Method Article

VE Canlı Diseksiyon Drosophila Embriyolar: Aerodinamik Antikor Boyama Mutant Koleksiyonlar Eleme Yöntemleri

DOI:

10.3791/1647

December 29th, 2009

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz belirli genotipler Drosophila embriyolar "fileto" hazırlıkları üretmek için akıcı bir protokol açıklar. Bu protokol, genetik ekranlardan çeşitli verimli bir şekilde yürütülmesini sağlar. Aynı zamanda geç embriyo yapıları mükemmel görselleştirme sağlar.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Embriyonik gelişim aşamaları 14 ve 17 arasında Drosophila embriyolar "fileto" hazırlıkları kolayca oluşturmak için disseke edilebilir. Bu hazırlıkların, merkezi sinir sisteminin ortasında aşağı doğru akıyor ve beden duvarları ile çevrili. Birçok farklı fenotipleri Bu hazırlıkların kullanılarak incelenmiştir. Çoğu durumda, fileto antikor lekeli sabit tüm monte embriyoların diseksiyon tarafından üretildi. Bu "sabit diseksiyonları" Ancak, bazı dezavantajları var. Onlar çalıştırmak için zaman alıcı ve mutant (GFP-negatif) mutasyonlar GFP dengeleyici kromozom üzerinde tutulur stokları embriyolar sıralamak için zordur. 2002 yılından bu yana, bizim grup yetim reseptörlerine ligandlar tanımlamak için eksikliği ve ektopik ifade ekranlar yürütülmesi olmuştur. Bunu yapmak için, canlı embriyo diseksiyon ve dengeli hatları yüzlerce içeren koleksiyonlar antikor boyama aerodinamik protokolleri geliştirmiştir. Biz sabit diseksiyon ile daha canlı diseksiyon stoklarının büyük koleksiyonlarda fenotipleri incelemek için çok daha verimli olduğu sonucuna varmışlardır. Burada açıklanan protokol kullanarak, tek bir bileşik mikroskop altında inceleyerek her satırın 4-7 mutant embriyolar fenotipleri için gün başına 10 satır, eğitimli birey ekranı. Bu satır başına kadar 70 hemisegments 40X su daldırma lens ile yüksek büyütmede gol beri mutasyonlar, ince, düşük penetrans fenotipleri görüşmekte belirlenmesini sağlar.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Giriş

Embriyonik gelişim aşamaları 14 ve 17 arasında Drosophila embriyolar "fileto" hazırlıkları kolayca oluşturmak için disseke edilebilir. Bu hazırlıkların ortasında, merkezi sinir sistemi (MSS) aşağı doğru akıyor ve beden duvarları ile çevrili. Gut kaldırılır. Hazırlık ve müdahale doku olduğundan antikorlar ile boyanarak, fileto, tüm monte embriyolar daha çok merkezi sinir sistemi ve vücut duvarı yapıları (örn. motor aksonlar, kaslar, periferik duyusal nöronları (PNS), trakea) daha iyi görselleştirme izin lamel, fileto ve vücut duvarı boyunca uzanan yapılar tek bir odak düzlemli görüntülenebilmekte sağlayan, düz çünkü. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz bu video gösteri artık kolayca Drosophila genetik ve embriyoloji bazı deneyimi olan herhangi bir kişi tarafından idam edilebilir canlı embriyo diseksiyon ve yeterli ayrıntıda boyama yöntemleri görüntülenir olduğunu umuyoruz. Tabii ki, öncelikle diseksiyonları kendileri için önemli bir uygulama hala gerekli olacaktır. Bizim tecrübelerimize göre, her canlı diseksiyon yöntemleri öğrenir kişi onu / onu en hızlı, yüksek kaliteli dizilmiş diseksiyonları üretmek için izin veren bir kurnazca farklı diseksiyon proto.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz Nicki Fox ve Aloisia Schmid, bu protokollerin gelişmesine yaptıkları katkılar için teşekkür ederiz. Bu çalışma, KZ, NS28182 bir NIH RO1 hibe tarafından desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Sutter Instrument Co.ile Borosilikat Boru BF120-60-10
Narishige model PC-10 iğne çektirmeNarishige InternationalTüpler 58.9 ısıtıcı seviyesi kullanılarak çekilmiştir
Filament .

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Patel, N. H. Imaging neuronal subsets and other cell types in whole-mount Drosophila embryos and larvae using antibody probes. Methods Cell Biol. 44, 445-487 (1994).
  2. Desai, C. J., Gindhart, J. G., Goldstein, L. S., Zinn, K.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Drosophila Embryo DissectionLive Embryo StainingAntibody Staining ProtocolMutant Line ScreeningGFP Balancer ChromosomesCompound Microscopy AnalysisWax Rectangle SlideDouble Sided TapeGrape Agar PlateImmunofluorescence Microscopy

Related Articles