Göz Lensi Diseksiyonu: Zebra Balığı Lens Morfolojisini Gözlemlemek İçin Bir Teknik

Bu makalede

Özet

Kaynak: Vorontsova I. ve diğerleri, Zebra Balığı Lens Çekirdeği Lokalizasyonu ve Sütür Bütünlüğünün Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2019).

Bu videoda, kortikal lens morfolojisini ve lens sütürlerinin yapısal bütünlüğünü analiz etmek için yetişkin ve larva zebra balığı lenslerini incelemek için geliştirilen protokol açıklanmaktadır.

Protokol

1. Larva ve Yetişkin Zebra Balığı Lenslerinin Diseksiyonu

Balıkları 6 dpf larvadan yetişkinliğe kadar tricaine ile dokunmaya yanıt vermeyene kadar ancak yine de güçlü bir kalp atışı gösterene kadar uyuşturun. Sahneleme için Schilling'e (2002) göre balık standart uzunluğunu ölçün.
Mikro diseksiyon makası kullanarak gözleri hemen eksize edin ve PBS'de bir diseksiyon kabına yerleştirin (yetişkin gözler için gösterilen Şekil 1).
1. Lens diseksiyonları için silikonla doldurulmuş 35 mm'lik özel bir tabak yapın. Silikon sertleştikten sonra, diseksiyon sırasında yetişkin gözlerini / lenslerini hareketsiz hale getirmek için yaklaşık 2-3 mm çapında ve 0,5 mm derinliğinde bir divot çıkarın.
Erişkin zebra balığı lenslerinin diseksiyonu
1. PBS ile doldurulmuş tabağın arka tarafı yukarı bakacak şekilde yetişkin bir göz yerleştirin. Optik diskin içinden <45° açıyla forseps sokarak gözü hareketsiz hale getirin. Lensi çentiklememeye veya sıkıştırmamaya dikkat edin. Diseksiyon makası ile optik diskten siliyer bölgeye retina ve sklera yoluyla iki veya üç radyal kesi yapın.
2. Retina ve sklerayı çiçek yaprakları gibi soyun ve gözü kornea tarafı yukarı bakacak şekilde ters çevirin. Makasın düz tarafı ile sklera ve korneayı manipüle ederek lensi dolaylı olarak hareketsiz hale getirirken, retinayı ve bağlı dokuları forseps ile çekin. Lensteki fazla dokuyu dikkatlice kesin.
  not: Sürekli olarak sağlıklı lensler elde etmek için dikkatli bir şekilde incelemek çok önemlidir.
Larva zebra balığı lenslerinin diseksiyonu
1. PBS ile doldurulmuş silikon kabın düz kısmına bir larva gözü arka tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve gözü başka bir tungsten iğnesi veya forseps ile hareketsiz hale getirirken retina ve skleradan radyal kesimler yapmak için keskinleştirilmiş bir tungsten iğnesi kullanın.
  not: Lense zarar vermemeye dikkat edin.
  1. 2 cm uzunluğundaki 0.1 mm tungsten telin ucunu, tel ucunu %10 (a/h) NaOH'ye asarak ve düşük voltajlı alternatif akım14 uygulayarak elektrolitik olarak keskinleştirin. Cam ucunu bir Bunsen brülörü kullanarak eriterek iğneyi bir Pasteur pipetine sabitleyin.
    not: Alternatif ince diseksiyon aletleri de kullanılabilir.
    Dikkat: NaOH aşındırıcıdır.
2. İğnenin künt bir tarafı ile lensi ayrışmış gözden nazikçe çıkarın ve bağlı dokuyu dikkatlice çekin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Balık gözü diseksiyon mikroskobu görüntüleri; ön/arka görünümler, lens çıkarma, 2 mm ölçek çubukları.
Resim 1: Zebra balığı lens diseksiyonu. (A) Anestezi uygulanmış balıklardan gözler çıkarılır ve arka tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirilir (B). (C) Gözler, optik disk (od) yoluyla forseps ile hareketsiz hale getirilir ve retina ve sklerada optik diskten zonüllere iki ila ...