16.16: Transgenik Bitkiler

Transgenic Plants
JoVE Core
Molecular Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Core Molecular Biology
Transgenic Plants
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

7,095 Views

02:50 min
April 07, 2021

Overview

Transgenez adı verilen rekombinant DNA teknolojisi genellikle yabancı bir gen eklemek veya bir organizmadan zararlı bir geni çıkarmak için kullanılır. Bu tür genetik olarak değiştirilmiş organizmalara transgenik organizmalar denir.

İlk transgenik bitki, 1983 yılında geliştirilen ve tütün mozaik virüsüne karşı direnç gösteren bir tütün bitkisiydi. O zamandan beri, bir mahsul bitkisinin tarımsal, süs ve bahçecilik değerini iyileştirmek için birçok transgenik bitki geliştirilmiş ve ticarileştirilmiştir. Transgenik bitkiler, ekonomik açıdan önemli metabolitler veya proteinler üretmek için bir biyoreaktör olarak da kullanılabilir.

Genlerin bitkilere aktarılmasının fiziksel yöntemleri

Elektroporasyon ve mikroprojektil bombardımanı gibi birçok yöntem, yabancı bir geni bir bitki protoplastına aktarmak için kullanılabilir. Elektroporasyon sırasında, bir cihaz protoplast süspansiyonuna yüksek voltaj darbeleri verir. Bu, protoplastın geçirgenliğini arttırır ve yabancı DNA’nın hücreye girmesine ve bitki genomuna entegre olmasına izin verir.

Buna karşılık, mikromermi bombardımanı veya biyolistik yöntem sırasında, tungsten veya altından yapılmış küresel parçacıklar (mikromermiler), ilgilenilen plazmit taşıyan gen ile kaplanır. Kaplanmış parçacıklar daha sonra parçacık tabancası adı verilen bir aletle 300 ila 600 m/s’ye hızlandırılır. Cihaz, plazmid kaplı parçacıkların bitki hücre duvarına nüfuz etmesine yardımcı olan itme kuvveti sağlamak için yüksek basınçlı helyum gazı kullanır. Hücrenin içine girdikten sonra, ilgilenilen gen bitki genomuna entegre olur. Bu yöntem, DNA’yı kallus kültürlerine, meristematik dokulara, olgunlaşmamış embriyolara, bitki hücresi süspansiyonlarına vb. sokmak için kullanılabilir.

Transgenik bitkilerin uygulamaları

Rekombinant DNA teknolojisi, haşere ve virüse dirençli bitkilerin geliştirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu teknik ayrıca tohumların lipit, nişasta ve protein içeriğini değiştirmede de yardımcı olur.

Örneğin, altın pirinç, gelişmiş besin değerine sahip genetiği değiştirilmiş bir pirinç bitkisidir. Bu transgenik pirinç çeşidi, ona altın rengi veren A vitamininin öncüsü olan β-karoten üretir. Fitoen sentaz, fitoen desatüraz ve likopen β-siklaz enzimlerini kodlayan üç geni taşıyan rekombinant DNA’nın hedeflenen pirinç embriyolarının genomuna yerleştirildiği Agrobacterium aracılı DNA dönüşümü ile üretilir. Embriyolar daha sonra β-karoten üreten bitkilere dönüşür. Altın pirinç, gelişmekte olan ülkelerde A vitamini eksikliğinin üstesinden gelmek için geliştirilmiştir.

Bt pamuğu gibi diğer bazı transgenik bitkiler, toprakta bulunan gram pozitif bir bakteri olan Bacillus thuringiensis bakterisinden izole edilen bir genin eklenmesiyle modifiye edilmiştir. Bu tür transgenik bitkiler, zararlı böcekleri öldüren ve bitkiyi böceklere dirençli hale getiren kristal veya “Cry” proteini üretir.

Transcript

Transgenik bitkiler, bir bitkinin genomuna yabancı bir gen eklenerek üretilir. Bu bitkiler, virüs veya haşere direnci, daha yüksek verim veya terapötik protein üretimi dahil olmak üzere çeşitli nedenlerle geliştirilebilir.

Transgenik bir bitki üretmek için, ilgilenilen bir gen ve onun destekleyicisi, her ikisi de polietilen glikol içeren bir ortamda inkübe edilerek, hücre duvarı olmayan bir bitki hücresi olan bitki protoplastına sokulur.

Rekombinant protoplast, büyüme düzenleyicileri ve besin maddelerinin varlığında steril bir ortamda yetiştirilir.

Protoplastın hücreleri süresiz olarak büyür ve kallus adı verilen farklılaşmamış hücrelerden oluşan bir kütle üretir. Totipotent hücreler olarak adlandırılan bazı kallus hücreleri, yepyeni bir bitkiye dönüşebilen yeni sürgünlere ve köklere yol açar.

Transgenik bitkiler, toprakta bulunan gram negatif bir bakteri olan Agrobacterium tumefaciens bakterisi kullanılarak da oluşturulabilir. Bu bakteri, normalde bitkilerde hastalığa neden olan bir patojendir ve bir bitki hücresi genomuna entegre olabilen bir Ti-plazmid içerir.

Ti plazmidinin iki ilgi alanı vardır – T-DNA’nın konakçı hücreye transferine yardımcı olmak için konakçı hücre genomuna ve virülans bölgesine eklenebilen T-DNA veya transfer DNA bölgesi.

Bu plazmit, plazmid içeren organizmaların seçici büyümesini sağlamak için T-DNA bölgesine istenen bir gen ve antibiyotik direnci için bir gen eklenerek modifiye edilir. Rekombinant plazmit daha sonra hücre geçirgenliğini artırmak ve plazmitin bakteriye alımını sağlamak için bir elektrik darbesi uygulanarak bakteriye yerleştirilir.

Rekombinant plazmit taşıyan Agrobacterium tumefaciens, antibiyotik içeren bir kültür ortamında büyütülür.

Bir domates bitkisinden elde edilen kotiledoner düğümler gibi bitki parçaları kesilir ve bakteri içeren ortamda inkübe edilir.

Kök düğümün kenarındaki yaralı bitki hücreleri, bakterileri çeken bileşikleri serbest bırakır. Bakteriler bitkiyi enfekte eder ve rekombinant plazmiti serbest bırakır, bu da daha sonra yabancı geni bitki hücresi genomuna aktarır.

Antibiyotik içeren besiyerinde sadece rekombinant DNA ve antibiyotiğe dirençli genlere sahip transforme olmuş hücreler hayatta kalır.

Dönüştürülmüş hücreler şimdi bir kallus oluşturur ve bir transgen taşıyan yeni bir transgenik bitkiye dönüşür.

Key Terms and definitions​

Learning Objectives

Questions that this video will help you answer

This video is also useful for