboratuvar not defterinizdeki TLC plakasının ana hatlarını izleyin ve plaka üzerindeki işaretleri tam olarak kopyalayın. Üç işareti 'fenol', 'benzoik asit' ve 'bütil fenil eter' olarak etiketleyin. Ayrıca plakanın üzerindeki işaretleri de etiketlemek isteyebilirsiniz.
   • Aynı şekilde '60/40' etiketli ikinci bir TLC plakası hazırlayın. Şimdi, etiketli plakaları ortak tezgaha getirin ve etanol içindeki 1 mg / mL fenol, benzoik asit ve bütil fenil eter çözeltilerini bulun.
   • Temiz bir kılcal damarı üç çözümden birine batırın. Kılcal damarı, başlangıç çizgisi ile o bileşiğin işareti arasındaki kesişme noktasına kısa ve hafif bir şekilde vurun. Her bileşik için iki kez görmelisiniz.
   • İkinci TLC plakanızda aynı solüsyonu tespit etmek için aynı kılcal damarı kullanın. Noktaların çapı 2 mm'den fazla olmamalıdır. Ardından, kılcal damarı atın ve şişeyi kapatın.
   • Plakalardaki diğer iki solüsyonu da aynı şekilde temiz kılcal damarlar kullanarak tespit edin. Çözeltileri çapraz kontamine etmemeye dikkat edin. Not: Bir nokta çok hafif veya çok küçükse, kurumasını bekleyin ve ardından aynı solüsyonu kuru noktanın üzerine yerleştirin. Nokta hala ıslaksa, kılcal hareket onu çok geniş ve seyreltik hale getirebilir.
   • Her plakada üç nokta oluşturduktan sonra, kılcal damarları atın ve plakaları kaputunuza geri getirin. Plakaları kururken düz durmaya devam edin.
   • Şimdi, 50 mL'lik bir kavanozu '%100 hekzan' olarak etiketleyin ve kavanozu, kapağını ve 10 mL dereceli silindiri çözücü davlumbazına getirin.
   • Dereceli silindirinizle 2 – 3 mL saf hekzan ölçün ve 0,62 – 0,7 cm derinliğe kadar doldurmak için kavanoza dökün. Şişeyi ve kavanozu kapatın ve çeker ocaklarınıza geri dönün.
   • İkinci bir 50 mL'lik kavanozu '%60 hekzan, %40 etil asetat' olarak etiketleyin ve onu ve temiz dereceli bir silindiri çözücü davlumbazına getirin. 60/40 karışımından 2 – 3 mL ölçün ve çeker ocaklarınıza geri dönün.
   • Çözücünün ve lekelerin göreceli konumunu karşılaştırmak için plakaları kavanozların yanına koyun. Çözücü seviyesi, her plaka için noktaların altında olmalıdır.
   • Ardından, üç parça filtre kağıdı alın, her kavanoza duvara dik olarak bir filtre kağıdı koyun ve ardından kavanozları sıkıca kapatın.
   • Daha sonra tanımlayabilmeniz için her plakayı işaretin üzerine getirin. Kavanozlardaki filtre kağıtlarının solvent ile doymuş hale geldiğini ve plakalardaki lekelerin tamamen kuru olduğunu onaylayın.
   • Şimdi, %100 hekzan kavanozu açın ve cımbız kullanarak 100'lük plakayı kavanoza nazikçe yerleştirin ve plakayı çözücüye girerken çözücü yüzeyiyle aynı seviyede tutun. Kavanozu sıkıca kapatın, plakayı itmemeye dikkat edin.
   • Çözücü plakadan yukarı çıkarken kavanozu sabit bırakın. Saf hekzanda gelişme genellikle yaklaşık 7 – 10 dakika sürer. Çözücünün üste ulaşmadığından emin olmak için plakaya bir göz atın.
   • Saf hekzan çözücü ön kısmı plakanın üstünden yaklaşık 1 cm uzakta olduğunda, cımbız kullanarak geri alın. Silika jel yukarı bakacak şekilde kağıt havlunun üzerine koyun ve çözücünün ön tarafını plaka boyunca bir çizgi ve kurşun kalemle hızlı bir şekilde işaretleyin. Çözücü buharlaşırken plakayı düz bir şekilde bırakın.
   • Diğer plakayı da aynı şekilde 60/40 eluent'e yerleştirin. 60/40 plakanın solvent önü üstten yaklaşık 1 cm uzakta olana kadar bekleyin ve ardından geri alın ve solvent cephesini aynı şekilde hızlı bir şekilde işaretleyin.
   • %100 hekzan plaka tamamen kuruduğunda, cımbızla alın ve ortak tezgahtaki UV lambasına bir kalemle getirin.
   • Plakayı lambanın altına yerleştirin ve UV ışığıyla aydınlatın. Silika jel tabakasındaki bir floresan işaretleyici nedeniyle plaka yeşil renkte yanacaktır. Koyu lekeler bileşiklerdir.
   • Çok uzağa gitmemiş olsalar bile her noktayı kurşun kalemle dikkatlice çizin.
   • Ardından, lambayı kapatın ve plakanızı iyot geliştirme başlığına getirin. İyot odasını açın. Plakayı iyot haznesine nazikçe dik olarak yerleştirmek için cımbız kullanın ve ardından hazneyi tekrar kapatın.
   • İyot buharının noktalarda kalması için 3 – 4 dakika bekleyin. Ardından, plakayı cımbızla alın, hazneyi kapatın ve plakadaki kahverengi ve sarı lekeleri ana hatlarıyla belirtin. Bu lekeler solacaktır, bu yüzden onları hızlı bir şekilde işaretleyin.
   • Kuru 60/40 plakayı UV ışığı altında ve ardından aynı şekilde iyot buharı ile görselleştirin. not: Yan reaksiyonları önlemek için, plakaları iyota maruz bırakmadan önce daima UV ışığı altında kontrol edin.
   • Şimdi, noktaları ve çözücü cephelerini laboratuvar not defterinizdeki plakaların ilgili çizimlerine hassas bir şekilde kopyalayın. Her plaka için, çözücü cephesinin başlangıç çizgisine göre yüksekliğini ölçün ve kaydedin.
   • Son olarak, her noktanın merkezi ile başlangıç çizgisi arasındaki mesafeyi ölçün ve laboratuvar not defterinize kaydedin. Artık laboratuvarın bir sonraki bölümüne geçebilirsiniz.
2. Bilinmeyen Bileşik TanımlamaGenişlet

   Laboratuvarın ikinci yarısında, bilinmeyen bir analjezikte ne olduğunu bulmak için TLC'yi kullanacaksınız. Bu bileşiklerden bir veya daha fazlasını içerebilir: aspirin, kafein ve asetaminofen. Bu bileşikler oldukça polardır, bu nedenle eluent olarak %90 etil asetat ve %10 heksan içeren önceden hazırlanmış bir karışım kullanacaksınız.

   Üç referans bileşiğini ve bilinmeyeni aynı plakada çalıştıracaksınız. Daha sonra, bilinmeyeni tanımlamak için referans bileşiklerin Rf değerlerini kullanacaksınız. İlk olarak, başlamadan önce hangi bilinmeyen materyali analiz etmekle görevlendirildiğinizi iki kez kontrol edin.

   • Şimdi, davlumbazın içine temiz bir kağıt havlu koyun ve yeni bir TLC plakası edinin. Üst işareti ve başlangıç çizgisini daha önce olduğu gibi hazırlayın. Dış işaretlerin kenarlardan en az 0,5 cm uzakta olduğundan emin olarak plaka üzerinde eşit aralıklarla dört kene yapın.
   • Laboratuvar not defterinize plakanın tam bir kopyasını çizin ve onay işaretlerini 'aspirin', 'asetaminofen', 'kafein' ve 'bilinmeyen' olarak etiketleyin.
   • Şimdi, tabağınızı ortak tezgaha getirin. Aspirin, asetaminofen, kafein ve bilinmeyenlerin spot çözeltileri, her çözelti için temiz bir kılcal damar kullanarak uygun işaretlere atandı. not: Bilinmeyen çözeltiyi tespit ettiğinizde, kılcal damarınızı bilinmeyen maddeden çözünmeyen malzeme ile tıkamasını önlemek için kılcal damarı çözelti şişesine çok fazla daldırmayın.
   • Plakayı çeker ocaklarınıza geri getirmeden önce kılcal damarları atın ve şişeleri kapatın. Kurutmayı bitirmek için plakayı bir kağıt havlu üzerine yerleştirin.
   • Ardından, temiz bir 50 mL vidalı kavanozu '%90 etil asetat, %10 heksan' olarak etiketleyin ve temiz dereceli bir silindirde solvent davlumbazına getirin.
   • 90/10 solüsyonundan 2 – 3 mL'yi kavanoza koyun ve çeker ocakınıza geri dönün. Solvent seviyesinin plaka üzerindeki noktaların altında olacağını onaylayın. Ardından, temiz bir filtre kağıdını kavanozun içine dik olarak yerleştirin ve sıkıca kapatın.
   • TLC plakası kuruduktan ve filtre kağıdı doygunluğa ulaştığında, plakayı dikkatlice çözücünün içine yerleştirin. not: Bunu yaparken plakayı düz tutmak çok önemlidir. Çözücü cephesi diyagonal ise, kat edilen çözücü mesafesi her nokta için farklı olacaktır, bu da bilinmeyeni referans noktalarıyla görsel olarak karşılaştırmayı imkansız hale getirir.
   • Çözücü ön kısmının plakanın üst kısmından 1 cm uzağa ulaşmasını bekleyin. Ardından plakayı alın, çözücü önünü işaretleyin ve düz yatarken kurumasını bekleyin.
   • Plaka kuruduktan sonra, UV ışığıyla ve iyot odasında görselleştirin ve noktaları kurşun kalemle çizin.
   • Bilinmeyen malzeme bileşiklerin bir karışımı olabilir, bu nedenle üç referans noktasının hepsiyle aynı hizada olan noktaları dikkatlice arayın.
   • Ardından, noktaları laboratuvar not defterinizdeki plakanın çizimine tam olarak kopyalayın. Çözücü cephesinin yüksekliğini ve başlangıç çizgisine göre noktaları ölçün ve kaydedin.
   • İşiniz bittiğinde, solvente doymuş filtre kağıtlarını kavanozlardan alın ve kaputta kurumaya bırakın.
   • Kalan solventleri standart organik atığa dökün, cam eşyalarınızı laboratuvarınızın olağan yöntemlerini izleyerek yıkayın ve laboratuvar ekipmanınızı kaldırın.
   • Kullanılmış TLC plakalarını, destek malzemesine bağlı olarak laboratuvar çöpüne veya cam atıklarıyla birlikte atın.
   • Son olarak, filtreler kuruduktan sonra kalan çöplerle birlikte atın.
3. ResultsExpand
   • %100 heksan ile ayrıştırılmış fenol, benzoik asit ve bütil fenil eter_{için RF değerlerini} hesaplayın. TLC plakasındaki her bileşik için, başlangıç çizgisinden noktasının merkezine olan mesafeyi ölçün. Ardından, bu değeri başlangıç çizgisinden çözücü cephesine olan mesafeye bölün.
   • Yalnızca bütil fenil eter, başlangıç çizgisinden ölçülebilir bir mesafe taşıdı, bu da en az polar olmasıyla tutarlıdır. _{Etkili ayırma} için, RF değerleri 0,3 – 0,7 arasında farklılık göstermelidir. Böylece, fenol ve benzoik asidin, saf hekzan gibi apolar bir çözücü ile etkili bir şekilde ayrılamayacak kadar polar olduğu sonucuna varabiliriz.
   • 60/40 hekzan ve etil asetat karışımında çalıştırdığınız plaka için R_f değerlerini hesaplayın. Etil asetat orta derecede polar bir çözücüdür, bu nedenle bileşikler daha uzağa hareket eder ve plaka üzerinde daha uzağa yerleştirilir.
   • Ayırma sırası, en polar bileşik olan benzoik asidin silika jel için en yüksek afiniteye sahip olduğunu, en az polar bileşik olan bütil fenil eterin ise silika jel için en düşük afiniteye sahip olduğunu göstermektedir. Bu, daha az polar bileşiklerin polar durağan fazlarda daha uzağa gittiği varsayımıyla tutarlıdır.
   • Üçüncü tabağınıza bakın ve aspirin, asetaminofen ve kafein için R_f değerlerini hesaplayın. Üçünün en polar kompleksi olan kafein en az seyahat etti. Asetaminofen ikinci en uzağa giderken, en az polar olan aspirin en çok seyahat etti.
   • Son olarak, bilinmeyen malzemenizdeki bileşikleri, noktasını veya noktalarını üç referans noktasıyla karşılaştırarak tanımlayın.