Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Hücre Hatlarından Küresel Üretim: Üç Boyutlu (3D) Bir Hücre Kültürü Yöntemi

5K görüntülenme

⸱

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

Kaynak: Dillard, P., et al. CAR T Hücreleri ile Küresel Öldürme Testi. J. Vis. Uzm. (2018).

Spheroids, 2B hücre kültürü tek katmanlı modellere kıyasla bir hücrenin ortamını daha doğru bir şekilde temsil etmek için kullanılan bir tür 3B hücre kültürü modelidir. Örnek protokolde, bilim adamlarının bir kolorektal kanser hücre hattından sferoidler ürettiğini ve sferoidlerin büyümesini izlemek için canlı hücre görüntüleme uyguladığını göreceğiz.

Protokol

1. Kolorektal Kanser Hücre Hattından Sferoid Üretimi

  1. HCT 116'yı (Farklılaşma Kümesi 19 (CD19) ve Yeşil Floresan Proteini (GFP)) hücre tek katmanlarını fosfat tamponlu salin (PBS; 25 cm2 için 5 mL veya 75cm2 şişe için 10 mL) ile yıkayın. Tripsin ekleyin (25cm2 için 0.5 mL veya 75cm2 şişe için 1 mL) ve hücreleri 37 ° C'de 5 dakika inkübe edin.
  2. Mikroskop altında hücre ayrılmasını kontrol edin ve hücre ayrışma enzimini tam Roswell Park Memorial Institute 160 ortamı (RPMI 1640) ile nötralize edin (RPMI 1640 +% 10 FCS + Gentamisin; 25 cm2 için 10 mL veya 75 cm2 şişe içi....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Tuzlu SuyuSIGMA-ALDRICHD8537-500MLLot Numarası: RNBG7037
75 cm² büyüme alanı şişeleriVWR (VWR)430639Lot Numarası: 2218002
75 cm² büyüme alanı şişeleriVWR (VWR)734-2705Lot Numarası: 3718006
Tripsin-EDTASIGM-ALDRICHT3924-100mlLot Numarası: SLBTO777
RPMI 1640 med L-glutamin, 10 x 500 mLYaşam Teknolojisi (Gibco)21875-091Lot Numarası: 1926384
GentamicinTermo Fischer15750060Lot numarası: 1904924A
Tripan Mavisi Çözümü, %0,4Termo Fischer15250061Lot Numarası: 1886513
96 kuyulu plaka, yuvarlak altVWR (VWR)734-1797Lot Numarası: 33117036
X-VIVO 15, Gentamisin L-Gln ile, Fenol Kırmızısı, 1 LBiyoNordikaBE02-060QLot Numarası: 8MB036
Reaktif RezervuarıVWR (VWR)89094-672Lot numarası: 89094-672
15 mL tüplerVWR (VWR)734-1867Lot Numarası: 19317044
Fetal Sığır SerumuGibco (Gibco)10500064Lot Numarası: 08Q3066K
HCT 116 Kolorektal Karsinom HattıATCC (Uzay Servisi)CCL-247-
Incucyte S3Essen Biyobilim
Serisi Serisi

Daha fazla makale keşfet

3B Hücre KültürüHücre Hattı KültürüUltra Düşük Adezyonlu PlakalarCanlı Hücre GörüntülemeHemositometre SayımıSantrifüj ile ÇöktürmeAydınlık Alan GörüntülemeOtomatik Görüntüleme CihazıKolorektal Kanser Hücreleri