Yöntem makalesi

Elastaz ile murin Deneysel Abdominal Aort Anevrizmalarının Yaratılış

DOI:

10.3791/1280

⸱

23 Temmuz 2009

 ,  ,  , 
1Department of Cardiovascular Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Vascular Surgery, Stanford University School of Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu video infrarenal abdominal aort segmentine domuz pankreatik elastaz geçici intraluminal infüzyonu ile farelerde abdominal aort anevrizması (AAA) ikna etmek için nasıl gösterir. Modeli birçok transgenik ve gen knockout farelerde ortaya çıkması nedeniyle AAA patobiyolojisi geniş bir fikir eklemek için yeteneğine sahiptir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Infrarenal abdominal aort segmentine domuz pankreatik elastaz Geçici intraluminal infüzyon ilk Anidjar sıçan ve meslektaşları tarafından açıklanan bu yana abdominal aort anevrizması (AAA) en yaygın olarak kullanılan hayvan modelinde kendi gelişimi için 1 mantık tabanlı elastin bozulmuş doğa AAA'ların gözlenen. Bu sıçan modelinde infrarenal aort bölgede farelerin AAA'ların üretmek için modifiye edilmiştir. 2 modeli birçok transgenik ve gen knockout farelerde ortaya çıkması nedeniyle, AAA patobiyolojisi geniş bir fikir eklemek için yeteneğine sahiptir. Ayrıca, AAA için potansiyel terapötik ajanların test etmek için geçerli bir platform. Bu video, laboratuarda kullanılan elastaz infüzyonu AAA prosedürü göstermektedir.

Fare izofluran 2.5% anestezi ve laparotomi steril koşullar altında yapılır. Karın aortais bir işletim stereomikroskopta (Leica) yardımı ile izole edilmiştir. Proksimal ve distal aorta çevresinde geçici ligatür yerleştirdikten sonra, 30-gauge bir iğne ucu ile bifurkasyon aortotomy oluşturulur. PE-10 polietilen boru ısı konik bir segment aortotomy ile tanıştırdı ve güvence altına alınmıştır. Aort lümeni daha sonra 5-15 dakika tuzlu su içeren tip I domuz pankreatik elastaz (Sigma Chemical Co 4.5 U / ml) ile 100 mm Hg perfüze. Perfüzyon kateteri çıkardıktan sonra, aortotomy lümeninde daralma olmadan onarılır.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fare ile anestezi inhalasyon izofluran 2.0-3.0ml / L.
  2. Karın traş ve alkol ve betadin ile temizlendi.
  3. Fare operasyon alanında sırtüstü yerleştirilir.
  4. Cerrah tarafından steril eldiven giyilir, kullanılan aletler ve sıcak boncuk sterilizatör ile sterilize edilmiştir.
  5. Uzun bir orta hat abdominal kesi yapılır. Karın içeriği abdominal aorta maruz steril gazlı bez ile karın dışında geri çekilir.
  6. Abdominal aorta, sol renal ven seviyesinden çatallanma izole edilir.
  7. Abdominal aorta dalları maruz kalan ve 10-0 sütür ile bağlandı. Bifurkasyonunun 1.0cm içinde tüm aort dalları bağlandı.
  8. Geçici ipek 6.0 ligatür aort proksimal ve distal kısımları etrafına yerleştirilen
  9. Bir aortotomy 30-gauge iğne ile bifurkasyon oluşturulur.
  10. Isı konik polietilen boru (PE-10) aortotomy ile tanıtıldı ve bir beraberlik ile güvence altına alınmıştır.
  11. 100 mmHg kalibre için 136 cm yükseklikte asılı tuzlu bir çanta kullanımı, aort 4.5 U / mL Tip I domuz pankreatik elastaz içeren tuzlu su ile doldurulur. Aort genellikle 5-15 dakika elastaz perfüzyon sırasında orijinal çapının% 150-170 genişletir.
  12. Perfüzyon kateteri sonra kaldırılır ve aortotomy daralma önlemek için 10-0 sütür ile kapatıldı.
  13. Aortotomy kapatıldıktan sonra, distal ligatür kaldırılır.
  14. Onarılan aortotomy çok az veya hiç kanama varsa, proksimal ligatür kaldırılır. Genişletilmiş aort hemen kan ile doldurur.
  15. Bağırsaklar karın iade edilir ve yara 6-0 naylon / polipropilen sütür ile iki kat kapalı.
  16. 0.25% Bupivicaime damla (yaklaşık kesi boyutu her santimetre için bir damla) Caprofen yara ve bir doz yerleştirilir (5mg/kg) subkutan verilir.
  17. Fare sıcak bir alan üzerine yerleştirilen ve genellikle 15 dakika içinde kurtarır.

figure-protocol-1
Şekil 1 elastaz indüklenen AAA Temsilcisi Sonucu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Önceki çalışmalar, farklı ticari elastaz hazırlıkları 3 AAA gelişiminde önemli bir parti için çok varyasyon kaydetti var. Böylece, üretim çok izlemek için AAA'ların ikna etmek için hazırlık yeteneği belgelemek için uygun kontrol gruplarının yanı sıra kritik öneme sahiptir.

İlginçtir ki, bu modelde AAA geliştirme yatkınlığı 3 kullanılan fare suşu bağlıdır. Geçerli video kullanılan fare hatlarıyla protokolünü kullanarak AAA tutarlı kalkınma C57BL / 6 suşu. Elastaz kon...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların beyan edeceği herhangi bir durum bulunmamaktadır.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ulusal Sağlık Enstitüleri (P50 HL083800-03): Bu çalışma SCCOR hibe "Mekanizmalar, Tabakalaşma ve Tedavi AAA Hastalığı" desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Tip I porsin pankreatik elastazReaktifSigma-AldrichE1250
polietilen tüp (PE-10)BD Biosciences427400
CHANGE-A-TIPBovie Medical Corporation18010-00 (FST)koter bıçağı
LEICA MZ6Leica Microsystemsstereomikroskop
LEICA DFC290HDLeica MicrosystemsUSB kamera
Image Pro Express ver. 6.0Media Cybernetics Inc.yazılım

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Anidjar, S., Salzmann, J. L., Gentric, D. Elastase-induced experimental aneurysms in rats. Circulation. 82 (3), 973-973 (1990).
  2. Pyo, R., Lee, J. K., Shipley, J. M. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1641 (2000).
  3. Carsten, C. G. 3rd, Calton, W. C., Johanning, J. M. Elastase is not sufficient to induce experimental abdominal aortic aneurysms. J Vasc Surg. 33 (6), 1255-1255 (2001).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Abdominal Aort AnevrizmasElastaz nf zyonuFare ModeliCerrahi lemAortik Perf zyonPorcine Pankreatik ElastazSteril TeknikAortotomi Onar mAnevrizma Olu umuPostoperatif Bak m

İlgili makaleler