Zebra Balığı Kaçınma ve Timotaksis Deneyi: Caydırıcı Görsel Uyarana Yanıt Olarak Larva Davranışını İncelemek İçin Yüksek Verimli Bir Yöntem

Abstract

Kaynak: Richendrfer, H., et al. Zebra Balığı Larvalarında Otomatik Yüksek Verimli Davranış Analizleri. J. Vis. Uzm.(2013)

Video, zebra balığı larvalarının kaçınma ve timotaksis testini anlatıyor. Video, zebra balığı larvalarının görsel caydırıcı uyarana yanıt olarak davranışlarını inceler.

Protocol

1. Görüntü Yakalama

1. Plakaların her şeridine 20'ye kadar larva yerleştirilebilir. Tipik olarak, yüzme hızının en doğru şekilde izlenmesini kolaylaştırmak ve deney başına ihtiyaç duyulan larva sayısını azaltmak için şerit başına 5 larva kullanılır. Şeritler, deneye bağlı olarak farmasötik veya toksik maddeler olsun veya olmasın yumurta suyu ile doldurulabilir. Bununla birlikte, şeritler görüntüleme kabinlerine yerleştirilene kadar tamamen doldurulmamalıdır; Bu, taşmayı önleyecektir. Tutarlılık için larvalar, agaroz kalıplarına yerleştirildikten ve dizüstü bilgisayar ekranının üstüne yerleştirildikten sonra on dakikalık bir iklimlendirme periyoduna sahip olmalıdır. Larvaları Petri kabından agaroz şeridine verimli bir şekilde taşımak, larva stresini azaltmaya yardımcı olacaktır. Bu, larvalar sığ tanklara veya Petri kaplarına yerleştirildiğinde en kolay olanıdır.
2. Görüntüleme kabinleri, hızlandırılmış fotoğrafçılık için kullanılan bir Canon dijital kamera ve bir dizüstü bilgisayar içerir. Kamera, kabinin üst kısmına yerleştirilmeli ve 15.6 inç ekranlı bir dizüstü bilgisayarın ekranı yukarı bakacak şekilde yerleştirilmesi gereken kabinin altına doğru yönlendirilmelidir (Şekil 1). Dört plaka elle doğrudan dizüstü bilgisayar ekranının üzerine yerleştirilmelidir. Şu anda, şeritler, şeridin üst kısmı ile aynı hizada olacak şekilde yumurta suyu veya kimyasal işlemle doldurulabilir (görüntülerdeki şeritlerin kenarlarındaki gölgeleri ortadan kaldırmak için).
3. Bir PowerPoint sunumu, larvalar için caydırıcı bir uyaran olarak kullanılır. Geçmişte, zebra balığı larvalarına 6 veya 12 çok kuyulu plakada hareketli kırmızı toplar gösterildi. Geçerli PowerPoint, 15 dakika boyunca boş beyaz bir arka planla başlar, ardından plakanın üst yarısında 15 dakika boyunca hareketli bir kırmızı çubuk gelir (Şekil 2). Larvaların aşırı ısınmasını önlemek için, ekran sıcaklığı 28 °C'nin üzerine çıkmayan bir dizüstü bilgisayar satın almak en iyisidir. Agaroz şeritleri içindeki sıvının buharlaşmasını önlemek için, maksimum görüntüleme süresi bir saatin altında tutulmalıdır.
4. Dijital kamera, deney başına toplam 300 görüntü için her 6 saniyede bir fotoğraf çekerek hızlandırılmış fotoğrafçılık için programlanmalıdır. Bununla birlikte, frekans ve uzunluk, deneye ve davranışsal nicelemeye bağlı olarak ayarlanabilir. Geçmişte, her görüntü arasında daha uzun aralıklar kullanılarak uzatılmış görüntüleme süreleri kullanılıyordu. Kamera, video hızında (saniyede 30 kare) görüntüleme için daha düşük bir çözünürlüğe ayarlanabilir. Daha düşük çözünürlük, kayıtları tek bir çok kuyulu plaka ile sınırlarken, video kayıtları hızlı yüzme olaylarını görüntülemek için uygundur.

Results

Şekil 1. Görüntüleme Kabinleri. Görüntüleme kabinleri laboratuvarımızda özel olarak inşa edildi ve yüksek verimli davranışsal analizler için kullanıldı. 15 megapiksellik bir dijital kamera, bir dizüstü bilgisayarın ekranının üstüne yerleştirilen çok şeritli plakalarda larvaların hızlandırılmış görüntülerini toplamak için kabinin üst kısmına aşağı bakacak şekilde takıldı. Plakalar ve ekran arasında, toplanan görüntülerde h...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Görüntüleme Kabinleri	Ahşap El Sanatları Kuleleri
agaroz	balıkçı	BP1356-100
Dijital fotoğraf makinesi	Canon EOS	Asi T1i
Dizüstü	Acer Aspire (Acer Aspire)		15.6 inç olduğu sürece herhangi biri iyidir. 1366 x 768 piksel çözünürlüğe ve 220 cd/m2 parlaklığa sahip LCD ekran.
Bir kuyucuklu plakalar	balıkçı	12-565-493
PowerPoint 2010 (İngilizce	Microsoft Bilişim Sistemleri
Plastik difüzör	Pendaflex (Pendaflex	52345