Yazarların beyan edeceği herhangi bir çıkar çatışması bulunmamaktadır.

drosophila wolbachia bakteriyel enfeksiyon

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Drosophila Wolbachia Bakteriyel Enfeksiyon

Benim adım Voia Friedman. Princeton Üniversitesinde yardımcı araştırmacıyım. Bugün size, enfekte olmuş sineklerin hemolenfinden izolasyon yapmak ve daha sonra bu hemolenfi etkilenmemiş sineklere enjekte etmek için geliştirdiğim birkaç protokolden bahsedeceğim.Temel olarak bu, sadece başlangıç seviyesi için hemolinf izole etmeye yönelik çok basit bir protokoldür. Bunun için, bir Eppendorf tüpünün üzerine yerleştirilen bir filtre içeren Mepo marka bu cihazı kullanacaksınız. Temel olarak, yaklaşık yüz sinekle başlarsınız. Sinekleri anestezi altına alıp filtre cihazına yerleştirirsiniz; sinekleri bu cihaza kolayca aktarmak için bir huni kullanabilirsiniz ve ardından onları %70 etanol ile yıkayabilirsiniz.Sadece geleceği, yani etanolü uzaklaştırın, etanolü dökebilirsiniz ve son üç yıkamanızdan sonra, bakterilerin etanol kalıntıları içermesini istemediğiniz için moleküler su ile yıkama yaparsınız. Ardından, yeni bir santrifüj tüpüne aktarın ve bir mikrosantrifüjde iki dakika boyunca döndürün. Daha sonra bunu nasıl enjekte edebileceğiniz konusunda; sadece etkilenmemiş sineklere besleme yapın.Temel olarak çift taraflı bir bant alın; genellikle bu çift taraflı bantların iki tarafı vardır ve bir tarafı diğerinden daha yapışkandır. Yapışkan tarafı yukarıya gelecek şekilde bırakın çünkü sinekleri üzerine yapıştıracağınız taraf burasıdır. Temel olarak, gaz düzeneğinde eğer bu lam üstteyse gaz akışı olmayacaktır ve sinekler lamın üzerindelerse uyanacaklardır.Böylece bandı kullanarak küçük bir kaporta, küçük bir bölme oluşturup akışı yönlendirebilirsiniz. Ardından gazı sineklerin üzerine yönlendirirsiniz. Sonra bantla bu ışığı buraya yerleştirirsiniz ve sinekleriniz hazır olur.Sinekleri bandın üzerine, hepsini aynı yöne bakacak şekilde ve başları iğneyi getireceğiniz yöne doğru gelecek şekilde yapıştırın. Böylece sadece kanadın üzerinden geçebilirsiniz; sinek oldukları için uçmalarını istemezsiniz. İşlem sırasında uyanırlarsa, kaçıp gitmelerini önlemiş olursunuz.Bu nedenle, sineğin kuyruk kısmındaki kanatlarına hafifçe dokunduğunuzdan ve baskı uyguladığınızdan emin olun. Kanatların zarar görmesi sorun teşkil etmez. Enjeksiyondan sonra sinekleri çıkardığınızda, büyük ihtimalle kanatlarını zaten kaybedecekler ancak hayatta kalacaklardır.Bu yararlı olabilir çünkü sinekleri kaybetmezsiniz; bu nedenle mikrometrenin iğne arkasına mineral yağ sürer, ardından iğne enjeksiyon polarını yerleştirir ve ardından materyali iğnenin ucuna getirmek için basıncı ayarlayabilirsiniz. Ben 10 ile 15 nanolitre arasında bir miktar enjekte ettim, ancak önemli olan tutarlı olmamdır. Tamam, buradaki önemli bir detay şudur; enjeksiyon sırasında, gördüğünüz gibi, iğnenin abdomenin üst kısmından mümkün olduğunca derine girmesi gerekir.Çünkü burada, temel olarak iğne nüfuz ettiğinde, yukarı ve aşağı hareket etmek için daha geniş bir alanınız olur. Ve temel olarak, kütikül nedeniyle daha yakınsa, uçuş sırasında hayati organlara nüfuz etme olasılıkları daha düşüktür. Örneğin, cerrahi işlem gerçekleştirdiğiniz sineği öldürecek şekilde bağırsakta bir delik açmanız çok düşük bir ihtimaldir.Benim adım Voia Friedman. Princeton Üniversitesi'nde Eric Hels'in laboratuvarında yardımcı araştırmacıyım. Bugün sizlere az önce izlediğiniz demonstrasyon protokolü hakkında bilgi vermek istiyorum.Bu protokol, UBA'nın dokular arası geçiş yapabildiğini kanıtlamak istediğimiz için uygulanmıştır. UBA, yeryüzündeki en başarılı hücre içi parazitlerden biridir; böceklerin ve birçok partikülün %20 ila %70'ini enfekte eder.Ayrıca, nehir körlüğü veya onkoserkiyaz gibi hastalıkları bulaştıran nematodları da enfekte ettiği için insan hastalıkları açısından oldukça önemlidir. Ve CCA, bu solucanlar için zorunlu bir endosimbiyonttur. Bu nedenle, CCA'nın aynı zamanda sıtma ve danga gibi sivrisinekler tarafından bulaştırılan paraziter hastalıkları kontrol etme aracı olarak kullanılmasına yönelik büyük bir ilgi vardır.Bu protokol temel olarak, CCA'nın bir sineğin karın boşluğuna girdikten sonra dokuları geçebildiğini ve germ hücrelerine ulaşabildiğini göstermek için geliştirilmiştir. Burada temel olarak drosophila yumurtalığının yapısını görebilirsiniz ve hemolenf içerisinde bulunduğunda, yumurtalığı çevreleyen peritonyal kılıfı geçebildiği görülmektedir.Ardından bir kas tabakasını geçerler. Aslında yumurtalığın içine girdikleri ilk yerlerden biri somatik kök hücre görüntüsüdür. Daha sonra germ hattına ulaşabilirler.Ve bu bakteri, mitokondrilerin aktarıldığı yolla aynı şekilde, yani anneden, yumurtada bulunan anne sitoplazması aracılığıyla aktarılır. Dolayısıyla, doğal olarak germ hattında bulunmaları gerekir. Bu protokolün geliştirilme nedeni de budur.Bu protokol, geleneksel olarak insanların wbaa'yı transenfekte etmeye, yani temel olarak wbaa'yı alıp yeni bir böcek türüne aktarmaya çalıştıkları yöntemler için oldukça faydalı olabilir. Bu işlem genellikle embriyoya mikroenjeksiyonlar yapılarak gerçekleştirilir; ancak bu yöntemler çok daha karmaşıktır.Ve temel olarak burada, dokuları geçme yetenekleri sayesinde kök hücre dokularına geçebilmelerinden ve oradan germ hattına aktarılabilmelerinden dolayı biyolojilerinden yararlanıyoruz. Bu durum, enfekte olmuş belirli böcek türlerinden UBA alınmasını ve bunların enfekte olmamış türlere aktarılmasını kolaylaştırıyor. Muhtemelen bunun nedeni enjeksiyonun kendisidir.Temel olarak, sineği mümkün olduğunca iyi sabitlediğinizden emin olmanız gerekir. Çift taraflı yapışkan bant kullanıyoruz ve iğneyi temel olarak sineğe mümkün olduğunca yakın ve paralel bir şekilde batırmanız gerekir, böylece çok derine inmemiş olursunuz. Bu sayede cerrahi işlem sonrası sineği öldürme olasılığımız azalır.

Drosophila Wolbachia Bakteriyel Enfeksiyon

Bu makalede

Açıklamalar

Yeniden basım ve izinler

Etiketler