Kaçış Tepkisi Testi: Zebra Balığı Larvalarının Dokunma Uyaranlarına Tepkisini İncelemek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Sztal, T. E., et al. Zebra Balıklarında Kas Performansını ve İşlevini Değerlendirmek için Dokunma Uyarılmış Tepki ve Hareket Deneylerini Kullanma. J. Vis. Uzm.(2016)

Bu videoda, zebra balığı larvalarının dokunma uyaranlarına verdiği tepkiyi ölçen dokunma-uyarma tepkisi testi açıklanmaktadır.

Protokol

1. Dokunma ile Uyarılmış Tepki Testi

1. Dokunma ile Uyarılmış Yanıt Testi için 2 dpf Embriyonun Hazırlanması
   1. Testin yapıldığı günün saatinin deneyler arasında tutarlı olduğundan emin olun, çünkü aktivite gün boyunca önemli ölçüde değişebilir.
      NOT: Deney artefaktlarını en aza indirmek için deney kör olarak yapılmalı ve test sırası rastgele hale getirilmelidir.
   2. Balık türlerine, deneyi yapan kişi tarafından bilinmeyen bir sayı atayın. Bunu takiben, ücretsiz olarak kullanılabilen çevrimiçi araçları kullanarak, test sırasını belirleyen rastgele bir liste oluşturun.
   3. Testten en az bir saat önce, koryonda bir delik açarak ve bir çift ince cımbız kullanarak koryonu nazikçe çekerek embriyoları dekoryonlaştırın. 28 °C inkübatöre geri dönmeden önce petri kabındaki kalıntıları temizleyin.
2. Dokunma ile Uyarılmış Yanıt Testi Gerçekleştirme
   1. Teste başlamadan en az 15 dakika önce 28 °C'ye ısıtın.
      NOT: Bu aşama sıcaklık kontrollüdür ve test süresince 28 °C'de kalacaktır. Sıcaklık aktiviteyi etkileyecektir ve bu nedenle sabit bir sıcaklığın korunması önemlidir. Isıtılmış bir aşama mevcut değilse, suyun sıcaklığı izlenmeli ve tüm deneyler aynı sıcaklıkta yapılmalıdır.
   2. Embriyo ortamı (5 mM NaCl, 0.17mM KCl, 0.33 mM CaCl₂, suda 0.33 mM MgM 4) ile doldurulmuş bir petri kabını ışıklı bir sahneye yerleştirin.tage ve yüksek hızlı kamerayı petri kabının üzerine monte edin.
   3. Video kamera kayıt yazılımını (burada açıklanan Stream Pix 5 gibi) başlatın ve balığın hızlı yüzme hareketinin kaydedildiğinden emin olmak için "çalışma alanı" sekmesi altında yakalama hızı olarak saniyede 1.000 kare (1.000 fps) seçin.
   4. Her seferinde bir embriyo ile çalışarak, embriyoyu zebra balığı görüş alanında açıkça görünecek şekilde petri kabının ortasına yerleştirin.
      NOT: Embriyo deney başlamadan önce yüzerek uzaklaşırsa, embriyonun yeniden yakalanması ve konumlandırılması uyarana karşı duyarsızlaşmasına neden olabileceğinden ve tekrarlanan patlama tepkileri bazı hastalık modellerinde kas güçsüzlüğünü teşvik edebileceğinden, onu bir başkasıyla değiştirin.
   5. "Kaydet" düğmesine tıklayarak kayda başlayın ve mekanosensoriyel uyaranı başın üst kısmındaki künt bir iğne ile hafifçe dokunarak embriyoya iletin.
   6. Embriyo görüş alanından çıktıktan veya dinlenmeye döndükten sonra kaydı durdurun.
      NOT: İvme, mekanik uyaranı takip eden patlama kaçış tepkisinin ilk 0.2 saniyesi içinde zirve yapar. Bu nedenle, kaçış tepkisi kaydının en azından ilk 0,2 saniyesinde balığın görüş alanında olduğundan emin olun. Stream Pix 5 yazılımını kullanarak, veriler otomatik olarak .avi bir video dosyası olarak kaydedilecektir. Her ikisi de ücretsiz olarak indirilebilen Free Video Capture veya Softonic gibi alternatif video yakalama yazılımları da kullanılabilir.
   7. Embriyoyu yeni bir petri kabına geri koyun ve test için başka bir embriyo seçin. En az 15 balık üzerinde test yapın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
90 mm Petri Kapları	Pasifik Laboratuvar Ürünleri	PT S90001
Cımbız, stil 8	ProSciTech	T04-821
kuvöz	Termoline Bilimsel	TEI-43L
Yüksek Hızlı Kamera	Baumer Belediyesi	HXC20
Akış Pix5	NorPix (İngilizce		Adım 1.2.3
Sıcaklık Kontrol Ünitesi	bakış açısı
http://www.randomization.com	Yok		Adımlar 1.1.2