Amiloid için Anterior Fat Pad FNA Sahne ve İşleme

Özet

Fat pad aspirasyon gibi sistemik amiloidoz tanısı için amiloid algılamak için diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında çok tercih edilen, minimal invazif ve düşük maliyetli bir yaklaşımdır. Bu video makale numunenin optimal tanı sonucu için uygun bir işleme ile yağ yastığı aspirasyonu gerçekleştirmek için bir usul anahat göstermektedir.

Özet

Tarihsel olarak, kalp, karaciğer ve böbrek biyopsileri amiloidoz amiloid mevduat göstermek için yapıldı. Bu hastalığın klinik bulguları çok değişken ve non-spesifik olduğundan, bu biyopsilerin ilişkili riskleri tanısal değeri çok büyük. Gibi deri ya da dişeti gibi düşük bir biyopsi riski, diğer siteler de nispeten invaziv ve pahalı. Buna ek olarak, bu biyopsileri her zaman bir tanı koymak için yeterli amiloid mevduat sahip olmayabilir. Fat pad aspirasyon, düşük maliyetli ve minimal morbidite ile iyi klinik korelasyon göstermiştir. Ancak, bu işlemi gerçekleştirmeden veya değişken ve nonreproducible sonuçlar yol açar aspire örnek işleme için standardize protokoller vardır. Dokuda amiloid tespit için en sık kullanılan yöntemidir polarize mikroskop kullanılarak Kongo kırmızı lekeli bölümleri bir elma yeşil birefringence. Bu teknik, aspire edilen materyal hücre blok hazırlık gerektirir. Ne yazık ki, erken evre amiloidoz başvuran hastalarda, en az miktarda yağ yastığı aspiratlar Kongo kırmızı lekeli hücre bloklarına duyarlılığını büyük ölçüde azaltır amiloid var. Bu nedenle, elektron mikroskobu ile yağ yastığı aspiratlar ultrastrüktürel değerlendirme amiloid tespiti için artmış duyarlılık göz önüne alındığında, kullanılan olmalıdır. Bu makale, Kongo kırmızısı, hücre blok bölümden boyama ve ultrastrüktürel tanımlanması için elektron mikroskobu kullanan amiloid tespiti için ön yağ yastığı aspirasyon yapmak için basit ve tekrarlanabilir bir işlem göstermektedir.

Protokol

Giriş

Sistemik amiloidoz toplu amiloid olarak adlandırılan çeşitli proteinler hücre dışı birikimi anlamına gelir son derece değişken bir hastalıktır. , Beta pilili yapılandırma ile bu amiloid fibrillerinin birikimi ilgili organlara bağlı olarak çeşitli klinik sunumlar yol açar. Kalp, karaciğer ve / veya böbrek gibi önemli organların tutulumu olduğu zaman sistemik amiloidozun en önemli klinik belirtileri kaydetti. Tarihsel olarak, bu tutulan organlar amiloid varlığını göstermek için biyopsi olacaktır. Bu orta derecede invaziv işlemler kanama da dahil olmak üzere önemli bir risk taşıyordu. Fat pad aspirasyonu beri sistemik amiloidoz ¹ amiloid tespiti için güvenilir ve noninvaziv bir yöntem sağlamak için kanıtlanmıştır . Bu prosedür, küçük kan damarı ^{duvarlarının} 2 yetersizdir amiloid birikimi değerlendirmek için fibroadipose doku almak için lokal anestezi altında karın ön duvarında cilt altı yağ liposuction aslında karşılaştırılabilir .

Dokusunda amiloid tanımlanması için en sık kullanılan yöntem, Kongo kırmızı lekeli bölümleri, polarize ^ışık mikroskobu 3 altında görselleştirildiği zaman görülen karakteristik elma yeşil birefringence desen kalır. Yağ yastığı aspirasyon yapıldığında, Kongo kırmızı lekeler, doğrudan lekeli slayt veya aspire edilen yağ dokusunun hücre blok hazırlıkları yapılabilir. Ancak, amiloidoz erken evrelerinde hastalar kıt amiloid mevduat, büyük ^4,5 Kongo kırmızı lekeli hücre bloklarına hassasiyetini azaltır. Elektron mikroskobu ile yağ yastığı aspiratlar ultrastrüktürel değerlendirme daha iyi tekrarlanabilirlik ve gelişmiş hassasiyet ⁴ vardır. Bu nedenle, bir hücre bloğu iki hazırlık ve elektron mikroskobu ² gerçekleştirmek için tüm yağ yastığı aspiratlar göndermek için tavsiye edilir.

Fat pad aspirasyon sistemik amiloidoz tanısı için doku elde etmek için nispeten düşük maliyetli ve noninvaziv bir yöntemdir. Bu makale, elektron mikroskobu Kongo kırmızısı boyama ve ultrastrüktürel değerlendirme için numune göndermek için, numune işleme hakkında ayrıntılı bilgi ile birlikte yağ yastığı aspirasyon prosedürü anlatılmaktadır. Bu video, en iyi tanı malzeme almak için bu tekrarlanabilir ve basit bir prosedür ortaya koymaktadır.

1. Anterior Fat Pad FNA Sahne

A. yerel Anesthetization (Şekil 1 ve 2)

1. Alkol çubuklar veya belirli bir kurum tarafından tercih edilen cilt temizleme aracı kullanarak, orta hatta yan karın alt kadranda ve göbek (Şekil 1) altında cilt temizleyin.
2. Işaretleme kalemi ile Şekil 1'de gösterildiği gibi 2 x 2 inç hakkında rhomboid şeklinde bir alanı işaretleyin.
3. 18G iğne ile% 1 aspire yaklaşık 10 ml lidokain. 25G 1 ½ inç iğne şırıngaya takın. Sıvı dağıtılır ve herhangi bir hava kabarcığı kadar piston basarken dik şırınga dokunarak sıkışan havayı çıkarın.
4. Şekil 2'de gösterildiği gibi, daha önceden işaretlenmiş rhomboid alan sınırları boyunca anestezisi. A noktası sadece deri altında 25G iğne takarak başlayın ve X şırınga pistonu geri çekin bir gemi içinde olduğundan emin olmak için dikkatlice işaret deri altına iğne itin. Sonra yavaş yavaş iğne iğne ucu A (Şekil 2A3) cilt çıkıp izin vermeden bir noktaya kadar geri çekilirken, 2.5 mL lidokain (10 ml şırınga lidokain ¼ hakkında) kadar sızmak pistonu itin. Deri altına iğne ile hala noktası Y (Şekil 2A4) doğru yönünü değiştirmek ve iğne noktası Y (Şekil 2B1) subkutan itmek. Daha önce olduğu gibi yavaş yavaş noktası üzerinden iğne geri çekilirken, iğne, bir kap içinde olduğunu teyit ve yaklaşık 2,5 mL lidokain dağıtmak (2b4 yoluyla 2b3 Şekil). Noktaları B, X ve Y B (Şekil 2d4 yoluyla 2C1) B noktası ve dağıtım lidokain subkutan itibaren benzer adımları tekrarlayın. Azabı kanamayı önlemek A ve B steril göstergesi parçasının sağlam uygulama.
5. Şimdi hafifçe komşu unanesthetized deri ile karşılaştırarak, pamuk gazlı bez parçasının uç / köşe anestezi rhomboid içinde cilde temas alanı anestezi olduğunu kontrol edebilirsiniz.

B. yağ yastığı aspirasyonu (Şekil 3)

(Yağ yastığı aspirasyon performansı için önce lokal anestezi uygulanması, bölgesel ve bireysel tercihlerine göre, bypass olabilir. Anterior yağ yastığı aspirasyon Düzgün yapılan İİAB prosedürü tek dikmek içinde tamamlanabilir. Ancak, her hastanın ağrı eşiği bağlı , cilt altı yağ dokusu, ileri ve geri 18G iğne manevra nispeten distresşarkı. Anesthetization yöntemi burada sadece 25G iğne ile iki azabı etkiyi ve prosedürü geliştirilmiş hoşgörü ile ağrı kaçırır nitelendirdi.)

1. 10 ml şırınga üzerine 18G 1 ½ inç iğne birleştirin. Düzgün uygulama ve vakum serbest bırakılması için şırınga kavrama ("İİAB kavrama / silah") şırınga-iğne düzeneğini monte.
2. Derialtı yağ içine temizlenmiş ve anestezi rhomboid alanı (Şekil 3a) içinde iğne ucu takın.
3. Tam vakum (Şekil 3b) subkutan doku oluşturmak için takılan iğne şırınga pistonu geri çekin.
4. Vakum korumak ve derialtı yağ (Şekil 3c 3i yoluyla) çeşitli yönlerde iğne ileri ve geri manevra. Her vuruş iğne iğne cilt çıkıp izin vermeden seçilen süresini mümkün olduğunca uzun olmalıdır. Maksimum örnekleme her inme (Şekil 3i) yön değiştirerek elde edilir. Iğne, seroza teğet ve periton boşluğuna delinmesiyle önlemek için deri yüzeyine paralel yönde tutmak için önemlidir.
5. Fibroadipose doku şırınga içinde birikir. Bir kez yeterli fibroadipose doku parçaları (parçaları zengin kan karışık örnek 1 ml kadar) alınır, vakum tamamen serbest bırakılması ve iğne çıkarın (Şekil 3k).
6. Hasta veya yardımcısı, kan ekstravazasyonu önlemek için gazlı bez bir ped ile usul alanda sağlam bir baskı uygulamak.

2. Örnek İşleme

1. Elektron mikroskobu (Şekil 4B) glutaraldehid çözümü en az 5-6 fibroadipose doku parçaları yerleştirin.
2. Fibroadipose doku parçaları birkaç smear kurumsal protokolüne bağlı olarak, iki slayt (Şekil 4A) arasında yayarak hazırlanmış olabilir.
3. Kalan malzemeyi şırınga içinde pıhtı (pıhtılaşma zamanı bağlı olarak, 5-7 dakika sürebilir) (Şekil 4C) izin verilir.
4. Pıhtılaşmış fibroadipose doku malzemesi, şırınga ve serbest dalgalı (Şekil 4C2) duvardan yerinden böylece şırınga içinde% 10 formalin aspire. (Şekil 4C3) şırınga pistonu çıkarın ve meme ucunu şırınga (Şekil 4C4) karşısında açık sonundan itibaren% 10 formalin kap içine pıhtılaşmış fibroadipose doku transferi.
5. Uygun kaplarda Etiket ve elektron mikroskobu için glutaraldehit ve H & E bölümünde ve Kongo kırmızısı polarize mikroskobu altında değerlendirilmesi için leke formalin gönderin. Smear hazırsanız, onlar bireysel laboratuvar protokole göre işleme tabi tutulabilir.

Şekil 1. Anterior yağ yastığı İİAB için anestezi alan.

Şekil 2. Yerel Anesthetization.

Şekil 3. Anterior yağ yastığı İİAB Sahne.

Şekil 4. Anterior yağ yastığı İşleme aspire amiloid birikimi tespit için laboratuvara teslim edilecek.

3. Temsilcisi Sonuçlar

Şekil 5. Fibroadipose doku parçaları, küçük kan damarlarının duvar amiloid. Fibroadipose doku formalin ile işlenmiş, parafin Kongo kırmızısı ile boyanmış, gömülü ve ışık mikroskobu polarize tarafından incelenir. Küçük kan damarlarının duvarında amiloid yeşil elma birefringence (beyaz ok) gösterir.

Şekil 6. Doku amiloidoz eksik. Elma yeşil birefringence yok amiloidoz olmadan farklı bir hasta dokular. Kollajen lifleri Blue birefringence (beyaz ok), hemen hemen tüm örneklerinde genellikle mevcuttur.

Şekil 7. Kan damar duvarında amiloid ile uyumlu fibrillerin düz, non-dallanma Elektron mikrografı, 8-10 mil çapı fibriller, kan damar duvarında amiloid oluşan rastgele saçılan .

Tartışma

Amiloidoz tanısı genellikle etkilenen organlar böbrek, karaciğer, ve / veya kalp gibi bir doku biyopsisi ile elde edilir. Bu yaklaşım yüksek tanısal Ancak, invaziv olan ve kanama ² gibi komplikasyonlar ile ilişkili olabilir. Rektal, dişeti ve kemik iliği biyopsileri 1960'ların ^6,7,8 nispeten daha az invaziv bir yaklaşım olarak tanı için tercih edilmiştir. Karın yağ yastığı aspirasyon sistemik amiloidoz ¹ doku tanısı için güvenli, minimal invaziv, basit ve daha az pahalı bir prosedür olarak 1973 yılında rapor edilmiştir . Ancak, alınan numune işleme usul ve yaklaşımın detayları tutarlı değildir. Bu video ve makale prosedürü adım adım açıklanmaktadır.

Yağ yastığı aspirasyon amiloid tespit etmek için yaklaşım, benzer şekilde, aynı zamanda iyi bir kaç çalışmada, karşılaştırma ^ve 1,5,6,7,8 çeşitli yaklaşımların değerlendirilmesi standart değildir . Kongo kırmızısı boyası ile anterior yağ yastığı aspiratlar değerlendirilmesi, özellikle kıt amiloid ^mevduat 5 amiloidoz erken durumlarda daha düşük gözlemciler arası tekrarlanabilirlik ile daha az duyarlıdır. İmmünohistokimya formalin sabit parafine gömülü hücre bloku bölümleri üzerinde yapılan ve sitoloji smear üzerinde yapılan Kongo kırmızı floresan tanı duyarlılığı artırmak ^9,10 bildirilmiştir. Elektron mikroskobu, yağ pad ^{aspiratlarda 4,} 5 fibroadipose dokusunda küçük kan damarı duvarlarının kıt amiloid fibriller tespiti ve kimlik geliştirir . Bu bilgiye dayanarak, bu makale hazırlamak için hücre bloklarının (tanısal yeşil elma birefringence için polarize mikroskop altında Kongo kırmızı lekeli hücre bloklarına değerlendirme için ve ayrıca belirtilir immünohistokimya gibi) ve elektron mikroskobu için numune işlenmesi açıklamaktadır. Ancak, amiloid için örnek değerlendirme için seçilen yaklaşım bağlı olarak, sitoloji yayma hazırlanması, hücre blok hazırlanması ve elektron mikroskobu için işleme tabi olabilir. Bazı laboratuvarlar aspire fibroadipose doku parçaları hazırlanan ve Kongo kırmızısı ile boyanarak floresan ¹⁰ çalışma smear testleri.

Genellikle geç amiloidoz, Kongo kırmızısı polarizasyon mikroskobu ile ışık mikroskobu yeterli olabilir, ancak Kongo kırmızısı boyama hücre bloklarına mikroskobu polarize ile hastalığın erken aşamalarında yağ pedi aspiratlarda ^4,5,11 için daha az hassas ve güvenilir . Benzer kısıtlamaları Thioflavin T dahil olmak üzere diğer özel boyalar kullanılıyor olabilir. Amiloid algılamak için diğer yaklaşımlar, Kongo kırmızısı polarize mikroskopi ve ^floresan 10 ile amiloid aspirat smear değerlendirilmesi içerir . Bizim tecrübelerimize göre bu yöntem daha az tekrarlanabilir. Elektron mikroskobu ile amiloid için yağ ped kan damarlarının değerlendirilmesi bu sınırlamalar ^4,11 üstesinden gelir. Amiloid ileri karakterizasyonu immunoelectron mikroskopi ¹² tarafından rapor edilmiştir, ancak, bu yöntemler yaygın olarak olmayan bir üçüncü basamak ortamda kullanılabilir olmayabilir .

Aspirasyon prosedürleri gerçekleştirmek için kullanılan iğneler göstergesi ince içine boyutları (21-25G), orta (18-20G) ve büyük (örneğin-14G) ¹¹ göre kategorize olabilir. Anterior yağ yastığı özlemlerini ara (18 20G) ince (21 22G) ^2,10 arasında değişen değişken göstergeleri kullanılarak yapılması bildirilmiştir. Kitle lezyonları En iyi sitoloji smear hücre bloklarının için ek numune almak için daha geniş bir iğne (18G) ile ek geçiş ile birlikte elde etmek için, ince göstergesi iğneler (25G) ile aspire edilir.

Anterior yağ yastığı aspirasyon sırasında, yapışkan fibroadipose dokusu ince iğneler ile iyi aspire değildir. Hücre blok hazırlanması ve elektron mikroskobu, yağ aspiratlar fibroadipose doku parçaları küçük kan damarı duvarlarının değerlendirilmesi için önemlidir. Daha geniş ölçü iğneler (18G), tanı yeterli ^malzeme 2,10 verim tavsiye edilir . Prosedürü geleneksel İİAB karşılaştırılabilir olduğu gibi, daha geniş insülin iğnesi yağ yastığı aspirasyon ^bu 5 gerçekleştirmek için kullanılacak olsa bile İİAB olarak anılacaktır .

Malzemeler

Alkol çubuklar, gazlı bez, işaretleme kalemi, 10 ml şırınga x2,% 1 lidokain (lokal anestezik varsa lidokain tek başına kullanıldığında, instilasyon sonra bir ilk yanma hissi neden olur.% 1 1:1 karışım kullanılarak önlenebilir lidokain ve% 1 sodyum bi karbonat), 18 gauge (G) 1 ½ inç iğne x2 (İİAB gerçekleştirmek için), 25G 1 ½ inç iğne (lokal anestezik enjekte etmek için), ince iğne aspirasyon biyopsisi şırınga sahibinin ("gun"), bandaj, glutaraldehid flakon (elektron mikroskobu) ve% 10 formalin biyopsi konteyner.