Biz koyun ileum içinde 'bağırsak döngüler' catheterizing için yeni bir cerrahi yöntem açıklanmaktadır. Hayvanlar cerrahiden sonra iyileşti ve antibiyotik ve analjezikler temizlendiğini, çoklu tedaviler kateterler yoluyla döngüler doğrudan yatırılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Ruminantlarda Bağırsak Döngüler kateterizasyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Bağırsak, sadece besinin emilmesini yer almaktadır karmaşık bir yapıya değil, aynı zamanda bireysel ve dış dünya arasında bir bariyer gibi davranır. Gibi bağırsak immunosurveillance ve enterik patojenlere karşı koruma önemli bir rol oynar. Bağırsak fizyolojisi ve immünoloji incelenmesi deneysel bir model olarak yaygın bağırsak döngüler 'kullanmaktadır. Bu döngü modellerin çoğunluğu bağırsak kısa süreli (<24 saat) (1-3) çalışma kurtarma olmayan cerrahi işlemler. Biz daha önce, özellikle uzun vadeli (<6 ay), aşılar, adjuvanlar ve virüsler (4) koyun aşağıdaki maruz bağırsak immünolojik değişiklikleri ölçmek için bir kurtarma bağırsak döngü modeli yarattı. Bu prosedür, belirli bir 'loop' yerelleştirilmiş tedaviler, bağırsak bize bu alanda örnek izin. Bu yöntemin önemli bir dezavantajı fırsat tedavileri (yani cerrahi zamanda) yönetmek için tek bir pencerede. Ayrıca, bağırsak mukozası ve luminal içeriği hem de örnekleri sadece projenin bitiminde alınacak. Yukarıdaki modele Diğer göze çarpan sınırlamalar cerrahi manipülasyon ve gerekli post-operatif tedbirler (örneğin antibiyotik ve analjezikler idaresi) doğrudan etkileyebilir tedavi kendisi ve / veya bağışıklık işlevini değiştirebilir, böylece karıştırıcı sonuçlar olabilir. Bu nedenle, uzun vadeli döngüler içine kateter takarak bağırsak döngü modeli değiştirilmiş. Koyun prosedürü tamamen iyileşir ve exteriorized kateterler etkilenmez. Özellikle, döngüler içinde kateterleri kurulması, bize, ameliyat sırasında uygulanan ilaçların cerrahi ve temizleme kurtarma ve post-operatif dönemde, uzun bir aralık içinde birden fazla tedavi tanıtmak için olanak sağlar.
Protokol
Deneysel işlemin:
- Tüm enstrümanlar otoklavlanırlar olmayan autoclaveable malzemeler en az 10 dakika soğuk sterilizasyon çözümü için Germex sterilize edilir.
- Koyun acepromazine (0.05 mg / kg), Glikopirolat (0.005 mg / kg) ve butorfanol tartarat (0.2 mg / kg) IM öncesi ilaçlı, ve 15-20 dakika süreyle bırakılır.
- Boyun traş ve cilt ameliyatla temizlendi. Juguler ven görüntülenmiştir sonra, 0.1 ml lidokain damar üzerine SC enjekte edilir, kateterin damar içine tanıtıldı ve hayvan kimlik etiketi çimento ve 2 "hastane bant kullanarak cilt için güvenli. Ameliyat sırasında, hayvanların 10 ml verilir Plasmalyte 148 / kg / saat (yerçekimi akış).
- Diazepam (0,2 mg / kg) IV uygulanır ve anestezi tiyopental sodyum (10 mg / kg) ile indüklenir. Lidokain endotrakeal sprey vokal kat uygulanır, koyun, ameliyat süresi (4 L / dak hızında% 100 O 2% 1.5-2.5) entübe ve izofluran sürdürülür .
- Hayvan ameliyat sırasında vücut ısısını korumaya yardımcı olmak için ısıtmalı bir minder üzerinde sırt yatma yerleştirilir. Bir mide tüpü aşırı tympany önlemek için rumen eklenir.
- Ventral karın traş ve cilt üç Prepodyne cerrahi scrubs ile ameliyat için hazırlanmıştır. Karın cerrahi sitenin bu uygun pozlama (kaudal karın umblikusun) tutulur sağlanması, daha sonra bol dökümlü.
- 15-20 cm orta hat kesi göbek kaudal electroscapel kullanılarak yapılır ve ileoçekal kat karın sağ alt kadranda yer almaktadır. Daha sonra kaudal ileum ve çekum exteriorized. Prosedürü boyunca, bağırsak işleme minimize edilir ve bakım exteriorized bağırsak nemli tutulur sağlamak için alınan sıcak (37-39 ° C) steril fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7.2).
- 85 cm ileum bir segment (yani 'intestinal segment') ölçülür ve daha sonra segmentin her iki ucunda Doyen forseps (bağırsak kelepçeler) ve büyük Kelly forseps ile kenetli. Intestinal segment içinde, 'döngüler ve döngüler arasında' aralar 'kurulacaktır. Doyen forseps (anastomoz) katıldı ileum tarafında yerleştirilir ve Kara forseps, ileum intestinal segment yan yerleştirilir.
- Ileum her Doyen ve Kelly forsepsle arasında kesilir ve döngüler için belirlenen intestinal segment nazikçe ingesta kaldırmak için 60 ml sıcak PBS ile iki kez temizlendi.
- Geniş spektrumlu antibiyotikler (sıcak PBS, 60 ml toplam hacmi, 200 mg enrofloxacin ve 250 mg metronidazol) bir kokteyl intestinal segment boyunca dağıtılan ve 30 dakika süreyle bırakılır.
- Ileum (bağırsak segmenti hariç) proksimal ve distal uçları, sürekli ve fonksiyonel bir bağırsak formuna katıldı. Öncelikle, ileum, sırasıyla bağırsak mezenterik ve antimezenterik sınırları yerleştirilen iki kalış sütür hizalanmış. Daha sonra, basit sürekli dikiş deseni (2-0 vicryl), bağırsak birlikte katılmak için her iki tarafta bağırsak tamamlandı.
- Sıcak PBS (3-5 ml), anastomoz kaçağı ve sütür yetmezliği kontrol etmek için enjekte edilir. Ardından, Kara forsepsle ucu bağırsak serozal yüzeyi karşı basıldığında, anastomoz site yakın ve anastomoz gelişmiş içe bağırsak lümeni geniş ve patent sağlamak.
- Antibiyotik kokteyl intestinal segment çıkarılır. 2-0 vicryl kullanarak tersini dikiş deseni takip segmentin her iki ucunda basit sürekli dikiş deseni (2-0 vicryl emilebilir sütür) ile kapatılır.
- 85 cm uzunluğunda bir barsak segmentinin üç 15 cm döngüler, döngüler arasında iki 15 cm uzunluğunda 'aralar' ve bağırsak segmentinin Termini iki adet 5 cm uzun künt uç bölme (Şekil 1) bölünmüştür. . 2-0 ipek kullanılarak bağırsak etrafında bir ligatür koyarak döngüler oluşturulur. Bu, bağırsak canlılığı korumak, kan ve bağırsak sağlamak için gerekli olduğu gibi büyük mezenterik damarların Bu işlem sırasında bağlandı değildir dikkat çekicidir. Ayrıca, bitişik harfler kateterler güvenliğini sağlamak için kullanılan olacak gibi, uzun bırakılır.
- Kateterler (yani silastik tüp) ayrı ayrı kalıcı bir kalem kullanarak tespit edilir. Kateter çevreleyen bir silikon topu (5 mm çap), bağırsak (Şekil 1) sürgülü kateter önlemeye yardımcı olmak için, kateter sonundan itibaren 4-5 cm yerleştirilir. Otoklav ile sterilizasyon sonra, olmayan bir antibiyotik merhem (Orbeseal) aseptik kateter sonunda (3-5 mm) içine yerleştirilir, bu kateter patent kalmasını sağlar (yani döngü içinde dökülmüfl mukoza ile takılı olmaz).
- Küçük bir kesi her üç döngüler kraniyal yönü yerleştirilir. Her delik bir kateter uygulayıcıya (yani 'gemi dilatör') ile büyütülür ve kaudal kateter 6-8 cm segmentine eklenirdöngü, Silikon topu kadar lümen (Şekil 1) geçer.
- Bağırsak duvarı kateter etrafında bir kese dikişi (2-0 vicryl) ile güvence altına alınmıştır. Kateter döngünün kraniyal tarif ligatür ipek kateter bağlama bağırsak güvence altına alınmıştır.
- Ampisilin (5 ml, 100 mg / ml sıcak PBS), her bir döngü ve aralık içine enjekte edilir ve bağırsak karın boşluğuna geri yerleştirilir. Sefazolin (8 ml, 100 mg / ml sıcak PBS), karın kesiden periton boşluğuna enjekte edilir.
- Tek bir küçük bıçak insizyon orta hat kesi bitişik karın duvarı üzerinden yapılan ve kateterler, bu site aracılığıyla exteriorized.
- Konumu ve kateter gerginlik, peritoneal kavite içinde ayarlanır. Karın kasları, basit ayrı dikişler (sütür Katgüt # 3) ile kapatılır, ve cilt kesintiye uğramış bir yatay yatak desen (emilmeyen dikiş Supramid # 1) ile kapatılır.
- Kavisli bir çukur paslanmaz çelik boru (7 mm ID; 10 mm OD, 65 cm uzunluğunda), sadece boyun kaudal bir çıkış sitesine deri altında ve omuzları arasında tünelli, karın kesi yakın cilt altına yerleştirilir. Kateter tüp içine yerleştirilir ve tüp uzunluğu en az% 50 için ileriye doğru itilir. Sonra kateter açığa, kateter ile tüp çıkış yerinde deriden çekilir.
- Kateter gerginlik bıçak kesi yerinde ayarlanır ve cilt Supramid # 1 ile kapatılır.
- Bireysel kateter tespit ve Supramid # 1 cilt sütüre bir bandaj "kese" içine yerleştirilmiştir. Kese sonraki hasar kateterler korur.
- Post-operatif, koyun bir başlangıç dozu flunixin (SID) ile sohbet enjekte edilir, 2.2 mg / kg, 3 gün boyunca 1.1 mg / kg sid idame dozu izledi. Koyun da, sırasıyla 3 ve 5 gün boyunca Hemostam (3 ml) ve enrofloxacin (2,5 mg / kg) sid ile IM enjekte edilir. Hayvanlar, bu akış (145 ml / saat) vücut pozisyonu ne olursa olsun, devam sağlamak için peristaltik bir pompa ile sürekli uygulandığında% 5 dekstroz çözeltisi ile intravenöz Plasmalyte 148 korunur. Bu ad libitum içmek için izin verilir, ancak normal rumen ve bağırsak fonksiyonları restore kadar besleme sınırlıdır. Gıda alımı, su tüketimi, vücut ısısı, dışkı ve idrar, bağırsak sesler, karın bölgesinde rahatsızlık, tavır ve kan şekeri konsantrasyonları geçişini yakından takip edilmektedir (bid); gerektiğinde intravenöz sıvı glukoz konsantrasyonları, kan glukoz konsantrasyonlarını korumak için ayarlanabilir normal sınırlarda. Kan kimyası ve hematoloji (yani albumin, alkalen fosfataz, alanin aminotransferaz, amilaz, kalsiyum, kolesterol, kreatinin, glikoz, inorganik fosfat, total bilirubin, total protein, üre, globulin, sodyum, potasyum, klor, kısmi basıncı oksijen, pH, parsiyel basınçlı karbondioksit, bikarbonat ve toplam karbon dioksit, kırmızı ve beyaz kan hücre sayımı, hematokrit, hemoglobin, lökosit sayımı ve trombosit sayısı), ameliyat öncesi ve hemen sonrasında takip ve her geçen gün daha sonra. Bir kere normal bağırsak fonksiyonu, başlar, intravenöz sıvı tedavisi sonlandırılır ve hayvanlar çayırlarda aktarılır (yani 5-7 gün ameliyat sonrası). Hayvanlar ve böylece stres ve kateter torbalar (örneğin bir penmate çiğneme) zarar sürdürme şansını azaltır bireysel kalemler (diğer hayvanlar görüş alanı içinde), korunur.
- Tedaviler bireysel döngüler içine enjekte etmek için, tedavinin 5 ml, 18 gauge, künt uçlu iğne ile donatılmış steril bir şırınga ile kateter içine enjekte edilir. Döngünün içine tedavinin tüm birikimi sağlamak için, kateter 3 ml PBS ile enjekte edilir.
Kritik noktalar:
Bu cerrahi prosedürün başarısı için hayati öneme prosedürler şunları içerir: (1) bağırsak anastomoz kurmadan önce kendi üzerine bükülmüş olduğunu doğrulayarak, (2) anastomoz bütünlüğü ve açıklığı sağlamak, (3) yeterli kateter güvence döngü döngü kraniyal sonuna tasvir ligatür duvar, ancak eki kateter açıklık etkilemez sağlanması; (4) en aza indirilmesi ve bağırsak işleme exteriorized bağırsak nemli tutulmasını sağlamak; uygun kateter sağlanması (5) gerginlik; (6), kateter bütünlüğü, kas ve deri dikilmesi sırasında etkilenen olmadığını sağlanması; (7) (yani, post-operatif ileus dönemde) koyun post-cerrahi tarafından tıkınıyordur önlenmesi rumen impaksiyon ve değer düşüklüğü neden olabilir rumen fonksiyonu; hayvanlar ameliyat sonrası ilk 3-5 gün için yeterli intravenöz sıvı tedavisi almalarını sağlamak ve (8), kan glukoz konsantrasyonlarının dikkatle izlenmeli ve intravenöz sıvı glukoz konsantrasyonları adjusTed hipoglisemi önlemek için gerekirse. 
Şekil 1'de şematik kateterize ileal döngüler. Not üç 15 cm uzun döngüler 'kateterize, döngüler, ve iki adet 5 cm uzunluğunda terminal segmentleri arasında kurulan iki adet 15 cm uzunluğunda olmayan kateterize' aralar ', 85 cm uzunluğundaki' bağırsak segmenti içinde kurulan 'koyun ileum.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu prosedürde, kateterler koyun ileum bünyesinde kurulan bağırsak döngüler başarıyla kurmayı başardık. Sıkı bir post-operatif bakım bağlı kalarak, hayvanlar prosedür hızla iyileşti ve ameliyattan sonra normal aktiviteye 5-7 gün devam etti. Biz döngüler içinde kateterleri kurulması bağırsak mukoza veya immün fonksiyonları (veriler gösterilmemiştir) etkilemez ve hayvanların ameliyattan sonra en az 8 hafta yaşayabilir belirlenir. Bu prosedür, bize bir kez hayvanlar ameliyat kurtarıldı, uzun bir aralık içinde farklı immünol...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Deney hayvanları üzerinde tüm işlemler Kurumsal Hayvan Bakım Komitesi tarafından onaylanmış (Hayvan Kullanım Protokolü # 0609) ve Hayvan Bakım Kanada Konseyi tarafından belirlenen kurallar takip edildi.
Biz ifşa etmek için bir şey var.
Teşekkürler
Araştırma, özveri ve çabaları pek çok kişi, Tarım ve Tarım-Gıda Kanada Araştırma Merkezi, Lethbridge, Alberta, Kanada olmadan tamamlanmış olamazdı. Bu bağlamda, biz teşekkür ederiz: pre-ve post-operatif hayvanların bakım, cerrahi hazırlık ve anestezi, numunelerin analizi, ve video görüntüleme konusunda yardım Tara Shelton; Randy Wilde ve pre-ve post-operatif bakımı için Estela Kosta; Jenny Gusse numune analizi için; trokar görüntü için Byron Lee ve koyun yetiştiriciliği için Brian Egland. Ayrıca Brent Selinger (Biyolojik Bilimler Bölümü, Lethbridge Üniversitesi) video donanımları ve tavsiye, hem de diğer yardım (yani yönetici üretim) sağlamak için teşekkür eder, ve Müfredat Re-Geliştirme Merkezi, videografisi uzmanlık Lethbridge Üniversitesi. Bu çalışmada, Gelişmiş Gıda ve Malzeme Ağı (GDI), Kanada Alberta Beef Sanayi Geliştirme ve Destekleme Fonu (GDI) ve Tarım ve Tarım-Gıda Kanada (GDI ve JPK) hibe kısmen desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Kategori / Ürün Numarası | Şirket | Katalog |
| Cerrah kaynakları | ||
| Cerrah eldivenleri | WDDC a | 103091 |
| Cerrahi maske | WDDC | MAX53013 |
| Ameliyat önlüğü | CDMV b | 3365 |
| OB Önlük | WDDC | 900062 |
| Cerrahi kap | WDDC | 903271 |
| EZ Ovalama Fırçası | WDDC | BDC377479 |
| Anestezi ve ilaç | ||
| Anestezik makine | Boyle | |
| Sodasorb | WDDC | 108638 |
| Larengoskop | WDDC | |
| Laringoskop bıçak (Miller blade # 4) | WDDC | 902667 |
| Endotrakeal tüp (7,0 - 8,5 mm) | WDDC | |
| Lidokain endotrakeal sprey | WDDC | 103364 |
| Acepromazine | WDDC | AUS01020 |
| Glikopirolat | WDDC | SAB2880 |
| Butorfanol tartarat | WDDC | AYE304541 |
| Diazepam | WDDC | sab790 |
| Tiyopental sodyum | WDDC | 103508 |
| Epinefrin hidroklorür | WDDC | 103856 |
| Doxapram | Strathcona Eczacılık | |
| İsofluranın | WDDC | 100339 |
| Hemostam | WDDC | 103857 |
| Flunixin | WDDC | sch140100 |
| Enrofloxacin | WDDC | hll0049 |
| Metronidazol | WDDC | 101653 |
| Ampisilin | WDDC | NOV67185-6 |
| Sefazolin | WDDC | nov69397 |
| Cerrahi ekipman ve malzemeleri | ||
| Electroscapel | Macan | MV8 |
| Isıtma mat | Kane | PHMD-48 |
| Mide tüpü (Nalgene tüp 5 / 16 "ID) | Fisher Scientific | |
| İğne sürücü | WDDC | 108338 |
| Addison kahverengi forsepsle | WDDC | 911075 |
| Sıçan diş forsepsle | CDMV | 5275 |
| Kara forsepsle | WDDC | 901133 |
| Sivrisinek hemostat | WDDC | 108471 |
| Carmalt forsepsle | WDDC | 901225 |
| Neşter kolu | WDDC | 900285 |
| Neşter bıçağı # 22 | WDDC | 900511 |
| Metzenbaum makas | WDDC | 901166 |
| Keskin keskin bir makas | WDDC | 108264 |
| Havlu kelepçe | WDDC | 901213 |
| Allis doku forsepsle | WDDC | 901201 |
| Doyen Kullanıcı forsepsle | WDDC | 904226 |
| Paslanmaz çelik kazan | WDDC | 903601 |
| Paslanmaz çelik trokar (eğri) | Yerel tedarikçi | |
| Kateter introduser | WDDC | 11440 |
| Cerrahi havlu | CDMV | 7972 |
| Tek kullanımlık asmak | WDDC | 900035 |
| Steri asmak | CDMV | 2323 |
| Örtü (40 x 40 cm) | CDMV | 8358 |
| Cerrahi örtü (7 "x 11" açılış) | CDMV | 2694 |
| Vicryl (2-0) | WDDC | JJMJ333H |
| İpek 2-0 | WDDC | 105248 |
| # 3 Katgüt | WDDC | CSL547-2070 |
| Supramid # 1 | WDDC | CSL547-3040 |
| İğneler (kesim ve sivil kesim) | WDDC | |
| Sonda | ||
| Silastik tüp (0.040 "kimliği, 0.085" OD) | Fisher Scientific | 11-189-15D |
| Orbeseal merhem | WDDC | 106344 |
| Temizle silikon (732 çok amaçlı mastik) | Yerel tedarikçi | |
| Künt sonunda iğne | WDDC | 905035 |
| Marker (kalıcı endüstriyel) | Yerel tedarikçi | |
| Kateter çantası (Elastoplast 7.5 cm inşa) | WDDC | 104094 |
| Bandajlar | ||
| Hastanesi bant (2 ") | WDDC | 103842 |
| Hastanesi bandı (1 ") | WDDC | VLMRENF20 |
| Tül sünger 4x4 | WDDC | 107551 |
| Tül sarılmak | WDDC | 107633 |
| Elastoplast 7.5cm | WDDC | 104094 |
| Elastoplast rippable bandaj | WDDC | 104093 |
| NeEDLES ve şırıngalar | ||
| Şırınga (60 ml) | WDDC | 104004 |
| Şırınga (10 ml) | WDDC | bdc301604 |
| 25G İğne | WDDC | BDC305122 |
| 20G İğne | WDDC | BDC305175 |
| 18G İğne | WDDC | 903353 |
| Damar içi | ||
| Intracath IV kateter (16G 8 ") | WDDC | bdc3831621 |
| IV uygulama seti (10 damla) | WDDC | 101797 |
| % 0.9 NaCl çözeltisi | WDDC | BAXJB1322P |
| Plasmalyte 148 çözüm | WDDC | BAXJB2534 |
| Dekstroz | WDDC | MCT60190 |
| Peristaltik pompa | Cole Parmer | 7524-10 |
| Hayvan kimlik etiketi çimento | Yerel tedarikçi | |
| Sanatizers / dezenfektanlar | ||
| Germex çözümü | WDDC | mtc60270 |
| Izopropil alkol | WDDC | 104590 |
| Stanhexidine temizleyici | WDDC | 109248 |
| Prepodyne çözüm | WDDC | 105710 |
| Prepodyne fırçalayın | WDDC | 105711 |
Batılı bir İlaç Dağıtım Merkezi LTD, Edmonton, AB.
b Veteriner İlaç Dağıtım Merkezi A.Ş., St. Hyacinthe QE .
Kaynaklar
- Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon. Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).
- Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves. Vet. Pathol. 39, 200-215 (2002).
- Uzzau, S., Leori, G. S., Petruzzi, V., Watson, P. R., Schianchi, G., Bacciu, D., Mazzarello, V., Wallis, T. S., Rubino, S. Salmonella enterica serovar-host specificity does not correlate with the magnitude of intestinal invasion in sheep. Infect. Immun. 69, 3092-3099 (2001).
- Gerdts, V., Uwiera, R. R. E., Mutwiri, G. K., Wilson, D. J., Bowersock, T., Kindane, A., Babiuk, L. A., Griebel, P. J. Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses. J. Immunol. Methods. 256, 19-33 (2001).
- Greibel, P. J., Davis, W. C., Reynolds, J. D. An analysis of the growth and differentiation of b cells isolated from follicles from ileal Peyer's patch of sheep. Immunology. 75, 601-607 (1992).
- Motyka, G., Greibel, P. J., Reynolds, J. D. Agents that activate protein kinase C resue sheep ileal Peyer's patch B cells from apoptosis. Eur. J. Immunol. 23, 1314-1321 (1993).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
