Aydınlık-Koyu Tercih Testi: Zebra Balıklarında Kaygı ile İlgili Davranışları İncelemek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Holcombe, A., et al. Birden Fazla Zebra Balığına (Danio rerio) İlaç Uygulamasının Yeni Bir Yöntemi ve Geri Çekilmenin Ölçülmesi. J. Vis. Uzm.(2014)

Video, etanole maruz kaldıktan sonra zebra balıklarında anksiyete ile ilgili davranışı incelemek için aydınlık-koyu tercih testini açıklamaktadır.

Protokol

1. Davranış Testi

1. Beyaz su geçirmez bir zemine sahip 9,5 cm genişliğinde, 55 cm uzunluğunda ve 9,5 cm derinliğinde açık/koyu bir arena elde edin (Şekil 1B). Arenanın yarısı beyaz, yarısı siyah kaplı olacak şekilde cırt cırt kullanarak arenanın iç duvarlarına beyaz ve siyah su geçirmez yansıtıcı olmayan kağıt yapıştırın. Arenayı 5 cm derinliğe kadar 25-28 °C sıcaklıktaki habitat suyu ile doldurun. Test boyunca bu sıcaklığı koruyun.
2. Arenanın yerleştirilmesi için üç taraflı beyaz bir muhafaza inşa ederek dış görsel uyaranları en aza indirin. Test alanının, su yüzeyinde yansımalara neden olmayan, ancak hareket izleme yazılımı veya video görüntülerinden post-hoc manuel niceleme için yeterince parlak olan dağınık tavan aydınlatmasına sahip olduğundan emin olun.
3. Arenayı muhafazaya yerleştirin ve davranış izleme yazılımının kayıt ve hareket analizi parametrelerini ayarlayın. Araştırma sorusuna bağlı olarak deneme süresini 5-15 dakika olarak ayarlayın.
   NOT: Burada 5 dk kullandık.
4. Test edilecek balık grubunu habitat tankındaki araştırma alanına taşıyın ve onları arena muhafazasının dışına yerleştirin. Balıkları 10 dakika boyunca alıştırın.
5. Uygun gruptan bir balığı nazikçe ağa bağlayın ve aydınlık/karanlık arenanın ortasına yerleştirin, balığın açık veya karanlık bölgeye yönelmesini önlemek için arenanın uzun eksenine paralel olarak konumlandırıldığında balığı serbest bıraktığınızdan emin olun.
6. Hayvan serbest bırakıldıktan hemen sonra davranışı kaydetmeye başlayın. Balıkların izlenmesi veya balıkların zıplaması veya donması ile ilgili herhangi bir yazılım sorunu olup olmadığına dikkat edin. Deneklerin yarısı test edildikten sonra arenayı 180° döndürün, arenanın hangi ucunun muhafazanın açık ucuna doğru yönlendirildiğinden kaynaklanan önyargılardan kaynaklanan karışıklıkları önlemek için.
7. Deneme sona erdikten sonra, balıkları arenadan bir bekletme tankına veya habitat tankına nazikçe ağ ile bağlayın ve çıkarın.

2. Analiz

1. Aydınlık ve karanlık bölgelerde geçirilen zamanı inceleyin. Her grup ve her balık için, aydınlık ve karanlık bölgelerde geçirilen göreceli süreyi elde edin ve grupların bir alanı diğerine göre önemli ölçüde tercih edip etmediğini belirlemek için tek bir örnek t-testi (veya parametrik olmayan veriler için Wilcoxon işaretli sıra testi; (toplam deneme süresinin yarısı) 150 saniyeden fark) kullanarak analiz edin.
2. Tercihleri karşılaştırmak için, aydınlık bölgede geçirilen süreyi karanlık bölgede geçirilen süreden çıkararak bir tercih indeksi hesaplayın ve gruplar arasındaki farkları karşılaştırın. İki grubu karşılaştırmak için t-testleri kullanılabilir. Gerektiğinde Tukey'in HSD post hoc testini (veya parametrik olmayan veriler için Dunn'ın çoklu karşılaştırma post hoc testi ile Kruskal-Wallis testini) kullanarak tek yönlü bir varyans analizi ile birden fazla grubu karşılaştırın.
3. Gruplar arasında hızı, bölge geçişlerinin sayısını, dolambaçlı hareketleri ve hareketsizliği karşılaştırın. Gerektiğinde Tukey'in HSD post hoc testini (veya parametrik olmayan veriler için Dunn'ın çoklu karşılaştırma post hoc testi ile Kruskal-Wallis testini) kullanarak tek yönlü varyans analizi kullanın.

Sonuçlar

Şekil 1: Aktarım Prosedürü ve Aydınlık/Karanlık arenası. Bu fotoğraflar transfer prosedürünü göstermektedir. (A) İlk olarak, balıklar transfer tankına yerleştirilir (solda). Etanol içeren dozaj tankı resimde gösterilmiştir (sağda). (B-C) Balığın transfer tankından etanol çözeltisine taşınması, araştırmacının yumurtlama ekini transfer tankından çıkarıp etanol çözeltisi tankına kaldırmasını...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Aydınlık/Karanlık Arena	töre		Prosedür açıklamasına göre oluşturun. 9,5 cm genişliğinde, 9,5 cm derinliğinde, 55 cm uzunluğunda.
Üç raflı tezgah üstü muhafaza sistemi	Sucul Yaşam Alanları	Yok
1,5 L Yumurtlama tankı, 400 μm bölmeli	Sucul Yaşam Alanları	Yok
Ethovision XT Hareket izleme yazılımı	Noldus Bilişim Teknolojileri
Saf Tahıl Etanol	Luxco, A.Ş	Yok