16.11:

Muhabir Genleri

JoVE Core
Moleküler Biyoloji
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir.  Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
JoVE Core Moleküler Biyoloji
Reporter Genes
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

10,837 Views

02:11 min
April 07, 2021

Raportör genler, genellikle ilgilenilen bir gene etiketlenen bir tür protein kodlayan gendir. Bir hedef hücrenin içine girdikten sonra, raportör genler genellikle ilgilenilen gen ile birlikte ifade edildiğinde floresan ve lüminesans gibi görsel olarak tanımlanabilir özellikler üretir. Bu nedenle, raportör genler, bir organizmada ilgilenilen genlerin varlığını veya yokluğunu “rapor eder”, gen ekspresyon modelini belirler veya hücredeki bir DNA segmentinin veya proteinin fiziksel konumunu izler.

Yaygın olarak kullanılan raportör genler şunlardır: GFP (yeşil floresan protein geni), lacZ (β-galaktosidaz geni), RFP (kırmızı floresan protein geni) ve Luc (lusiferaz geni). GFP’yi ifade eden hücreler, mavinin dalga boyları tarafından ultraviyole aralığına kadar uyarıldığında yeşil renkte parlarken, RFP’yi ifade edenler 488 nm veya 532 nm dalga boyları ile uyarıldığında kırmızı renkte parlar. Luc genini ifade eden hücreler, ışık üretmek için lusiferin ile reaksiyonu katalize eden lusiferaz enzimleri üretir. LacZ geni, E.coli’de kullanılan en yaygın raportör gendir. X-gal substratı içeren bir ortamda büyütüldüğünde bakterilerin mavi görünmesine neden olan bir β-galaktosidaz enzimi üretir.

Promotör aktiviteyi incelemek için raportör genler

Gen ekspresyonu ve lokalizasyonun incelenmesinde raportör genlerin kullanılmasının yanı sıra, promotörlerin gücünün incelenmesinde de yardımcı olabilirler. Bu, promotörün aşağı akışında bir raportör genin bir plazmide yerleştirilmesi ve daha sonra onu memeli hücresine sokmasıyla yapılır. Raportör genin ekspresyonu, promotörün aktivitesini izler. Raportör gen ekspresyonu yüksekse, promotörün güçlü bir promotör olduğu söylenir; Raportör gen ekspresyonu düşükse zayıftır.

Raportör gen, bir plazmid içinde promotörün aşağı akışına yerleştirildiğinde, transfeksiyon verimliliğinin ölçülmesinde de yardımcı olur. Rekombinant plazmit, bir memeli hücresine transfekte edilir ve ekspresyonu, hücrenin başarılı bir şekilde transfekte edildiğini gösterir. Rekombinant plazmit tarafından üretilen protein miktarı, transfeksiyon verimliliğini gösterir.