5.11

Raportör Genler

11.6K views02:11 min

Araştırmacılar, ilgilenilen bir genin ne zaman ve nerede ifade edildiğini belirlemek için muhabir genleri kullanırlar. Bir raportör gen, bilinen bir enzimatik aktiviteye sahip bir protein veya floresan olan bir protein gibi izlenebilen bir proteini kodlar.

Gen ekspresyonu, DNA'daki bir genin kodlama bölgesinin yukarı veya aşağı akışında bulunan cis-düzenleyici diziler tarafından kontrol edilir.

Gen ekspresyonunun paterni ve zamanlaması, cis-düzenleyici bir ilgilenilen dizinin kontrolü altında bir raportör gen ile rekombinant DNA oluşturularak ve bunu hücrelere veya bir organizmaya sokarak belirlenebilir.

Bu rekombinant gen, farklı hücre tiplerine sokulur ve hem ilgilenilen genin hem de raportör genin ifade edilmesine izin verilir.

İlgilenilen gen ve raportör gen aynı cis-düzenleyici diziye sahip olduğundan, aynı hücrelerde ve aynı anda eksprese edilirler. Bu nedenle, raportör genin ifadesini izleyerek, bir bilim adamı ilgilenilen genin nerede ifade edildiğini izleyebilir.

İyi bilinen raportör genlerden biri, yeşil floresan proteini veya GFP adı verilen bir proteini kodlayan gendir.

GFP, denizanası Aequorea victoria'da keşfedildi. Protein, ultraviyole ışık altında yeşil bir floresan üretir ve bu da araştırmacıların bir hücre içindeki konumunu izlemelerini sağlar.

Örneğin, C. elegans'ta β-tubulin ekspresyonunu incelemek için, β-tubulin geninin kodlama dizisi gfp geni ile değiştirildi.

GFP gen ekspresyonu artık β-tubulin geni için promotörün kontrolü altındadır.

Bu rekombinant DNA, bir mikroenjeksiyon kullanılarak solucana sokuldu ve gen, β-tubuline benzer şekilde eksprese edildi.

GFP'nin yeri floresan mikroskobu kullanılarak izlendi. Dokunma reseptörü nöronlarında GFP floresansı gösterildiğinden, bu muhtemelen β-tübülinin eksprese edildiği bir bölgedir.

Overview

Loading...

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Raportör genler, genellikle ilgilenilen bir gene etiketlenen bir tür protein kodlayan gendir. Bir hedef hücrenin içine girdikten sonra raportör genler, ilgilenilen genle birlikte ifade edildiklerinde genellikle floresans ve lüminesans gibi görsel olarak tanımlanabilir özellikler üretir. Böylece raportör genler, bir organizmada ilgilenilen genlerin varlığını veya yokluğunu "rapor eder", gen ifade modelini belirler veya hücredeki bir DNA segmentinin veya proteinin fiziksel konumunu izler.

Yaygın olarak kullanılan raportör genler şunlardır: GFP (yeşil floresan protein geni), lacZ (β-galaktosidaz geni), RFP (kırmızı floresan protein geni) ve Luc (lusiferaz geni). GFP'yi ifade eden hücreler, mavi dalga boylarından ultraviyole aralığına kadar uyarıldığında yeşil renkte parlarken, RFP'yi ifade eden hücreler, 488 nm veya 532 nm dalga boyları tarafından uyarıldığında kırmızı renkte parlar. Luc genini ifade eden hücreler, ışık üretmek için lusiferin ile reaksiyonu katalize eden lusiferaz enzimleri üretir. lacZ geni, E.coli'de kullanılan en yaygın raportör gendir. X-gal substratı içeren bir ortamda büyüdüğünde bakterilerin mavi görünmesine neden olan bir β-galaktosidaz enzimi üretir.

Promoter aktivitesini incelemek için raportör genler

Raportör genler gen ifadesi ve lokalizasyonunun araştırılmasında kullanılmasının yanı sıra, promotörlerin gücünün araştırılmasına da yardımcı olabilirler. Bu, bir raportör genin promotörün aşağı akışına bir plazmid içine yerleştirilmesi ve daha sonra bunun memeli hücresine yerleştirilmesiyle yapılır. Raportör genin ifadesi, promoterin aktivitesini izler. Raportör gen ifadesi yüksekse promoterin güçlü bir promoter olduğu söylenir; tersine, raportör gen ifadesi düşükse zayıftır.

Raportör gen, bir plazmit içindeki promotörün aşağı akışına yerleştirildiğinde transfeksiyon verimliliğinin ölçülmesine de yardımcı olur. Rekombinant plazmit bir memeli hücresine transfekte edilir ve ifadesi, hücrenin başarıyla transfekte edildiğini gösterir. Rekombinant plazmit tarafından üretilen protein miktarı transfeksiyon verimliliğini gösterir.

Transcript

Loading...

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Araştırmacılar, ilgilenilen bir genin ne zaman ve nerede ifade edildiğini belirlemek için muhabir genleri kullanırlar. Bir raportör gen, bilinen bir enzimatik aktiviteye sahip bir protein veya floresan olan bir protein gibi izlenebilen bir proteini kodlar.

Gen ekspresyonu, DNA'daki bir genin kodlama bölgesinin yukarı veya aşağı akışında bulunan cis-düzenleyici diziler tarafından kontrol edilir.

Gen ekspresyonunun paterni ve zamanlaması, cis-düzenleyici bir ilgilenilen dizinin kontrolü altında bir raportör gen ile rekombinant DNA oluşturularak ve bunu hücrelere veya bir organizmaya sokarak belirlenebilir.

Bu rekombinant gen, farklı hücre tiplerine sokulur ve hem ilgilenilen genin hem de raportör genin ifade edilmesine izin verilir.

İlgilenilen gen ve raportör gen aynı cis-düzenleyici diziye sahip olduğundan, aynı hücrelerde ve aynı anda eksprese edilirler. Bu nedenle, raportör genin ifadesini izleyerek, bir bilim adamı ilgilenilen genin nerede ifade edildiğini izleyebilir.

İyi bilinen raportör genlerden biri, yeşil floresan proteini veya GFP adı verilen bir proteini kodlayan gendir.

GFP, denizanası Aequorea victoria'da keşfedildi. Protein, ultraviyole ışık altında yeşil bir floresan üretir ve bu da araştırmacıların bir hücre içindeki konumunu izlemelerini sağlar.

Örneğin, C. elegans'ta β-tubulin ekspresyonunu incelemek için, β-tubulin geninin kodlama dizisi gfp geni ile değiştirildi.

GFP gen ekspresyonu artık β-tubulin geni için promotörün kontrolü altındadır.

Bu rekombinant DNA, bir mikroenjeksiyon kullanılarak solucana sokuldu ve gen, β-tubuline benzer şekilde eksprese edildi.

GFP'nin yeri floresan mikroskobu kullanılarak izlendi. Dokunma reseptörü nöronlarında GFP floresansı gösterildiğinden, bu muhtemelen β-tübülinin eksprese edildiği bir bölgedir.

Explore More Videos

Protein coding Gene

Gene Of Interest

Gene Expression Pattern

Green Fluorescent Protein Gene

Red Fluorescent Protein Gene

Luciferase Gene

Promoter Activity