Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Kaynak: Lara Al Hariri ve Ahmed Basabrain, Massachusetts Amherst Üniversitesi, MA, ABD
Bu deneyde, yeşil gıda boyasını erioglaucine ve tartrazine adı verilen mavi ve sarı boyalara ayırmak için kolon kromatografisini kullanacaksınız. İlk olarak, silika jel için daha zayıf bir afiniteye sahip boyayı çıkarmak için %95 etanol kullanacaksınız. Ardından, ikinci boyayı kolondan suyla yıkayacaksınız. Saflaştırılmış boyaları geri kazanmak için, her bir boya bandını kolondan çıkarken toplayacaksınız. Toplanan bu hacimlere kesirler denir.
| Renk | Hacim (mL) | |
| Etanol fraksiyonu | ||
| Su fraksiyonu |
Bu deneyde, etanolün mavi erioglausini zamanında boşalttığını gördünüz, ancak sarı tartrazin için etkili bir eluent değildi. Yeşil boyanın kağıt kromatografisi de benzer sonuçlar göstermektedir. Bu nedenle, erioglausinin silika jel için tartrazinden daha düşük bir afiniteye sahip olduğu sonucuna varıyoruz.
Şimdi, boyayı ayrı ayrı elüte etmek için iki çözücü kullanmanın avantajlarını düşünün. Su, etanolden daha polardır, bu nedenle her iki boyayı da tek başına etanolden daha hızlı bir şekilde ayrıştıracağını varsayıyoruz. Sadece su kullanmış olsaydınız genel olarak daha az çözücü kullanmış olsanız da, ayırma daha kötü olurdu ve saf fraksiyonların toplanmasını zorlaştırırdı.
Alternatif olarak, erioglaucine topladıktan sonra etanol kullanmaya devam edebilirdiniz, ancak tartrazini bu şekilde çıkarmak uzun zaman ve çok fazla etanol alacaktı. Erioglaucine ayrıştırıldıktan sonra eluentin suya geçirilmesi zamandan tasarruf sağladı ve saflıktan ödün vermeden solvent israfını en aza indirdi.
Bu deneyde, yeşil gıda boyasını erioglaucine ve tartrazine adı verilen mavi ve sarı boyalara ayırmak için kolon kromatografisini kullanacaksınız. İlk olarak, silika jel için daha zayıf bir afiniteye sahip boyayı çıkarmak için %95 etanol kullanacaksınız. Ardından, ikinci boyayı kolondan suyla yıkayacaksınız.
Saflaştırılmış boyaları geri kazanmak için, her bir boya bandını kolondan çıkarken toplayacaksınız. Toplanan bu hacimlere kesirler denir. Şimdi başlayalım.
Başlamak için bir laboratuvar önlüğü, koruyucu gözlük ve bir çift nitril eldiven giyin. Ardından, size verilen sütunu veya büreti merkezi tedarik alanına getirin. Bir parça pamuk veya cam yünü alın ve sütununuzun üstüne bastırın.
Vananın hemen üzerindeki sütunu tıkamak için aşağı itmek için uzun, kör uçlu bir tel veya çubuk kullanın. Pamuğun stabil olması gerekir, ancak çok yoğun bir şekilde paketlemeyin, çünkü çözücünün içinden kolayca geçmesi gerekir. Musluğun fişe takılmadan serbestçe dönebildiğinden emin olun.
Şimdi, sütunu çalışma alanınıza geri getirin ve bir laboratuvar standına bir büret kelepçesi takın. Sütunu, altında yaklaşık dört inç boşluk olacak şekilde dik olarak sıkıştırın. Musluğun kapalı olduğundan emin olun.
100 mililitrelik bir kabı atık olarak etiketleyin ve sütunun altına yerleştirin. Ardından, darası alınmış bir tartı teknesinde 1 gram kum ölçün ve tekrar tezgaha getirin. Ardından, sütunu pamuk tapanın üst kısmının yaklaşık yarım santimetre üzerinde işaretleyin.
Sütunun üstüne küçük bir huni yerleştirin ve tapanın üzerinde yarım santimetre derinliğinde bir tabaka olacak şekilde huniden yeterince kum dökün. Bu, silika jelin tapadan fraksiyonlarınıza geçmesini önleyecektir. Huniyi çıkarın ve kumu eşit şekilde dağıtmak için sütuna hafifçe vurun.
Şimdi eluentlerinizi hazırlayalım. 50 mililitrelik bir beheri ve 50 mililitrelik dereceli silindiri su olarak etiketleyin'Dereceli silindir ile 50 mililitre deiyonize su ölçün ve behere dökün. Daha sonra, başka bir 50 mililitrelik beheri ve 50 mililitrelik dereceli bir silindiri etanol olarak etiketleyin ve 50 mililitre %95 etanol ölçün ve bu kabın içine dökün.
Şimdi, dört veya beş temiz Pasteur pipeti ve bir pipet ampulü edinin. Kolonun iç duvarları boyunca yedi ila sekiz mililitre etanolü nazikçe pipetleyin. Bu çözücü tabakası, kumu rahatsız etmeden bu silika jel bulamacını kolona dökmenize izin verecektir.
Vanayı açın ve vanadan havayı boşaltmak ve çözücünün tapadan kolayca aktığını doğrulamak için yaklaşık bir mililitre etanolü atık kabına boşaltın. Kumda ve tapada kuru leke olmadığından emin olun ve sıkışan hava kabarcıklarını çıkarmak için sütunun yan tarafına hafifçe vurun. Daha sonra, sütunun üstüne temiz bir huni yerleştirin ve üçüncü bir 50 mililitrelik beher silika jel bulamacını etanol içinde etiketleyin ve 5 gram silika jel tozunu dikkatlice tartın ve etiketli beherinize dökün.
Ardından, silika jeli, bir cam çubuğu ve etanol dereceli silindirinizi etanol dağıtım başlığına getirin. 18 mililitre% 95 etanol ölçün ve kabın içine dökün. Doku tutarlı olana ve kuru lekeler veya toz topakları kalmayana kadar karışımı cam çubukla karıştırın.
Bu genellikle yaklaşık bir dakika sürer. Bulamaç, meyilli gibi kalın olmalı, ancak yine de kolayca akmalıdır. Bulamaç çok sertse, huniyi tıkayabilir veya kolondaki hava kabarcıklarını sıkıştırabilir.
Toz etanol içinde tamamen süspanse edildiğinde, tezgahınıza getirin. Bulamacı dokusu tekrar tutarlı olana kadar karıştırın ve hemen sütuna dökün. Hava kabarcıklarından kurtulmak için silika jel yerleşirken kolonun kenarlarına hafifçe vurun.
Beheri 1 veya 2 mililitre etanol ile durulayın. Durulamayı sütuna dökün ve ardından huniyi çıkarın ve bir kenara koyun. Duvarlara yapışmış parçacıkları yıkamak için kolonun içi boyunca etanol pipetleyin.
Ardından, menisküs silika jelin üst kısmının hemen üzerine gelene kadar çözücüyü boşaltın. Şimdi, yaklaşık 0,8 mililitre yeşil gıda boyası çözeltisi elde etmek için 5 veya 10 mililitrelik dereceli bir silindir kullanın. Silika jelin üst kısmına eşit şekilde 5 ila 7 damla boya solüsyonunu nazikçe uygulamak için temiz bir pipet kullanın.
Gerekirse, silika jeli kapalı tutmak için birkaç damla etanol ekleyin. Boyanın ıslanmasını beklerken, iki temiz 50 mililitrelik kabı şu şekilde etiketleyin: etanol fraksiyonu've su fraksiyonu'Kolonun altındaki atık beheri etanol fraksiyon beheri ile değiştirin. Daha sonra, silika jeli rahatsız etmemek için ilk mililitreyi iç duvarlar boyunca pipetleyerek sütunu etanol ile doldurun.
Ardından, musluğu kısmen açın ve solvent seviyesi her 15 ila 20 saniyede bir yaklaşık 1 mililitre düşene kadar ayarlayın. Etanolün akmasını sağlamak için sütunu periyodik olarak yeniden doldurun. Silika jelin üzerinde her zaman en az bir santimetre çözücü olduğundan emin olun.
Sarı ve mavi bantları ayrılırken izleyin. Uzaklaşmanız gerekiyorsa, siz yokken sütunun kurumaması için vanayı kapatın. Bir seferde bir dakikadan fazla durmaktan kaçının, çünkü bileşik bantlar genişlemeye başlayacaktır.
Daha hızlı hareket eden boyanın kolondan ayrılması genellikle yaklaşık 20 ila 35 dakika sürer. Etanol fraksiyon beherinde daha hızlı hareket eden boyanın tamamını topladıktan sonra, durma saatini kapatın, etanol fraksiyonunu bir kenara koyun ve atık beheri kolonun altına koyun. Menisküs silika jelin üst kısmının hemen üzerine gelene kadar çözücüyü boşaltın.
Ardından, atık kabı su fraksiyonu kabı ile değiştirin. Kolonun üstünü deiyonize suyla doldurmak için temiz bir pipet kullanın. Ardından, musluğu her 15 ila 20 saniyede bir yaklaşık 1 mililitre hızında suyun kolondan akmasına izin verecek kadar açın.
İkinci renk bandı sütunu tamamen terk edene kadar sütunu gerektiği kadar suyla doldurun. Bu genellikle 15 ila 25 dakika daha sürer. Ardından, vanayı kapatın ve su fraksiyonu kabını atık beher ile değiştirin.
Şimdi sütunu tamamen boşaltın ve musluğu açık bırakın. Etanol ve su fraksiyonlarının renklerini laboratuvar defterinize kaydedin. Fraksiyonları karşılık gelen 50 mililitre dereceli silindirlere dökün ve her fraksiyonun hacmini kaydedin.
Ardından, vanayı kapatın ve sütunu bir çeker ocak haline getirin. Silika jelin kuruması için sütunu davlumbaza dik olarak sıkıştırın. Eğitmeniniz size ya sütunu nasıl temizleyeceğinizi söyleyecek ya da laboratuvardan sonra ona nasıl bakacağınızı söyleyecektir.
Şimdi, toplanan fraksiyonları ve kalan etanol, su ve boya çözeltisini kanalizasyona yıkayın ve cam eşyalarınızın geri kalanını her zamanki gibi temizleyin. Kullanılmış Pasteur pipetlerini cam çöpüne atın. Kullanılmış kağıt havluları ve tartı teknesini laboratuvar çöpüne atın ve ayrılmadan önce tezgahı temizleyin.
Bu deneyde, etanolün mavi erioglausini zamanında boşalttığını gördünüz, ancak sarı tartrazin için etkili bir eluent değildi. Yeşil boyanın kağıt kromatografisi de benzer sonuçlar göstermektedir. Bu nedenle, erioglausinin silika jel için tartrazinden daha düşük bir afiniteye sahip olduğu sonucuna varıyoruz.
Şimdi, boyayı ayrı ayrı elüte etmek için iki çözücü kullanmanın avantajlarını ele alalım. Su, etanolden daha polardır, bu nedenle her iki boyayı da tek başına etanolden daha hızlı bir şekilde ayrıştıracağını varsayıyoruz. Sadece su kullanmış olsaydınız genel olarak daha az çözücü kullanmış olsanız da, ayırma daha kötü olurdu ve saf fraksiyonların toplanmasını zorlaştırırdı.
Alternatif olarak, erioglaucine topladıktan sonra etanol kullanmaya devam edebilirdiniz, ancak tartrazini bu şekilde çıkarmak uzun zaman ve çok fazla etanol alacaktı. Erioglaucine ayrıştırıldıktan sonra eluentin suya geçirilmesi zamandan tasarruf sağladı ve saflıktan ödün vermeden solvent israfını en aza indirdi.
