32.4: Hibridoma Teknolojisi

Hibridoma teknolojisi, monoklonal antikorların büyük ölçekli üretimi için kullanılır. Monoklonal antikorlar yalnızca tek bir antijenik determinant veya epitopa bağlanır. Bu tür antikorlar araştırma, teşhis ve hastalık tedavisinde kullanılır. 1975 yılında Georges Köhler ve Cesar Milstein tarafından kurulan hibridoma teknolojisi, araştırma ve tedavide devrim yaratması nedeniyle 1984 yılında Nobel Tıp Ödülü'ne layık görüldü.

Hibridoma Seçimi

Yaygın olarak kullanılan füzyon teknikleri (elektroporasyon, polietilen glikol (PEG) aracılı füzyon ve füzojenik virüslerin kullanımı) genellikle çok düşük bir frekansta hibridomalar üretir. Füzyon ürünleri bu nedenle yüksek oranda kendiliğinden kaynaşmış B hücreleri ve miyelom hücreleri veya düşük sayıda hibrid hücre içeren kaynaşmamış hücrelere sahiptir.

Hipoksantin-aminopterin-timidin (HAT) ortamı, seçici olarak büyümelerine izin vererek hibridomaları seçmek için kullanılır. Aminopterin, hücrelerdeki varsayılan nükleotid sentezini bloke eder. Bununla birlikte hücreler, kurtarma yolu yoluyla nükleotidleri sentezlemek için ortamdan hipoksantin ve timidin kullanabilirler.

HGPRT enzimi eksik olan miyelom hücreleri bu yolla nükleotidleri sentezleyemez ve dolayısıyla HAT ortamında büyüyemez. B hücreleri fonksiyonel HGPRT enzimleri üretmelerine rağmen süresiz olarak bölünemezler. Bu nedenle, HAT seçim ortamında yalnızca B hücrelerinden fonksiyonel HGPT'ye ve miyelom soyundan ölümsüzlüğe sahip hibrit hücreler büyüyebilir. Böyle bir hibrit hücre kültürüne, monoklonal antikor üretimi açısından taranabilen bir hibridoma adı verilir.

Hibridoma Taraması

HAT seçiminden hibridoma kültürleri 96 oyuklu bir plaka üzerine kaplanır; her kuyucuk yalnızca bir hücre içerir. Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi (ELISA) kullanılarak her hücre, ilgili epitopa özgü antikorların üretimi açısından taranır. Testi pozitif çıkan hücreler daha sonra seçilir ve hibridoma hücre çizgileri oluşturmak için daha büyük bir kültür kabında büyütülür. Bu hücre çizgileri sınırsız monoklonal antikorların kalıcı bir kaynağıdır. Bu nedenle hibridoma teknolojisi, monoklonal antikorların seri üretimi için uygun ve uygun maliyetli bir yöntemdir.

Hibridoma teknolojisi, yalnızca tek bir epitopa bağlanabilen monoklonal antikorları seri üretmek için kullanılır - bir bağışıklık tepkisi ortaya çıkaran bir antijenin parçası.

İşlem, bir fareye hedef antijen enjekte etmek ve ardından antikor üreten B hücrelerini izole etmek için birkaç hafta sonra dalağının toplanmasıyla başlar. Bu hücreler sınırlı bir ömre sahiptir ve bir laboratuvarda kültürlenemez.

Daha sonra, B hücreleri, elektrik darbeleri veya polietilen glikol kullanılarak ölümsüz ve kanserli beyaz kan hücreleri olan miyelom hücreleri ile kaynaştırılır. Böylece, hibridoma adı verilen melez ölümsüz, antikor üreten hücreler oluşturur.

Hibridomlar ayrıca fonksiyonel bir hipoksantin-aminopterin-timidin veya fonksiyonel bir hipoksantin-guanin fosforibosiltransferaz veya HGPRT enziminin varlığına bağlı olarak HAT ortamı üzerinde seçilir.

Bu ortamda, hem HGPRT negatif miyelom hücreleri hem de HGPRT pozitif ancak kısa ömürlü B hücreleri uzun süre hayatta kalamazlar. Bununla birlikte, HGPRT enzimine sahip ölümsüz hibridoma hücreleri çoğalabilir.

Seçimden sonra, hedef epitop için güçlü bir afiniteye sahip monoklonal antikorlar üreten hibridoma hücreleri tanımlanır ve antikor üreten hücre hatları oluşturmak için başlangıç hücreleri olarak kullanılır.